一种检测早期肿瘤的标志物及其用途制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，涉及一种具有特异性的标志物,具体涉及一种诊断早期肿瘤的标志物、检测试剂盒及其应用。本发明专利技术提供了Rasal2磷酸化的肿瘤检测标志物，其与肿瘤的发生、发展、病人的预后以及产生化疗耐药性能力密切相关，能够根据该比值判断不同肿瘤的发生、发展以及耐药性等；p

【技术实现步骤摘要】
一种检测早期肿瘤的标志物及其用途


[0001]本专利技术属生物医药
，涉及一种具有特异性的标志物，具体涉及一种诊断早期肿瘤的标志物、检测试剂盒及其用途。

技术介绍

[0002]现有技术公开了肿瘤是严重威胁人类健康的疾病，临床实践显示，大部分的肿瘤在确诊时已经到了晚期，失去了手术的意义；因此肿瘤的早期诊断和综合治疗可以显著提高疗效和改善预后。肿瘤标志物是肿瘤细胞产生或宿主对肿瘤刺激异常产生或表达的一类特异性物质，对肿瘤的临床诊断、治疗和预后监测起重要作用。
[0003]目前比较公认的肿瘤标志物包括组织特异性的标志物，如雌激素受体ER(乳腺癌)、前列腺特异性抗原PSA(前列腺癌)等，也包括多组织通用的标志物如上皮生长因子受体EGFR(结直肠癌、肺癌等)、原癌基因Her-2/neu(乳腺癌、胃癌等)。部分肿瘤标志物还可用于预测对治疗措施(包括药物化疗、放射治疗、免疫治疗)的敏感性。除了传统的蛋白类标志物以外，近年随着新技术的发展和新概念的提出，部分核酸类分子如miRNA也被作为肿瘤标志物。
[0004]众所周知，Ras过度激活是导致肿瘤发生和发展的一个重要因素，Ras GAPs通过增加Ras GTPase酶活性促进GTP转化为GDP从而抑制Ras的活性。Rasal2属于Ras GAPs的一种，因此被认为是一种肿瘤抑制因子，在大部分的癌症组织中表达偏低，如管腔B型乳腺癌、肺癌、卵巢癌、膀胱癌和鼻咽癌等等；然而，在三阴性乳腺癌(TNBC)中,Rasal2过表达，同时促进肿瘤的侵袭，发挥致癌作用；在结直肠癌，Rasal2通过上调LATS2/YAP1信号通路，能够促进结直肠癌的发生和发展；因此，Rasal2在癌症中的作用与肿瘤的不同类型以及同种肿瘤的不同亚型有关。
[0005]虽然肿瘤标志物的研究如火如荼，各种生物大分子在肿瘤中的差异表达的研究也不断深入，但是符合临床使用标准的肿瘤标志物仍然非常有限。基于现有技术的现状与基础，本申请的专利技术人拟提供一种具有特异性的标志物，具体涉及一种诊断早期肿瘤的标志物、检测试剂盒及其用途。

技术实现思路

[0006]本专利技术要解决的技术问题是提供一种可用于肿瘤的临床诊断、治疗和预后监测的特异性标志物。具体涉及一种诊断早期肿瘤的标志物、检测试剂盒及其用途。
[0007]本专利技术基于在研究Rasal2的信号通路过程中，发现了即使Rasal2蛋白表达在肿瘤的不同类型以及同种肿瘤的不同亚型中有差异，Rasal2第123位磷酸化却能够普遍的、有效的诱导自噬的形成，从而增加肿瘤对于外界应激的抵抗和耐药性的产生，促进肿瘤的发生和发展。相比于Rasal2表达对肿瘤发生和发展的影响存在抑制或促进的两种矛盾的作用方式，Rasal2第123位磷酸化在肿瘤有着普遍的一致性，并且Rasal2磷酸化与Rasal2表达量的比值(即：p-S123-Rasal2/Rasal2)在正常细胞和组织几乎接近于0，而在肿瘤细胞和组织中
却有很高的表达，并且该比值与肿瘤的耐药性，肿瘤的级别，分化程度以及预后均呈明显正相关；因此，Rasal2第123位磷酸化水平与Rasal2蛋白表达水平的比值(即：p-S123-Rasal2/Rasal2)的高低，能够预示肿瘤的发生和发展，以及对化疗产生耐药性能力的强弱，具有重要的临床应用意义。
[0008]本专利技术提供了一种肿瘤检测标志物，所述的肿瘤检测标志物含有磷酸化的Rasal2多肽。
[0009]所述的磷酸化的Rasal2多肽含有序列如EQQTDSTKGRC(SEQ ID NO 8)所示的多肽。其中，S即为(第123位)磷酸化位点。
[0010]制备抗原肽时，可以在前端或末端添加半胱氨酸(Cys)得到抗原肽。
[0011]所述的肿瘤检测标志物含有第123位氨基酸磷酸化的Rasal2多肽。
[0012]另一方面，本专利技术提供了所述的肿瘤检测标志物的用途，即磷酸化的Rasal2在制备肿瘤检测标志物中的用途。
[0013]本专利技术提供了磷酸化的Rasal2多肽，经研究显示，所述的肿瘤标志物，即Rasal2第123位磷酸化水平与Rasal2蛋白表达水平的比值(即：p-S123-Rasal2/Rasal2)；该比值在正常细胞和组织几乎接近于0，而在肿瘤细胞和组织中却有很高的表达，并且该比值与肿瘤的耐药性，肿瘤的级别，分化程度以及预后均呈明显正相关；研究结果表明，检测该肿瘤标志物，即Rasal2第123位磷酸化水平与Rasal2蛋白表达水平的比值(即：p-S123-Rasal2/Rasal2)的方法可作为一种特异的早期检测肿瘤的方法；本专利技术提供的所述的方法可用于对高危人群肿瘤的诊断、筛查，肿瘤患者的预后和耐药性的判断，以及肿瘤治疗干预中。
[0014]例如，本专利技术的一个优选实施例中，提供了第123位氨基酸磷酸化的Rasal2在制备肿瘤检测标志物中的应用。
[0015]例如，所述的第123位氨基酸磷酸化的Rasal2与Rasal2含量(p-S123-Rasal2/Rasal2)比值显著高于正常组织中p-S123-Rasal2/Rasal2，则样本含有肿瘤样本的概率高。
[0016]所述的Rasal2的酸磷化与肿瘤的耐药性、肿瘤的级别、分化程度以及预后均呈明显正相关。
[0017]本专利技术的磷酸化的Rasal2多肽可用于筛选抗肿瘤药物。
[0018]本专利技术中，所述的应用包括将第123位氨基酸磷酸化的Rasal2抗体与样本的蛋白提取物杂交的步骤。
[0019]相应的，本专利技术提供了一种抗体，所述的抗体能够识别第123位氨基酸磷酸化的Rasal2多肽。
[0020]另一方面，本专利技术提供了一种肿瘤检测试剂盒，所述的肿瘤检测试剂盒含有的抗体能够识别磷酸化的Rasal2多肽。
[0021]所述的肿瘤检测试剂盒还含有作为阳性参照的磷酸化的Rasal2多肽。
[0022]本专利技术技术效果是：
[0023]Rasal2和123位磷酸化的Rasal2在不同肿瘤的不同时期均有表达，但是Rasal2第123位磷酸化水平与Rasal2蛋白表达水平的比值(即：p-S123-Rasal2/Rasal2)却与肿瘤的发生、发展、病人的预后以及产生化疗耐药性能力密切相关，因此能够根据该比值判断不同肿瘤的发生、发展以及耐药性等；p-S123-Rasal2可以作为肿瘤治疗的靶点，通过对其表达的改变，提供新的肿瘤治疗策略；本专利技术所述标志物特异性强，且适用于多种类型的肿瘤。
附图说明
[0024]图1化疗药物增加Rasal2的磷酸化。
[0025]图2 Rasal2磷酸化肽段序列以及位点。
[0026]图3 Rasal2第123位磷酸化抗体特异性的检测。
[0027]图4 Western Blot实验检测Rasal2第123位磷酸化后自噬相关蛋白的表达。
[0028]图5免疫荧光显示Rasal2第123位磷酸化后自噬小体的变化。
[0029]图6 Rasal2第123本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤检测标志物，其特征在于，所述的肿瘤检测标志物含有磷酸化的Rasal2多肽；所述的磷酸化的Rasal2多肽含有序列如EQQTDSTKGRC所示的多肽，其中S为磷酸化的丝氨酸。2.如权利要求1所述的肿瘤检测标志物，其特征在于，所述的肿瘤检测标志物含有Rasal2多肽和/或第123位氨基酸磷酸化的Rasal2多肽。3.权利要求1所述的肿瘤检测标志物在制备肿瘤检测药物或者试剂中的用途。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的Rasal2的酸磷化与肿瘤的耐药性、肿瘤的级别、分化程度以及预后均呈明显正相关。5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的磷酸化的Rasal2多肽用于制备筛选抗肿瘤药物。6.如权利要求3所述的用途，其特征在于，在肿瘤检测样本中，所述的第123...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱忠明，包勇，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：