一种体外合成siRNA的纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种体外合成siRNA的纯化方法。本发明专利技术的纯化方法具体指体外转录合成siRNA后进行纯化，得到高纯度的siRNA。具体操作流程：将带有T7启动子的DNA模板体外转录合成siRNA；DNaseI降解DNA模板，S1核酸酶降解单链DNA和RNA；磁珠纯化富集siRNA；核酸吸附柱进一步去除小于20nt的核酸、碱基，以得到纯度很高的siRNA。这种制备方式快捷、便宜，且产物的纯度比市场销售的siRNA体外转录试剂盒要高很多，避免了市售体外转录试剂盒得到的产物中有过多杂质，而使实验结果非常不稳定。极大的提高了体外转录制备siRNA的质量，提高实验效率，减少假阴性的实验结果，具有非常高的推广价值。值。值。

【技术实现步骤摘要】
一种体外合成siRNA的纯化方法


[0001]本专利技术涉及siRNA制备
，尤其涉及一种体外合成siRNA的纯化方法。

技术介绍

[0002]siRNA技术是上个世纪在植物中发现的。由于它可以作为一种简单、有效的代替基因敲除的遗传工具，近年来对哺乳动物的研究越来越多。它在生物基因组中特定基因功能的研究、封闭和阻断病原体基因表达等方面，取得了重要进展，显示出良好的应用前景。siRNA技术将在治疗肿瘤、肝炎、遗传性疾病等多种无法治愈的疾病中带来希望，也是目前新药开发的热门。
[0003]全球首款非病毒载体给药的siRNA药物patisiran由Alnylam公司研发，是一种特异性沉默hATTR表达的药物。hATTR是人体转甲状腺素蛋白(transthyretin，TTR)淀粉样蛋白沉积引起的，是一种罕见且难以治愈的遗传病。Patisiran与脂质体形成复合物，通过静脉注射给药，沉默人体内hAATR mRNA的表达，减少转甲状腺素蛋白的产生。迄今，Alnylam公司还研发了siRNA药物Givosiran、Iumasiran、Incl本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种体外合成siRNA的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将含目的基因的DNA单链通过体外转录获得含目的siRNA的体外转录产物；S2、采用DNaseI和S1核酸酶对所述的体外转录产物进行消化处理，得到消化产物；S3、向所述的消化产物中加入磁珠进行目的siRNA富集处理，得到富集产物；S4、采用核酸吸附柱对所述的富集产物进行纯化，得到纯化的siRNA；其中，所述的核酸吸附柱中填充至少4层，孔径为8～12nm的核酸吸附膜。2.根据权利要求1所述的体外合成siRNA的纯化方法，其特征在于，所述的核酸吸附膜为玻璃纤维膜或硅胶膜。3.根据权利要求1所述的体外合成siRNA的纯化方法，其特征在于，所述的磁珠为硅羟基磁珠、羧基磁珠或氨基磁珠。4.根据权利要求3所述的体外合成siRNA的纯化方法，其特征在于，所述的磁珠的粒径约0.8～1.2μm，表面电荷约
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15～
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40mV。5.根据权利要求1所述的体外合成siRNA的纯化方法，其特征在于，在消化处理时，DNaseI的浓度为0.3U/μl～0.4U/μl。6.根据权利要求1所述的体外合成siRNA的纯化方法，其特征在于，在消化处理时，S1核酸酶的浓度为0....

【专利技术属性】
技术研发人员：李萍，唐雪明，李学文，
申请(专利权)人：硅羿科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：