一种新冠病毒检测用单抗制造技术

本发明专利技术公开了一种新冠病毒检测用单抗，所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体1

【技术实现步骤摘要】
一种新冠病毒检测用单抗


[0001]本专利技术属于生物
，更具体地说，尤其涉及一种新冠病毒检测用单抗。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒的检测方法主要包含核酸检测、抗体检测、抗原 检测几种方法，由于抗原检测检出率较低，目前新冠检测主要集中 在抗体和核酸检测。
[0003]核酸检测对检测设备或平台要求较高，高灵敏度的RT
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PCR仪价格昂贵，对实验室的洁净度和操作人员要求也较高，此外，核酸检测耗时较长，考虑到样本运输、样本积压的情况，通常最快24小时才可以报告结果，与核酸检测相比，抗体检测的血液标本更易获取且标本质量有保证、操作简单快捷、很大程度上降低了医护人员在标本采集和检测过程中被感染的风险、更易于基层实验室展开筛查工作等，如果说核酸检测病毒的核糖核酸(RNA)，是病毒存在的直接证据，那么抗体检测的就是患者血液中被刺激产生的抗体，是间接证据，对临床有提示作用，当核酸检测阴性时，将IgM和IgG抗体检测增加进去。
[0004]抗体检测可以弥补核酸检测容易造成漏诊的缺点，成为一种重要的新冠病毒检测手段，为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新冠病毒检测用单抗，其特征在于：所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体1
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3mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体0.5
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1.5mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体1
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3mg；细胞上清扩大培养，proteinG纯化的抗体1
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3mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体0.5
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1.5mg。2.根据权利要求1所述的一种新冠病毒检测用单抗，其特征在于：所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体3mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体1.5mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体3mg；细胞上清扩大培养，proteinG纯化的抗体3mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体1.5mg。3.根据权利要求1所述的一种新冠病毒检测用单抗，其特征在于：所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体2mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体1mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体2mg；细胞上清扩大培养，proteinG纯化的抗体2mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体1mg。4.根据权利要求1所述的一种新冠病毒检测用单抗，其特征在于：所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体1mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体0.5mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体1mg；细胞上清扩大培养，proteinG纯化的抗体1mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体0.5mg。5.根据权利要求1至4任意一项所述的新冠病毒检测用单抗的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、订购小鼠；S2、小鼠免疫程序：注射两次抗原，并采用ELISA方法检测小鼠血清效价；S3、融合：培养细胞，第8天半量换液HT培养基，第10天后显微镜下画单克隆；S4、融合检测：对免疫小鼠的血清做阳性对照，并使用酶标仪测定450nm/620nm处OD值；S5、单克隆：选取20株阳性母细胞培养传代三次，选取OD值较大的细胞株制备抗体。6.根据权利要求5所述的一种新冠病毒检测用单抗的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中免疫程序方案包括以下步骤：S201、抗原配制方法：按照每只小鼠免疫约20ug，将抗原与QuickAntibody
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Mouse5W等体积混合；S202、免疫前采集空白血清，小鼠通过剪脚指标记，抓住小鼠颈部皮肤将小鼠腹部朝上，剪右前趾为1号，左前趾为2号，右后趾为3号，左后趾为4号，5号为未剪脚趾，将小鼠固定于固定器内，用眼科剪在小鼠尾尖处剪断用EP管收取约20ul血用于分离血清，约3～5ul，手写标记，
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20℃保存；S203、初次免疫第0天：10
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20ug蛋白抗原与QuickAntibody
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Mouse5W等体积混合，充分混匀后在小鼠后腿部肌肉注射，在初次免疫前应采集空白血清；S204、第二次免疫第21天：等同初次免疫；S205、效价检测第35天：采用ELISA方法检测小鼠血清效价，采用断趾标记法标记小鼠，将小鼠固定于固定器内，用眼科剪在小鼠尾尖处剪断用EP管收取约20ul血并分离血清用于检测ELISA效价。7.根据权利要求6所述的一种新冠病毒检测用单抗的制备方法，其特征在于：所述步骤S205中效价检测的方法包括以下步骤：
S2051、抗原包被：确定抗原包被的浓度1ug/ml，100ul每孔加入96孔板，包被6条共72孔，4℃过夜或37℃温箱1h；S2052、封闭：弃上清，用PBST清洗三次，每孔加入300ul封闭液，37℃放置1h；S2053、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；S2054、加一抗：从第二孔开始，每孔加入100ulPBS，取免疫后的小鼠血清做1：:65稀释，取200u...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘立成，吴刚，闫广为，张治业，
申请(专利权)人：苏州博特龙免疫技术有限公司，
类型：发明
国别省市：