一种可利用DNA连接酶促进分子内环化的最适DNA底物及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种可利用DNA连接酶促进分子内环化的最适DNA底物及应用，属于DNA合成技术领域。通过使用体外选择技术(SELEX)，从一个随机序列的DNA库中，定向进化出针对T4DNA连接酶的最适DNA分子，能够采用结构安排，有利于分子内环化。本发明专利技术成功进化出一条最适底物，允许以极高的收率和选择性，在顺式和反式反应中大规模合成DNA环。此外，反式作用的模板有助于构建连锁DNA双环，可作为滚环扩增的自由模板。与传统的检测方法相比，本发明专利技术解决了传统成环过程中因没有明显熵差异不可避免得生成线性连接产物等问题，实现了环状核酸得高产率和高特异性制备。特异性制备。

【技术实现步骤摘要】
一种可利用DNA连接酶促进分子内环化的最适DNA底物及应用


[0001]本专利技术属于DNA合成领域，具体涉及一种可利用DNA连接酶促进分子内环化的最适DNA底物以及两种反式连接模板及应用。

技术介绍

[0002]环状核酸(CNAs)是指自然产生或人工产生的具有闭环结构的核酸分子。由于其在流动性、稳定性、拓扑结构和功能等方面的独特特点，在分子克隆、疾病治疗、医学诊断、生物传感、生物化学等领域得到了广泛的应用。CNAs也可被一些聚合酶以滚环方式进行复制，推动了滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)和滚环转录(rolling circle transcription,RCT)作为核酸扩增工具的普及。此外，CNAs可以很容易地与功能性核酸(如适配体、DNA酶、核酶和适体核酶)偶联，产生用于生物分析和生物医学应用的功能体系。
[0003]合成环状单链(ss)DNA的常用方法是使用连接酶，包括使用T4 DNA连接酶(T4DL)，在配对DNA短链的帮助下，密封ssDNA中3
’‑r/>羟基和5...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可利用DNA连接酶促进分子内循环的DNA底物，其特征在于，所述DNA底物包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的DNA底物，其特征在于，所述DNA底物的二级结构包含一个单链区域(SS1)、三个短双链(P1、P2和P3)、一个关键发夹环(L1)和一个双链间未配对元件(J2/3)。3.一种可利用DNA连接酶对随机DNA文库进行反式连接制备单环的连接模板，其特征在于，所述连接模板包括如SEQ ID NO.25所示的核苷酸序列。4.一种可利用DNA连接酶与随机DNA文库进行反式连接制备互锁双环的连接模板，其特征在于，所述连接模板包括如SEQ ID NO.26所示的核苷酸序。5.根据权利要求3或4所述的连接模板，其特征在于，所述随机DNA文库为任一核苷酸序列，包括SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列。6.根据权利要求3所述的连接模板，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘猛，燕毓，常洋洋，
申请(专利权)人：大连理工大学，
类型：发明
国别省市：