一种促进细胞生长的生物制剂制造技术

本发明专利技术属于细胞生物学技术领域，尤其涉及一种促进细胞生长的生物制剂。本发明专利技术所提供的促进细胞生长的生物制剂为提高脐带间充质干细胞生长的生物制剂，该生物制剂由短毛藻多糖组成，本发明专利技术所提供的生物制剂可以有效的促进脐带间充质干细胞的增殖，因此，可将本发明专利技术所提供的生物制剂用于促进脐带间充质干细胞的快速生长。快速生长。快速生长。

【技术实现步骤摘要】
一种促进细胞生长的生物制剂


[0001]本专利技术属于细胞生物学
，尤其涉及一种促进细胞生长的生物制剂。

技术介绍

[0002]间充质干细胞是一种具有多向分化潜能和自我复制能力的成体干细胞。由于间充质干细胞具有可移植和低免疫原行的特点，因此其在自身免疫性疾病和各种替代治疗方法拥有着广泛的应用前景。间充质干细胞广泛的存在于脐血，脂肪组织，外周血，牙髓和骨髓等。其中，脐带中的间充质干细胞为脐带间充质干细胞。特定的诱导条件下，脐带间充质干细胞可以被诱导为表皮细胞、成骨细胞、血管内皮细胞、心肌细胞等。因此，脐带间充质干细胞已经被广泛的应用于干细胞治疗中。然而，脐带间充质干细胞在进行体外培养时，增殖速度较为缓慢，因此有效的促进脐带间充质干细胞的体外增殖能力，对于脐带间充质干细胞的临床应用具有重要意义。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种促进脐带间充质干细胞生长的生物制剂，从而实现细胞的快速繁殖。
[0004]为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：本专利技术提供了一种促进脐带间充质干细胞生长的生物制剂，所述生物制剂为短毛藻多糖，所述短毛藻多糖由如下制备方法制备得到：（1）将短毛藻原料使用清水清洗干净，置于干燥箱中烘干至恒重后，粉碎为短毛藻粉末；（2）加入20倍量的蒸馏水，90℃下提取3h，8500g离心30min，收集上清，得到短毛藻提取液；（3）将短毛藻提取液旋转蒸发至原体积的1/4；（4）加入3倍量的无水乙醇，静置24h后，5000g离心20min，将沉淀冷冻干燥，得到短毛藻粗多糖；（5）加入蒸馏水溶解短毛藻粗多糖，得到短毛藻粗多糖溶解液；（6）将短毛粗多糖溶解液经过50kDa的超滤膜，将截留液冷冻干燥后得到短毛藻多糖；所述短毛藻多糖的浓度为大于等于10mg/ml。
[0005]其次，本专利技术提供了短毛藻多糖在制备促进脐带间充质干细胞增殖生物制剂中的应用，所述短毛藻多糖由如下制备方法制备得到：（1）将短毛藻原料使用清水清洗干净，置于干燥箱中烘干至恒重后，粉碎为短毛藻粉末；（2）加入20倍量的蒸馏水，90℃下提取3h，8500g离心30min，收集上清，得到短毛藻提取液；
（3）将短毛藻提取液旋转蒸发至原体积的1/4；（4）加入3倍量的无水乙醇，静置24h后，5000g离心20min，将沉淀冷冻干燥，得到短毛藻粗多糖；（5）加入蒸馏水溶解短毛藻粗多糖，得到短毛藻粗多糖溶解液；（6）将短毛粗多糖溶解液经过50kDa的超滤膜，将截留液冷冻干燥后得到短毛藻多糖。
[0006]优选地，所述应用包括短毛藻多糖促进脐带间充质干细胞促增殖蛋白SCF的蛋白表达。
[0007]优选地，所述应用包括短毛藻多糖抑制脐带间充质干细胞抑增殖蛋白p21的蛋白表达。
[0008]其次，本专利技术提供了短毛藻多糖在制备脐带间充质干细胞促增殖蛋白SCF的蛋白表达促进剂中的应用，所述短毛藻多糖由如下制备方法制备得到：（1）将短毛藻原料使用清水清洗干净，置于干燥箱中烘干至恒重后，粉碎为短毛藻粉末；（2）加入20倍量的蒸馏水，90℃下提取3h，8500g离心30min，收集上清，得到短毛藻提取液；（3）将短毛藻提取液旋转蒸发至原体积的1/4；（4）加入3倍量的无水乙醇，静置24h后，5000g离心20min，将沉淀冷冻干燥，得到短毛藻粗多糖；（5）加入蒸馏水溶解短毛藻粗多糖，得到短毛藻粗多糖溶解液；（6）将短毛粗多糖溶解液经过50kDa的超滤膜，将截留液冷冻干燥后得到短毛藻多糖。
[0009]最后，本专利技术提供了短毛藻多糖在制备脐带间充质干细胞抑增殖蛋白p21的蛋白表达抑制剂中的应用，所述短毛藻多糖由如下制备方法制备得到：（1）将短毛藻原料使用清水清洗干净，置于干燥箱中烘干至恒重后，粉碎为短毛藻粉末；（2）加入20倍量的蒸馏水，90℃下提取3h，8500g离心30min，收集上清，得到短毛藻提取液；（3）将短毛藻提取液旋转蒸发至原体积的1/4；（4）加入3倍量的无水乙醇，静置24h后，5000g离心20min，将沉淀冷冻干燥，得到短毛藻粗多糖；（5）加入蒸馏水溶解短毛藻粗多糖，得到短毛藻粗多糖溶解液；（6）将短毛粗多糖溶解液经过50kDa的超滤膜，将截留液冷冻干燥后得到短毛藻多糖。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种短毛藻多糖，本专利技术所提供的短毛藻多糖可以有效的促进脐带间充质干细胞的增殖，可以有效的促进脐带间充质干细胞促增殖蛋白SCF蛋白的蛋白表达并且可以有效的降低脐带间充质干细胞抑增殖蛋白p21的蛋白表达，因此可将短毛藻多糖用于制备促进脐带间充质干细胞生长的生物制剂。
附图说明
[0010]图1 CCK
‑
8实验的检测结果，在图中，*代表P＜0.05,**代表P＜0.01，***代表P＜0.001；图2 EDU实验的检测结果；图3 Western Blot实验的检测结果。
具体实施方式
[0011]为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。
[0012]实施例1（1）将100g短毛藻原料使用清水清洗干净，置于干燥箱中烘干至恒重后，粉碎为短毛藻粉末；（2）加入2000ml的蒸馏水，90℃下提取3h，8500g离心30min，收集上清，得到短毛藻提取液；（3）将短毛藻提取液旋转蒸发至原体积的500ml；（4）加入1500ml的无水乙醇，静置24h后，5000g离心20min，将沉淀冷冻干燥，得到短毛藻粗多糖；（5）加入100ml蒸馏水溶解5g短毛藻粗多糖，得到短毛藻粗多糖溶解液；（6）将短毛粗多糖溶解液经过50kDa的超滤膜，将截留液冷冻干燥后得到短毛藻多糖。
[0013]实施例2利用CCK
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8实验检测短毛藻多糖对于脐带间充质干细胞增殖的调控（1）使用DMEM培养基将短毛藻多糖配置为1mg/ml，10mg/ml，20mg/ml，50mg/ml和100mg/ml的浓度；（2）将P3代的脐带间充质干细胞接种于96孔板中，每孔4000个/100ul，待细胞贴壁后，对照组不添加短毛藻多糖，实验组分别添加1mg/ml，10mg/ml，20mg/ml，50mg/ml和100mg/ml浓度的短毛藻多糖；（3）将96孔板置于细胞培养箱中，培养48h后，使用CCK
‑
8检测OD值。
[0014]实验所得到的结果如图1所示，其中，对照组的OD值为0.899
±
0.034；1mg/ml短毛藻多糖处理后的OD值为0.912
±
0.028，P值为0.627，差异无统计学意义；10mg/ml短毛藻多糖处理后的OD值为1.020
±
0.054，P值为0.030，小于0.05，差异具有统计学意义；20 mg/ml短毛藻多糖处理后的OD值为1.175
±
0.047，P值为0.001，小于0.05，差异具有统计学意义；50 mg/ml短毛藻多糖处理后的OD值为1.329
±
0.035，P值为0.0001，小于0.05，差异具有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种促进脐带间充质干细胞生长的生物制剂，其特征在于，所述生物制剂为短毛藻多糖，所述短毛藻多糖由如下制备方法制备得到：（1）将短毛藻原料使用清水清洗干净，置于干燥箱中烘干至恒重后，粉碎为短毛藻粉末；（2）加入20倍量的蒸馏水，90℃下提取3h，8500g离心30min，收集上清，得到短毛藻提取液；（3）将短毛藻提取液旋转蒸发至原体积的1/4；（4）加入3倍量的无水乙醇，静置24h后，5000g离心20min，将沉淀冷冻干燥，得到短毛藻粗多糖；（5）加入蒸馏水溶解短毛藻粗多糖，得到短毛藻粗多糖溶解液；（6）将短毛粗多糖溶解液经过50kDa的超滤膜，将截留液冷冻干燥后得到短毛藻多糖；所述短毛藻多糖的浓度为大于等于10mg/ml。2.短毛藻多糖在制备促进脐带间充质干细胞增殖生物制剂中的应用，其特征在于，所述短毛藻多糖由如下制备方法制备得到：（1）将短毛藻原料使用清水清洗干净，置于干燥箱中烘干至恒重后，粉碎为短毛藻粉末；（2）加入20倍量的蒸馏水，90℃下提取3h，8500g离心30min，收集上清，得到短毛藻提取液；（3）将短毛藻提取液旋转蒸发至原体积的1/4；（4）加入3倍量的无水乙醇，静置24h后，5000g离心20min，将沉淀冷冻干燥，得到短毛藻粗多糖；（5）加入蒸馏水溶解短毛藻粗多糖，得到短毛藻粗多糖溶解液；（6）将短毛粗多糖溶解液经过50kDa的超滤膜，将截留液冷冻干燥后得到短毛藻多糖。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用包括短毛藻多糖促进脐带间充质干细胞促增殖蛋白SCF的蛋白表达。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：王善粉，孙昌星，
申请(专利权)人：山东元裕生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：