MMP9抑制剂在制备结肠炎或结肠癌药物的应用制造技术

本申请涉及生物医药技术领域，提供了一种MMP9抑制剂在制备预防和/或防治结肠炎或结肠癌药物的应用，由于结肠炎所伴随的血便以及腹泻，一方面使病人体液流失严重，身体更加虚弱，另一方面进一步增大了该疾病的治疗难度，而本申请首次提供的MMP9抑制剂能够有效治疗结肠炎以及结肠炎相关结肠癌，将MMP9抑制剂用于制备预防和/或防治结肠炎或结肠癌药物进行使用，有利于减少体液流失，缩短治疗周期，提高治愈率，具有积极的用药指导意义，并提高了其应用价值。用价值。用价值。

【技术实现步骤摘要】
MMP9抑制剂在制备结肠炎或结肠癌药物的应用


[0001]本申请属于生物医药
，尤其涉及一种MMP9抑制剂在制备结肠炎或结肠癌药物的应用。

技术介绍

[0002]炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)，包括溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)和克罗恩病(Crohn's disease，CD)，是一种慢性复发性自身免疫性疾病。跟据估计，在西方国家，IBD的平均患病率为千分之一，虽然发展中国家的患病数较少，但该疾病的发病率在全球范围内正在上升。IBD的临床表现为腹痛、腹泻、直肠出血和发热等症状；溃疡性结肠炎的特点是直肠和结肠近端持续发炎，中性粒细胞浸润引起的隐窝脓肿和粘膜溃疡；克罗恩病可间歇地影响胃肠道的任何部位，以回肠末端最常见；炎症过程可延伸至肠壁，使肠腔狭窄，组织学特征为肉芽肿、纤维化和瘘的形成。
[0003]IBD的具体发病机制目前尚未明确，目前认为该病的病理学机制涉及到遗传易感性、环境因素、肠道微生物群和免疫调节系统等的相互作用，即环境因素作用于遗传易感者，然后在肠道微生物菌群的作用下，导致了持续发作的肠道先天性免疫及适应性免疫反应，从而使肠黏膜屏障损伤、溃疡难以愈合、炎性增生及恶性转变等病理变化。肠道黏膜免疫系统在IBD中其中重要的免疫调节作用，如产生多种细胞因子(IL
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1、IL
‑
6、TNF
‑
α等可参与炎症反应)；目前研究表明，T细胞功能紊乱与结肠炎的发病密切相关，肠黏膜固有层中的CD4+T细胞被激活后可以引起较为严重的肠道损伤，最终发展成为结肠炎。CD4+T可分化为TH1、TH17、TH2和Treg等细胞亚型，并分泌相关细胞因子在作用于结肠炎发病过程：IL
‑
12诱导CD4+T细胞分化为TH1细胞，并分泌大量IFN
‑
γ介导肠黏膜炎症反应；IL
‑
6、TGF
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β和IL
‑
1β则可诱导TH17分化，并表达IL
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17和IL
‑
22，IL
‑
23促进TH17细胞增值和维持，从而诱导其他炎症细胞因子和趋化因子到达炎症部位，导致组织细胞浸润和组织破坏，进而促进结肠炎的进程；IL
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4为TH2细胞分化的关键因子，能促进CD4+T细胞向TH2细胞分化而抑制TH1和TH17细胞的分化；TGF
‑
β可有效诱生Treg细胞，主要起抑制机体自身产生的过度免疫应答反应的作用。
[0004]尽管有许多治疗药物可以减轻IBD症状，但尚无根治方法。近些年越来越多的研究表明，虽然MMPs在正常组织重塑中发挥重要作用，但是其表达失调也在许多炎症性疾病中发挥重要的致病作用，如关节炎、动脉粥样硬化、心肌梗死、结直肠癌、炎症性肠病等。
[0005]在研究过程中，提供的对MMP9具有高选择性的单克隆抗体AB0041和AB0046由于分子量大无法进入MMP9酶中活性位点(凹陷结构)，虽能够特异性与MMP9结合，但不足以抑制MMP9的酶活性。因此，影响了MMP9抑制剂研发，导致在研发制备结肠炎或结肠癌药物的过程中，没有相关靶向的对MMP9酶进行作用的抑制剂。

技术实现思路

[0006]本申请的目的在于提供一种MMP9抑制剂在制备结肠炎或结肠癌药物的应用，旨在
解决现有技术中没有能够靶向性且特异性与MMP9作用的抑制剂以用来制备结肠炎或结肠癌药的问题。
[0007]为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：
[0008]第一方面，本申请提供一种MMP9抑制剂在制备预防和/或防治结肠炎或结肠癌药物的应用。
[0009]本申请第一方面提供的MMP9抑制剂在制备预防和/或防治结肠炎或结肠癌药物的应用，由于结肠炎所伴随的血便以及腹泻，一方面使病人体液流失严重，身体更加虚弱，另一方面进一步增大了该疾病的治疗难度，而本申请首次提供的MMP9抑制剂能够有效治疗结肠炎以及结肠炎相关结肠癌，将MMP9抑制剂用于制备预防和/或防治结肠炎或结肠癌药物进行使用，有利于减少体液流失，缩短治疗周期，提高治愈率，具有积极的用药指导意义，并提高了其应用价值。
附图说明
[0010]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0011]图1是本申请实施例提供的构建的小鼠的炎症性肠病模型示意图。
[0012]图2是本申请实施例提供的炎症性肠病模型小鼠的体重变化和疾病活动指数示意图。
[0013]图3是本申请实施例提供的小鼠结肠炎实验中阴性对照组、阳性对照组和治疗组三组小鼠的结肠组织切片分析图。
[0014]图4是本申请实施例提供的MMP9抑制剂G3CC抑制小鼠结肠炎中细胞因子的表达分析图。
[0015]图5是本申请实施例提供的构建的小鼠的结肠癌病模型示意图。
[0016]图6是本申请实施例提供的小鼠结肠炎相关结肠癌实验中阴性对照组、阳性对照组和治疗组三组小鼠的体重变化结果分析图。
[0017]图7是本申请实施例提供的小鼠结肠炎相关结肠癌实验中阴性对照组、阳性对照组和治疗组三组小鼠的腹泻结果分析图。
[0018]图8是本申请实施例提供的小鼠结肠炎相关结肠癌实验中阴性对照组、阳性对照组和治疗组三组小鼠的便血结果分析图。
[0019]图9是本申请实施例提供的小鼠结肠癌实验中阴性对照组、阳性对照组和治疗组三组小鼠的结肠组织切片分析图。
具体实施方式
[0020]为了使本申请要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本申请进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。
[0021]本申请实施例第一方面提供一种MMP9抑制剂在制备预防和/或防治结肠炎或结肠
癌药物的应用。
[0022]本申请第一方面提供的MMP9抑制剂在制备预防和/或防治结肠炎或结肠癌药物的应用，由于结肠炎所伴随的血便以及腹泻，一方面使病人体液流失严重，身体更加虚弱，另一方面进一步增大了该疾病的治疗难度，而本申请首次提供的MMP9抑制剂能够有效治疗结肠炎以及结肠炎相关结肠癌，将MMP9抑制剂用于制备预防和/或防治结肠炎或结肠癌药物进行使用，有利于减少体液流失，缩短治疗周期，提高治愈率，具有积极的用药指导意义，并提高了其应用价值。
[0023]在一些实施例中，MMP9抑制剂为纳米抗体，且纳米抗体选自B11CC、G3CC、C2CC、A2CC、A3CC中的任意一种。提供的MMP9抑制剂为纳米抗体，且选自B11CC、G3CC、C2CC、A2CC、A3CC中的任意一种；提供的抗体均包括互补决定本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种MMP9抑制剂在制备预防和/或防治结肠炎或结肠癌药物的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述MMP9抑制剂为纳米抗体，且所述纳米抗体选自B11CC、G3CC、C2CC、A2CC、A3CC中的任意一种。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述B11CC的氨基酸序列为SEQ.ID No.1；和/或，所述G3CC的氨基酸序列为SEQ.ID No.2；和/或，所述C2CC的氨基酸序列为SEQ.ID No.3；和/或，所述A2CC的氨基酸序列为SEQ.ID No.4；和/或，所述A3CC的氨基酸序列为SEQ.ID No.5。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述MMP9抑制剂的制备方法包括如下步骤：通过对多个天然文库大量测序比对分析，分别设计CDR区中CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸突变位点并合成CDRs突变引物；提供合成得到的纳米抗体模板序列，对所述纳米抗体模板序列进行密码子优化并引入限制性内切酶的酶切位点，得到优化纳米抗体模板序列；将所述优化纳米抗体模板序列插入噬菌粒载体构建重组噬菌粒，将所述重组噬菌粒进行噬菌体展示后提取单链DNA，利用Kunkel突变法把所述CDRs突变引物与所述单链DNA进行配对合成异源双链DNA，并转化至到大肠杆菌中培养得到噬菌体突变文库；用所述噬菌体突变文库针对MMP9进行筛选、纯化得到MMP9抑制剂。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述CDRs突变引物包括CDR1突变引物，CDR2突变引物和CDR3突变引物，所述CDR1突变引物的碱基序列为SEQ.ID No.6，所述SEQ.ID No.6为3
’‑
TTAAGCTGTGCAGCATCTGGTWVCATTT...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶亮，吴丹丹，郑厚胜，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：