一种角膜细胞衰老模型及其建立方法和应用技术

本申请提供一种角膜细胞衰老模型，其特征在于，其通过下述步骤构建：细胞培养步骤：使用细胞培养液对角膜细胞进行培养；细胞衰老步骤：弃去细胞培养步骤后的细胞培养液，加入缓冲液，然后在UVA、UVB和蓝光的条件下暴露角膜细胞；再培养步骤：弃去缓冲液，加入无血清培养液，对角膜细胞进行再培养，得到所述角膜细胞衰老模型。还提供上述角膜细胞衰老模型的建立方法以及一种体外评价药物对角膜细胞的抗衰老效果的方法。本申请的角膜细胞衰老模型设备简单、易操作、耗时短、无有毒有害试剂，且能够得到结果重现性高的良好效果。得到结果重现性高的良好效果。

【技术实现步骤摘要】
一种角膜细胞衰老模型及其建立方法和应用


[0001]本申请涉及生物医学领域，具体涉及一种角膜细胞衰老模型、角膜细胞衰老模型建立方法及体外评价药物对角膜细胞的抗衰老效果的方法。

技术介绍

[0002]中华医学会的统计数据显示，随着科技的发展和生活、工作的需要，人们在智能手机、电脑、电视上花费越来越多的时间，到2020年预计增加53％智能手机用户。60％的人每天花费至少6h在数字设备上，63.5％的人因蓝光辐射存在视力下降、白内障、失明等不同程度的眼疾。这些视频显示终端配备的液晶显示器，多采用发光二极管(LED)作为背光源，而LED中蓝光含量极高，对眼角膜造成极大损害。还有随着臭氧层的不断被破坏、户外活动的普及以及科技发展，人类接触紫外线及蓝光的机会增加。而眼睛是一个重要的感光器官，强烈而大量的紫外线会造成眼表的急性损伤如电光性眼炎和雪盲等。而眼睛长期接触紫外线及蓝光会造成慢性损伤如翼状胬肉、白内障以及视网膜黄斑等病变，损伤程度严重，甚至会导致永久性视力伤害。近年来，紫外线及蓝光致眼部损伤机制一般被认为是由于紫外线及蓝光的损伤，细胞产生氧自由基增多本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种角膜细胞衰老模型，其特征在于，其通过下述步骤构建：细胞培养步骤：使用细胞培养液对角膜细胞进行培养；细胞衰老步骤：弃去细胞培养步骤后的细胞培养液，加入缓冲液，然后在UVA、UVB和蓝光的条件下暴露角膜细胞；再培养步骤：弃去缓冲液，加入无血清培养液，对角膜细胞进行再培养，得到所述角膜细胞衰老模型。2.根据权利要求1所述的模型，其特征在于，细胞衰老步骤中，在2～7.2J/cm
2 UVA、50～126mJ/cm
2 UVB和1000～2000lux蓝光的条件下暴露所述角膜细胞；优选地，细胞衰老步骤中，在4～7.2J/cm
2 UVA、70～126mJ/cm
2 UVB和1500～2000lux蓝光的条件下暴露所述角膜细胞；优选地，细胞衰老步骤中，在25℃
±
5℃的条件下暴露所述角膜细胞。3.根据权利要求1或2所述的模型，其特征在于，所述角膜细胞为角膜上皮细胞；优选地，所述角膜细胞为哺乳动物角膜上皮细胞，优选为原代人角膜上皮细胞；优选地，细胞培养步骤中，培养结束后的角膜细胞为复苏后第3～4代的原代人角膜上皮细胞。4.根据权利要求1～3中任一项所述的模型，其特征在于，细胞培养步骤中，在细胞培养皿上使用细胞培养液对角膜上皮细胞进行培养，当角膜上皮细胞达到80％以上融合时，对角膜上皮细胞进行消化，然后再继续对角膜上皮细胞进行培养；优选地，细胞培养步骤中，对角膜上皮细胞进行消化后，用完全培养液重悬混匀，以5～10
×
103个角膜上皮细胞/孔加入细胞培养板，对角膜上皮细胞进行培养；优选地，细胞培养步骤中，所述在细胞培养皿和细胞培养板上的细胞培养是在37℃、饱和湿度下、CO2浓度为5％的细胞培养箱内培养24～48h。5.根据权利要求1～4中任一项所述的模型，其特征在于，细胞衰老步骤中，弃去细胞培养步骤后的细胞培养液，...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛华，张晓鸥，谢文娟，李芬，郭学平，
申请(专利权)人：华熙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：