一种灵芝二次发酵液的制备方法、发酵液及其应用技术

本发明专利技术公开一种灵芝二次发酵液的制备方法、发酵液及其应用，所述制备方法包括以下步骤：步骤1)灵芝深层液体发酵物的制备；步骤2)将灵芝深层液体发酵物过滤，得到灵芝菌丝体；步骤3)将灵芝菌丝体加入至缓冲体系中，在适宜的条件下进行酶解；步骤4)将酶解后的得到灵芝菌丝体酶解混合物加入乳酸菌发酵；步骤5)再加入酵母菌再次进行发酵；步骤6)将步骤5)得到的发酵体系离心过滤，取上层清液，得到灵芝二次发酵液。灵芝深层液体发酵物，经充分的酶解和降解之后，添加蔗糖为补充碳源，再经由乳酸菌和酵母菌发酵，获得的灵芝二次发酵液富含小分子功能物质，具有良好的抗氧化和美白功效。具有良好的抗氧化和美白功效。具有良好的抗氧化和美白功效。

【技术实现步骤摘要】
一种灵芝二次发酵液的制备方法、发酵液及其应用


[0001]本专利技术涉及发酵领域，特别涉及一种制备灵芝发酵液的方法、发酵液及其应用。

技术介绍

[0002]灵芝是多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum或紫芝Ganoderma sinense，灵芝发酵液具有活性成分含量高、抗氧化能力强且美白效果好的优点，可广泛应用于化妆品领域(专利CN201711249255.1)。然而，经由液体深层发酵后，过滤或离心后所获得的菌丝体缺乏良好的下游用途，在工业化大规模生产中造成了极大的资源浪费和环境污染。
[0003]灵芝菌丝体中富含灵芝多糖、蛋白质、游离氨基酸及微量元素等多种营养物，利用益生菌对灵芝菌丝体作二次发酵，可使这些内容物析出到发酵液中，并经过益生菌在发酵过程中的新陈代谢作用，分解成更加小分子量的活性物质；或者根据不同的益生菌生理生化特性，可产生新型活性物质。
[0004]对灵芝菌丝体的菌体细胞进行破壁，并将胞内内含物中的大分子物质降解成更适于益生菌新城代谢的小分子物质，是灵芝菌丝体进行二次发酵前的必经步骤。然而由于真菌的细胞壁较厚，胞内内含物组分复杂，因此，选取适宜的菌体破壁和大分子降解途径是二次发酵液活性升高、发酵体系稳定的重要前提。目前，用于菌体破壁的方式主要是利用商品化生物酶对菌丝体进行单酶酶解或复配酶酶解。但是，灵芝菌丝体的内含物组分复杂，单纯地利用一种或几种生物酶对菌丝体进行酶解，很难达到理想的效果。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种灵芝二次发酵液的制备方法，所制得的发酵液，富含小分子功能物质，具有良好的抗氧化和美白功效。
[0006]进一步地，有必要提供上述灵芝二次发酵液的应用。
[0007]本专利技术提供的技术方案如下：
[0008]一种灵芝二次发酵液的制备方法，包括以下步骤：
[0009]步骤1)灵芝深层液体发酵物的制备
[0010]灵芝经由菌种活化、培养、扩培和发酵后，获得灵芝深层液体发酵物；
[0011]步骤2)将灵芝深层液体发酵物过滤，即获得灵芝深层液体发酵后的灵芝菌丝体；
[0012]步骤3)将灵芝菌丝体加入至缓冲体系中，在适宜的条件下进行酶解，得到灵芝菌丝体酶解混合物，其中所述缓冲体系是添加了溶菌酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的枯草芽孢杆菌发酵物，；
[0013]步骤4)将酶解后的得到灵芝菌丝体酶解混合物加入乳酸菌发酵；
[0014]步骤5)再加入酵母菌再次进行发酵；
[0015]步骤6)将步骤5)得到的发酵体系离心过滤，取上层清液，得到灵芝二次发酵液。
[0016]其中，所述乳酸菌是植物乳杆菌Picp－2，菌种保藏号：M 20191045，保藏于中国典型培养物保藏中心；
[0017]所述酵母菌是单胞酿酒酵母菌ZLG－6，菌种保藏号：M 20191046，保藏于中国典型培养物保藏中心。
[0018]其中，所述灵芝深层液体发酵物的制备可以通过常规的方法制得，也可以通过以下方法制得：
[0019]灵芝经由菌种活化、液体培养基摇培、100L一级种子罐扩培和吨级发酵罐发酵后，获得灵芝深层液体发酵物；
[0020]更进一步地，可以通过以下方法制得：
[0021]灵芝经由菌种活化、灵芝在液体培养基中摇培3－5天、100L一级种子罐扩培和吨级发酵罐发酵后，获得灵芝菌丝体液体深层发酵液，其中所述液体培养基为葡萄糖20g/L；麦芽浸粉20g/L；酵母粉1g/L；蛋白胨1g/L的水溶液。
[0022]其中，所述步骤2)具体为：将灵芝深层液体发酵物在9000rpm的离心速度下离心10min，过滤得到沉淀物，即为灵芝菌丝体。
[0023]其中，所述步骤3)的缓冲体系是添加了溶菌酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的枯草芽孢杆菌发酵物，添加比例为每100ml枯草芽孢杆菌发酵物中添加0.15g溶菌酶、2g中性蛋白酶和2g木瓜蛋白酶；
[0024]所述枯草芽孢杆菌发酵物是枯草芽孢杆菌种子液接种量为2vol％的LB液体培养基，培养6－8小时而得。
[0025]其中，所述步骤3)的酶解条件为50℃、200rpm、酶解3－4h。
[0026]其中，所述步骤4)乳酸菌的接种量为10vol％，发酵条件为37℃培养箱中静置培养7天。
[0027]其中，所述步骤5)酵母菌的接种量为1vol％，30℃培养箱中静置培养7天
[0028]其中，所述步骤6)具体为：将步骤5)得到的发酵物在9000rpm条件下离心10min，将上清液经0.22μm膜过滤，即可获得灵芝二次发酵液。
[0029]其中，所述步骤4)在加入乳酸菌进行发酵前，按照每100ml灵芝菌丝体酶解混合物中添加8g蔗糖的比例添加蔗糖。
[0030]本专利技术所述的接种量是指种子液的体积与培养基或缓冲体系的体积比，具体含义为当种子液的OD600nm值为0.6－0.8(菌株生长对数期)时，在培养基或缓冲体系中接种的种子液，种子液的体积与培养基或缓冲体系的体积比单位为vol％。
[0031]进一步地，如上所述的灵芝二次发酵液的应用，将灵芝二次发酵液添加在护肤品中，灵芝二次发酵液的添加量为0.1－10wt％。
[0032]本专利技术添加了灵芝二次发酵液的护肤品其抗氧化效果和美白效果得到显著提升。
[0033]与现有技术相比较，本专利技术提供的一种灵芝二次发酵液的制备方法，以灵芝液体深层发酵物过滤后的灵芝菌丝体为培养基质，经充分的酶解和降解之后，添加蔗糖为补充碳源，再经由乳酸菌和酵母菌发酵，离心过滤即可获得灵芝二次发酵液。所获得的灵芝二次发酵液富含小分子功能物质，具有良好的抗氧化和美白功效。
附图说明
[0034]图1为实施例1与对比例5、对比例6中小分子物质的分子量信息。
具体实施方式
[0035]为了使本领域的技术人员更好地理解本专利技术中的技术方案，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0036]物质来源
[0037]枯草芽孢杆菌：Bacillus subtilis subsp.subtilis trpC2strain 168；
[0038]溶菌酶：品牌Ssolarbio，货号L8120，CAS号：12650－88－3，
[0039]中性蛋白酶：品牌Ssolarbio，货号Z8031，CAS号：9066－59－1，5万U/g；
[0040]木瓜蛋白酶：品牌Ssolarbio，货号G8431，CAS号：9001－73－4，10万U/g；
[0041]乳酸菌：植物乳杆菌Picp－2(菌种保藏号：M 20191045，保藏于中国典型培养物保藏中心)；
[0042]酵母菌：单胞酿酒酵母菌ZL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种灵芝二次发酵液的制备方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1)灵芝深层液体发酵物的制备：灵芝经由菌种活化、培养、扩培和发酵后，获得灵芝深层液体发酵物；步骤2)将灵芝深层液体发酵物过滤，即获得灵芝深层液体发酵后的灵芝菌丝体；步骤3)将灵芝菌丝体加入至缓冲体系中，在适宜的条件下进行酶解，得到灵芝菌丝体酶解混合物，其中所述缓冲体系是添加了溶菌酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的枯草芽孢杆菌发酵物；步骤4)将酶解后的得到灵芝菌丝体酶解混合物加入乳酸菌发酵；步骤5)再加入酵母菌再次进行发酵；步骤6)将步骤5)得到的发酵体系离心过滤，取上层清液，得到灵芝二次发酵液。2.如权利要求1所述的灵芝二次发酵液的制备方法，其特征在于：所述乳酸菌是植物乳杆菌Picp－2，菌种保藏号：M 20191045，保藏于中国典型培养物保藏中心；所述酵母菌是单胞酿酒酵母菌ZLG－6，菌种保藏号：M 20191046，保藏于中国典型培养物保藏中心。3.如权利要求1所述的灵芝二次发酵液的制备方法，其特征在于：所述步骤1)灵芝深层液体发酵物的制备具体为：灵芝经由菌种活化、灵芝在液体培养基中摇培3－5天、100L一级种子罐扩培和吨级发酵罐发酵后，获得灵芝菌丝体液体深层发酵液，其中所述液体培养基为葡萄糖20g/L；麦芽浸粉20g/L；酵母粉1g/L；蛋白胨1g/L的水溶液。4.如权利要求1所述的灵芝二次发酵液的制备方法，其特征在于：所述步骤2)具体为：将灵芝深层液体发酵物在9000r...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭源德，杨琦，戴跃锋，谢纯良，何广文，颜少慰，周映君，龚文兵，朱作华，许超，
申请(专利权)人：水羊化妆品制造有限公司，
类型：发明
国别省市：