一种从高粱黑粉菌中分离蛋白的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种具有降脂活性蛋白的制备方法，特别是涉及一种从高粱黑粉菌中分离蛋白的方法及其应用，它属于食品或药品技术领域。一种从高粱黑粉菌中分离蛋白的方法，其制备步骤包括浸提、粗提物制备和分离提纯。本发明专利技术提供了所述蛋白的制备方法，经内外降脂实验证明本发明专利技术提供的蛋白具有降低体脂含量、降低血清脂质水平和减轻体重的作用，对于开发新型的减肥、降血脂等天然食品和治疗药物具有重要意义。本发明专利技术的制备方法简单，成本低，提取纯度高，重现性好，可实现工业化生产。可实现工业化生产。可实现工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种从高粱黑粉菌中分离蛋白的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及一种具有降脂活性蛋白的制备方法，特别是涉及一种从高粱黑粉菌中分离蛋白的方法及其应用，它属于功能性食品或药品


技术介绍

[0002]高粱丝黑穗病菌(Sphacelothecareiliana)，俗称高粱黑粉菌，属于担子菌门，黑粉菌纲，是重要的植物病原真菌。高粱黑粉菌虽然是植物病原菌，但作为典型的黑色食品和食用菌，具有很高的营养价值和保健作用。高粱丝黑穗病菌也应用于民间常用中药，具有很多功效，例如调经、止血、预防结肠炎和冠心病；高粱丝黑穗病菌具有很强的抗肿瘤活性，对肿瘤细胞有很强的抑制力，对人体有抗衰老作用、促进蛋白质与核酸的合成、抵抗放射线的破坏并增加白细胞含量，有抗溃疡、抗炎症、降血糖、增强记忆、抗凝血的作用。高粱丝黑穗病菌是一种具有很高营养价值的食用菌，含有丰富的多糖、膳食纤维、微量元素、维生素、蛋白质、氨基酸，尤其是人体必须氨基酸含量丰富。
[0003]但国内外对黑粉菌研究的热点主要是作为植物病原菌侵染机理和分类上，对高粱黑粉菌的开发利用主要是加工成各类食品及添加剂。专利号200410082983.4、申请日为2004年12月15日的中国专利，公开了一种高粱黑粉真菌营养添加剂制备方法及其产品。专利号为200810229729.0、申请日为2008年12月15日的中国专利，公开了一种高粱黑粉真菌米肠。但高粱黑粉菌中分离的用于减肥、调节血脂的化合物，并用于制备降脂的药物至今未见有公开报道。
[0004]肥胖和高血脂在世界范围内发病率不断上升，是一种进行性发展且后期会严重危害身体健康甚至生命的疾病。研究表明，降低血脂水平是改善高血脂的有效方法。在对内体外降脂实验研究中，我们发现和专利技术了具有降脂活性的高粱黑粉菌蛋白质的制备方法和降脂用途。研究证明，它的体内外降脂作用呈一定的量效关系。高粱黑粉菌蛋白质属于天然植物来源的蛋白，可以减少脂肪和碳水化合物的吸收，从而具有降脂功效。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种从高粱黑粉菌中分离蛋白的方法及其应用，它从高粱黑粉菌中分离处具降脂活性的物质，采用了水提醇沉的方法，并且研究它的降脂生物活性，开拓了高粱黑粉菌食用及药用价值的新用途问题。
[0006]为了达到上述目的本专利技术是通过下述技术方案实现的。
[0007]一种从高粱黑粉菌中分离蛋白的方法，其步骤如下：
[0008](1)浸提：取高粱黑粉菌的脱脂粉与蒸馏水混合后，经NaOH溶液调节pH值、磁力搅拌得到粗提液；
[0009](2)粗提物制备：取粗提液，采用HCl溶液调节pH值，静置8
‑
12h，离心，收集沉淀，得粗提物；
[0010](3)分离提纯：取粗提物，调节pH至7，透析袋中透析，于真空冷冻干燥机中冷冻干
燥得高粱黑粉菌蛋白干燥粉末。
[0011]优选的，步骤(1)中高粱黑粉菌的脱脂粉制备方法如下：取鲜高粱黑粉菌去杂，60℃烘箱烘干，粉碎机粉碎，以料液比1:5与沸程60～90℃的石油醚混合分离油脂，通风厨中挥干，60目过筛，得到脱脂粉。
[0012]优选的，步骤(1)高粱黑粉菌脱脂粉与蒸馏水以1:10的质量比例进行混合，调节pH值为8.0。
[0013]优选的，步骤(1)中磁力搅拌是在室温条件下磁力搅拌30min，8000r/min离心10min。
[0014]优选的，步骤(1)中所述的NaOH溶液是质量百分比浓度为1mol/l的溶液。
[0015]优选的，步骤(2)调节pH值为4.6，离心转速为8000r/min，时间为10min。
[0016]优选的，步骤(2)中所述的HCl溶液是质量百分比浓度为1mol/l的溶液。
[0017]优选的，步骤(3)中所述的透析方法是4℃下、6～8KD透析袋中透析72h。
[0018]一种所述从高粱黑粉菌中分离出的蛋白在制备治疗具有降脂和减肥食品或药品上的应用。
[0019]由于采用上述技术方案，使得本专利技术具有如下特点和效果：
[0020]本专利技术提供了所述蛋白的制备方法，所述的蛋白通过促进肝脏AMPK磷酸化，干预脂代谢，降低血脂。经内外降脂实验证明，本专利技术提供的蛋白具有降低体脂含量、降低血清脂质水平和减轻体重的作用，对于开发新型的减肥、降血脂等天然食品和治疗药物具有重要意义。本专利技术的制备方法简单，成本低，提取纯度高，重现性好，可实现工业化生产，所述蛋白在制备降脂功能食品及药物方面具有良好的应用前景。
附图说明
[0021]图1是高粱黑粉菌蛋白WM
‑
P1纯化前后的纯度对比图。
[0022]图2是小鼠肝脏组织病理切片(HE染色，
×
200)空白组图。
[0023]图3是小鼠肝脏组织病理切片(HE染色，
×
200)模型组图。
[0024]图4是小鼠肝脏组织病理切片(HE染色，
×
200)低计量组图。
[0025]图5是小鼠肝脏组织病理切片(HE染色，
×
200)中剂量组图。
[0026]图6是小鼠肝脏组织病理切片(HE染色，
×
200)高剂量组图。
[0027]图7是小鼠血液中TC情况图。
[0028]图8是小鼠血液中TG情况图。
[0029]图9是小鼠血液中HDL情况图。
[0030]图10是小鼠血液中LDL情况图。
[0031]图11是高粱黑粉菌蛋白对小鼠肝脏中p
‑
AMPK的影响图。
具体实施方式
[0032]下面结合实施例对本专利技术进行进一步说明。以下实施例仅为本专利技术的几个具体实施例，但本专利技术的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本专利技术进行非实质性的改动，均应属于侵犯本专利技术保护范围的行为。
[0033]下述实施例和试验例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。
[0034]一种从高粱黑粉菌中分离蛋白的方法，其步骤如下：
[0035](1)浸提：取鲜高粱黑粉菌去杂，60℃烘箱烘干，粉碎机粉碎，以料液比1:5与沸程60～90℃的石油醚混合分离油脂，通风厨中挥干，60目过筛，得到脱脂粉，取100质量份高粱黑粉菌的脱脂粉与1000质量份蒸馏水混合后，经质量百分比浓度为1mol/lNaOH溶液调节pH值为8.0、在室温条件下磁力搅拌30min，8000r/min离心10min，到粗提液；
[0036](2)粗提物制备：取粗提液，采用质量百分比浓度为1mol/lHCl溶液调节pH值为4.6，静置8
‑
12h，离心转速为8000r/min，时间为10min，收集沉淀，得粗提物；
[0037](3)分离提纯：取粗提物，调节pH至7，4℃下、6～8KD透析袋中透析72h，于真空冷冻干燥机中冷冻干燥得高粱黑粉菌蛋白干燥粉末。
[0038]本实施例从高粱黑粉菌中分离出的蛋白可以应用于制本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从高粱黑粉菌中分离蛋白的方法，其特征在于步骤如下：（1）浸提：取高粱黑粉菌的脱脂粉与蒸馏水混合后，经NaOH溶液调节pH值、磁力搅拌得到粗提液；（2）粗提物制备：取粗提液，采用HCl溶液调节pH值，静置8
‑
12h，离心，收集沉淀，得粗提物；（3）分离提纯：取粗提物，调节pH至7，透析袋中透析，于真空冷冻干燥机中冷冻干燥得高粱黑粉菌蛋白干燥粉末。2.根据权利要求1所述的一种从高粱黑粉菌中分离蛋白的方法，其特征在于步骤（1）中高粱黑粉菌的脱脂粉制备方法如下：取鲜高粱黑粉菌去杂，60
ꢀ°
C烘箱烘干，粉碎机粉碎，以料液比1:5与沸程60～90
°
C的石油醚混合分离油脂，通风厨中挥干，60目过筛，得到脱脂粉。3.根据权利要求1所述的一种从高粱黑粉菌中分离蛋白的方法，其特征在于步骤（1）高粱黑粉菌脱脂粉与蒸馏水以1:10的质量比例进行混合，调节pH值为8.0。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：鲁明，付欣，吴兴壮，史琳，宋梦雪，解梦汐，
申请(专利权)人：辽宁省农业科学院，
类型：发明
国别省市：