一种体外NK细胞的扩增方法及其NK细胞技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，具体公开了一种体外NK细胞的扩增方法及其NK细胞，所述体外NK细胞的扩增方法为从外周血或脐带血中分离提取单个核细胞，采用含有偶联蛋白磁性微球的培养基对提取的单个核细胞进行扩增培养，获得NK细胞；其中，所述偶联蛋白磁性微球上偶联有IL15、IL18、CD86、CD137L、MICA中的至少一种。本发明专利技术将NK细胞生长所需的多个激活及扩增信号蛋白分子偶联到磁性微球表面，使用偶联蛋白磁性微球进行NK细胞的体外扩增培养，能够显著提高不同来源单个核细胞中NK细胞的扩增效率及纯度的稳定性，而且扩增得到的NK细胞具有较强的杀伤能力；并且能够通过简单的物理分离方法将外源性的磁珠微球从培养体系中全部移除，有利于细胞药物质量的控制。有利于细胞药物质量的控制。

【技术实现步骤摘要】
一种体外NK细胞的扩增方法及其NK细胞


[0001]本专利技术涉及细胞培养
，具体涉及一种体外NK细胞的扩增方法及其NK细胞。

技术介绍

[0002]NK细胞是先天性免疫系统的重要组成部分，是机体抗御感染和防止细胞恶性转化的重要免疫调节细胞。与T细胞介导的免疫监视应答体系所不同的是，NK细胞无需肿瘤特异性抗原识别便可以直接杀伤肿瘤细胞，是肿瘤免疫治疗的重要效应细胞。
[0003]获得足够数量，足够纯度的NK细胞是开展NK细胞药物研发的基础。目前NK细胞大规模扩增工艺主要有两条技术路径：
[0004]1、在培养基里添加多种细胞因子如：IL2、IL15、IL18等，刺激NK细胞活化信号通路，对NK细胞进行扩增与激活。但这种方式存在的问题是由于不同来源的血液样本中NK细胞含量不一，扩增潜能各异，导致扩增效率和扩增纯度呈现比较大的差异，无法满足细胞药物开发中批件次均一性的要求。
[0005]2、还有一种方法是用采用滋养层(feed layer)细胞作为核心原材料来进行NK细胞扩增，其大致工艺为用K562细胞(一种B细胞来源本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种体外NK细胞的扩增方法，其特征在于，从血液中分离提取单个核细胞，采用含偶联蛋白磁性微球的培养基对提取的单个核细胞进行扩增培养，获得NK细胞；其中，所述偶联蛋白磁性微球上偶联有IL15、IL18、CD86、CD137L、MICA蛋白中的至少一种。2.根据权利要求1所述的扩增方法，其特征在于，采用含偶联蛋白磁性微球的培养基对分离的单个核细胞进行扩增培养的具体操作为：（1）将提取的单个核细胞接种至含偶联蛋白磁性微球的培养基的培养瓶中，培养4
‑
5天，培养过程通过向培养瓶中补加含自体血浆、IL
‑
2的GT
‑
T551无血清培养基，控制细胞密度为6
×
105/mL～1
×
106/mL；其中，含偶联蛋白磁性微球的培养基是将自体血浆、偶联蛋白磁性微球悬浮液、IL
‑
2加入到GT
‑
T551无血清培养基中，混合均匀得到的；（2）在培养的第6
‑
7天，向培养瓶中补加含偶联蛋白磁性微球的培养基继续进行培养，培养过程控制细胞密度为8
×
105/mL～1
×
106/mL；；（3）在培养的第8
‑
11天，补加含自体血浆、IL
‑
2的GT
‑
T551无血清培养基继续进行培养，培养过程控制细胞浓度在1
×
106/mL～2
×
106/mL；（4）培养至第14
‑
18天，收集培养的NK细胞。3.根据权利要求1或2所述的扩增方法，其特征在于，偶联蛋白磁性微球悬浮液的制备方法包括以下步骤：（S1）采用结合缓冲液对His
‑
tag蛋白纯化磁珠进行洗涤，洗涤后收集磁珠，得到预处理His
‑
tag蛋白纯化磁珠；（S2）将带有His标签的蛋白重悬于结合缓冲液中，得到蛋白溶液，然后将蛋白溶液与步骤（S1）得到的预处理His
‑
tag蛋白纯化磁珠进行混合反应，反应后进行磁性分离，去上清，得到偶联蛋白磁性微球；其中，所述蛋白为IL15、IL18、CD86、CD137L、MICA蛋白中的至少一种；（S3）采用洗涤...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦丹，朱学义，王迎耀，薛晓峰，秦志华，
申请(专利权)人：河南省遗传资源细胞库有限公司，
类型：发明
国别省市：