一种基因抑制剂在制备缺血性心脏病治疗药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种基因抑制剂在制备缺血性心脏病治疗药物中的应用，属于心脏医学技术领域。本发明专利技术所提供的基因抑制剂为下调基因RP11

【技术实现步骤摘要】
一种基因抑制剂在制备缺血性心脏病治疗药物中的应用
[0001]本案为分案申请，原申请的专利技术名称为：一种冠状动脉内皮细胞血管生成促进剂，原申请的申请日为： 2021
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01
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15，原申请的申请号为：CN202110052771.5。


[0002]本专利技术属于心脏医学
，尤其涉及一种基因抑制剂在制备缺血性心脏病治疗药物中的应用。

技术介绍

[0003]缺血性心脏病也被称为冠心病，是指由于冠状动脉粥样硬化使官腔狭窄或梗阻导致心肌缺血、缺氧或坏死而引发的心脏病，包括无症状性心肌缺血、心绞痛、心肌梗死、缺血性心力衰竭和心脏骤停。随着生活水平的不断提高，缺血性心脏病已经成为全球死亡的首要原因。缺血性心脏病患者主要通过建立心脏侧支循环来进行补充与代偿。在患者的急性血管闭塞时，可以通过血管原位膨大或延长生长与官腔扩张的方式进行治疗。而，当患者的慢性冠状动脉闭塞时，可以通过促进血管新生因子生成毛细血管的方式进行治疗。
[0004]尽管。目前临床上治疗缺血性心脏病的药物众多，但是由于缺血性心脏病的病理和生理机制十分复杂，因此单靶点药物治疗的效果并不理想。在这种情况下，血管新生成为了新的极具潜力的研究方向。通过治疗性血管新生能够有效的促进缺血心肌周围的血管生长，建立侧支循环，改善患者的缺血缺氧症状。因此，研究冠状动脉的血管生成有助于进一步治疗缺血性心脏病。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种冠状动脉内皮细胞血管生成促进剂。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：本专利技术提供了一种RP11
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71G12.1基因作为靶点分子在促进血管生成中的应用，所述RP11
‑
71G12.1基因的External Transcript ID为ENST00000457239.1，所述ENST00000457239.1的序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]此外，本专利技术提供了一种治疗缺血性心脏病的siRNA，所述siRNA为基因RP11
‑
71G12.1的siRNA,所述siRNA的正义链序列如SEQ ID NO.2所示，所述siRNA的反义链序列如SEQ ID NO.3所示。
[0008]此外，本专利技术提供了基因RP11
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71G12.1的抑制剂在制备治疗缺血性心脏病药物中的应用。
[0009]优选地，所述基因RP11
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71G12.1的抑制剂为RP11
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71G12.1的siRNA，所述siRNA的正义链序列如SEQ ID NO.2所示，所述siRNA的反义链如SEQ ID NO.3所示。
[0010]此外，本专利技术提供了基因RP11
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71G12.1的抑制剂在制备人冠状动脉内皮细胞增殖促进剂中的应用。
[0011]优选地，所述基因RP11
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71G12.1的抑制剂为RP11
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71G12.1的siRNA，所述siRNA的
正义链序列如SEQ ID NO.2所示，所述siRNA的反义链如SEQ ID NO.3所示。
[0012]此外，基因RP11
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71G12.1的促进剂在制备人冠状动脉内皮细胞血管生成促进剂中的应用。
[0013]优选地，所述基因RP11
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71G12.1的抑制剂为RP11
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71G12.1的siRNA，所述siRNA的正义链序列如SEQ ID NO.2所示，所述siRNA的反义链如SEQ ID NO.3所示。
[0014]本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种能够有效抑制基因RP11
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71G12.1的siRNA；其次，本专利技术首次发现下调RP11
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71G12.1能够有效的促进冠状动脉血管内皮细胞增殖和血管生成，因此可将RP11
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71G12.1的siRNA用于制备治疗缺血性心脏病的药物，为治疗缺血性心脏病提供新的治疗方向。
附图说明
[0015]图1 si
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RP11
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71G12.1的敲减效果检测图；图2下调si
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RP11
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71G12.1对于HCAEC细胞的细胞增殖的影响；图3 下调si
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RP11
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71G12.1对于HCAEC细胞血管形成的影响；图4 下调si
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RP11
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71G12.1对于血管内皮生长因子A表达的影响。
具体实施方式
[0016]为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。
[0017]实施例1设计和验证RP11
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71G12.1的siRNA（A）设计RP11
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71G12.1 siRNA根据RP11
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71G12.1基因序列所设计的siRNA如下：正义链：5
’‑
UUCUUCUUCUUCUUCUUCCCA
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3，SEQ ID NO.2；反义链：5
’‑
GGAAGAAGAAGAAGAAGAAAG
‑3’
，SEQ ID NO.3；（B）验证si
‑ꢀ
RP11
‑
71G12.1的抑制效果1.提取转染si
‑
NC和si
‑
RP11
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71G12.1的人冠状动脉内皮细胞（HCAEC细胞）的RNA（1）将HCAEC细胞接种于细胞培养板中，按照lip2000说明书转染si
‑
NC和si
‑ꢀ
RP11
‑
71G12.1，每组设置3个重复；（2）转染48h后，去除培养基，使用PBS洗涤细胞3次，每孔加入1ml Trizol，吹打混匀之后，室温静置5min；（3）将细胞转移至EP管中，加入200μl的氯仿，混匀后，室温静置5min；（4）调整离心机参数为4℃，12000rpm/min，离心15min；（5）离心之后，小心的吸取上层的水相至新的EP管中；（6）加入等体积预冷的异丙醇，混匀后，室温静置10min，4℃ 12000rpm/min 离心10min；（7）弃去上清，加入DEPC水配置的75%乙醇洗涤沉淀；（8）调整离心机参数为4℃，8000rpm/min，离心5min；（9）弃去上清，置于超净工作台中干燥至乙醇完全蒸发，加入30μl DEPC水。
[0018]2.逆转录得到cDNA（1）去除基因组DNA反应体系如下：试剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
添加量5
×
gDNAEraserBuffer2.0μlgDNAEraser1μl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
TotalRNA1μ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基因RP11
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71G12.1的抑制剂在制备治疗缺血性心脏病药物中的应用,其特征在于，所述基因RP11
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71G12.1的抑制剂为RP11
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71G12.1的siRNA，所述siRNA的正义链序列如SEQ ID NO.2所示，所述siRNA的反义链如SEQ ID NO.3所示。2.基因RP11
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71G12.1的抑制剂在制备人冠状动脉内皮细胞血管生成促进剂中的应用，所述基因RP11
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71G12.1的抑制剂为RP11

【专利技术属性】
技术研发人员：刘婧星，王颖翠，
申请(专利权)人：青岛市第九人民医院，
类型：发明
国别省市：