脂肪间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法和应用技术

本申请属于细胞培养基技术领域，尤其涉及一种脂肪间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法，以及一种脂肪间充质干细胞的无血清培养基的应用。其中，脂肪间充质干细胞的无血清培养基，包括基础培养基和添加物；其中，所述基础培养基包括DMEM/F12培养基；所述添加物包括转铁蛋白、重组人胰岛素、成纤维细胞生长因子、纤连蛋白、黄芪甲苷、党参提取物和芦荟提取物。本申请无血清培养基用于培养脂肪间充质干细胞，通过各组分的协同配合作用，不但能促进脂肪干细胞的生长和增殖，而且能够降低细胞损伤，提高细胞的存活率，从而提高脂肪干细胞体外扩增能力。并且无异源性污染，不存在引起排斥反应的潜在安全隐患，培养基性能稳定，质量可靠。可靠。可靠。

【技术实现步骤摘要】
脂肪间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法和应用


[0001]本申请属于细胞培养基
，尤其涉及一种脂肪间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法，以及一种脂肪间充质干细胞的无血清培养基的应用。

技术介绍

[0002]干细胞，是一类具有自我更新、多向分化能力的多潜能细胞。间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层，在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，是再生医学理想的种子细胞。间充质干细胞存在于骨髓、脐带血和脐带组织、胎盘组织、脂肪组织等多种组织中。体外培养时容易贴壁生长，形成集落，分化成祖细胞，并能大量扩增。研究发现，间充质干细胞连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。还有治疗多种疾病的潜能，尤其是免疫调节以及组织修复方面，其来源广泛、获取方便，能够快速扩增，有显著临床应用优势。
[0003]脂肪间充质干细胞是从脂肪组织提取的一种成体干细胞，具有向软骨、骨、脂肪等多种组织分化的潜能。脂肪组织通过脂肪抽吸术或外科手术容易获取，对供者创伤较小且不涉及伦理问题。而且，脂肪间充质干细胞在人和动物体内相对分布广泛、易于分离，且可以在体外条件下大量扩增和长期稳定培养，现已是医学和组织工程领域最受欢迎的干细胞之一。
[0004]脂肪间充质干细胞的体外培养一直是个难题，目前，脂肪间充质干细胞的体外培养方法不可避免的需要使用血清，主要采用含血清培养基。但是血清培养基中由于含动物来源血清成分，容易引起外源性污染，细胞形态变异等，且存在引起排斥反应的潜在安全隐患，而且含血清培养基培养不同批次细胞的批间差异较大，增加了生产质量控制的难度。

技术实现思路

[0005]本申请的目的在于提供一种脂肪间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法，以及一种脂肪间充质干细胞的无血清培养基的应用，旨在一定程度上解决现有脂肪间充质干细胞培养基主要采用含血清的培养基的问题。
[0006]为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：第一方面，本申请提供一种脂肪间充质干细胞的无血清培养基，所述无血清培养基包括基础培养基和添加物；其中，所述基础培养基包括DMEM/F12培养基；所述添加物包括转铁蛋白、重组人胰岛素、成纤维细胞生长因子、纤连蛋白、黄芪甲苷、党参提取物和芦荟提取物。
[0007]进一步地，所述基础培养基为DMEM/F12培养基；所述添加物由转铁蛋白、重组人胰岛素、成纤维细胞生长因子、纤连蛋白、黄芪甲苷、党参提取物和芦荟提取物组成。
[0008]进一步地，所述无血清培养基中，所述转铁蛋白的浓度为8~22μg/mL，所述重组人胰岛素的浓度为10~25μg/mL，所述成纤维细胞生长因子的浓度为10~30ng/mL，所述纤连蛋
白的浓度为50~80μg/mL，所述黄芪甲苷的浓度为8~15mg/mL，所述党参提取物的浓度为2~10mg/mL，所述芦荟提取物的浓度为5~15mg/mL。
[0009]进一步地，所述无血清培养基中，所述转铁蛋白的浓度为10~20μg/mL，所述重组人胰岛素的浓度为12~22μg/mL，所述成纤维细胞生长因子的浓度为12~25ng/mL，所述纤连蛋白的浓度为55~75μg/mL，所述黄芪甲苷的浓度为10~13mg/mL，所述党参提取物的浓度为5~10mg/mL，所述芦荟提取物的浓度为10~15mg/mL。
[0010]进一步地，所述无血清培养基中，所述转铁蛋白的浓度为15μg/mL，所述重组人胰岛素的浓度为20μg/mL，所述成纤维细胞生长因子的浓度为20ng/mL，所述纤连蛋白的浓度为70μg/mL，所述黄芪甲苷的浓度为12mg/mL，所述党参提取物的浓度为10mg/mL，所述芦荟提取物的浓度为12mg/mL。
[0011]第二方面，本申请提供一种脂肪间充质干细胞的无血清培养基的制备方法，包括以下步骤：分别获取转铁蛋白、重组人胰岛素、成纤维细胞生长因子、纤连蛋白、黄芪甲苷、党参提取物和芦荟提取物；将所述转铁蛋白、所述重组人胰岛素、所述成纤维细胞生长因子、纤连蛋白、所述黄芪甲苷、所述党参提取物和所述芦荟提取物与DMEM/F12培养基进行混合处理，得到脂肪间充质干细胞的无血清培养基。
[0012]进一步地，获取所述党参提取物的步骤包括：取党参药材，采用水煮沸所述党参药材，收集滤液，重复1~3次，合并滤液，得到提取物；采用第一乙醇溶液对所述提取物进行沉淀处理，对上清液进行分离纯化，得到所述党参提取物。
[0013]进一步地，煮沸所述党参药材的步骤中，所述党参药材与水的体积比为1：（6~8）。
[0014]进一步地，所述第一乙醇溶液的浓度不低于90%，所述第一乙醇溶液与所述提取物的体积比为1：（0.8~1.5）。
[0015]进一步地，对所述上清液进行分离纯化的步骤包括：加热回收所述上清液中乙醇后，重新溶解回收物，调节pH值为7.0~7.4后进行过滤。
[0016]进一步地，获取所述黄芪甲苷的步骤包括：取黄芪药材，采用温度为50~60℃的水浸泡所述黄芪药材，重复1~3次，收集滤液；向收集到的所述滤液中添加碳酸钠溶液，在温度为50~70℃的条件下热处理后，添加第二乙醇分离得到醇提取物，干燥得到所述黄芪甲苷。
[0017]进一步地，浸泡所述黄芪药材的步骤中，所述黄芪药材与水的体积比为1：（4~5倍），浸泡时间为1~3小时。
[0018]进一步地，所述碳酸钠溶液的质量百分浓度为5~8%。
[0019]进一步地，所述碳酸钠溶液的添加量为所述滤液体积的1~3倍。
[0020]进一步地，所述热处理的时间为6~8小时。
[0021]进一步地，所述第二乙醇的浓度不低于80%，所述第二乙醇与所述热处理后的产物的体积比为1：（1.5~3）。
[0022]进一步地，获取所述芦荟提取物的步骤包括：
获取新鲜的芦荟叶，去除所述芦荟叶的表皮后，进行破碎处理，得到破碎后的芦荟；对所述破碎后的芦荟进行蒸汽处理后，冲洗得到混合液，过滤得到芦荟提取物。
[0023]进一步地，所述蒸汽处理的条件包括：在温度为100~120℃，蒸汽量为所述破碎后的芦荟的重量的15~30%的条件下处理10~30分钟。
[0024]进一步地，所述冲洗采用喷淋的方式，水用量为所述破碎后的芦荟的重量的70~80%。
[0025]进一步地，所述过滤的处理步骤包括：对所述混合液采用不低于300目的筛网过滤后，采用孔径不大于0.22μm的滤膜对滤液进行过滤，得到所述芦荟提取物。
[0026]第三方面，本申请提供一种上述的无血清培养基在脂肪间充质干细胞培养中的应用。
[0027]本申请第一方面提供的脂肪间充质干细胞的无血清培养基，不含血清，且添加了党参、黄芪、芦荟等植物制剂，无异源性污染，不存在引起排斥反应的潜在安全隐患，培养基性能稳定，质量可靠，符合临床应用的安全性要求。其中，D本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脂肪间充质干细胞的无血清培养基，其特征在于，所述无血清培养基包括基础培养基和添加物；其中，所述基础培养基包括DMEM/F12培养基；所述添加物包括转铁蛋白、重组人胰岛素、成纤维细胞生长因子、纤连蛋白、黄芪甲苷、党参提取物和芦荟提取物。2.如权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于，所述基础培养基为DMEM/F12培养基；所述添加物由转铁蛋白、重组人胰岛素、成纤维细胞生长因子、纤连蛋白、黄芪甲苷、党参提取物和芦荟提取物组成。3.如权利要求1或2所述的无血清培养基，其特征在于，所述无血清培养基中，所述转铁蛋白的浓度为8~22μg/mL，所述重组人胰岛素的浓度为10~25μg/mL，所述成纤维细胞生长因子的浓度为10~30ng/mL，所述纤连蛋白的浓度为50~80μg/mL，所述黄芪甲苷的浓度为8~15mg/mL，所述党参提取物的浓度为2~10mg/mL，所述芦荟提取物的浓度为5~15mg/mL。4.如权利要求3所述的无血清培养基，其特征在于，所述无血清培养基中，所述转铁蛋白的浓度为10~20μg/mL，所述重组人胰岛素的浓度为12~22μg/mL，所述成纤维细胞生长因子的浓度为12~25ng/mL，所述纤连蛋白的浓度为55~75μg/mL，所述黄芪甲苷的浓度为10~13mg/mL，所述党参提取物的浓度为5~10mg/mL，所述芦荟提取物的浓度为10~15mg/mL。5.如权利要求4所述的无血清培养基，其特征在于，所述无血清培养基中，所述转铁蛋白的浓度为15μg/mL，所述重组人胰岛素的浓度为20μg/mL，所述成纤维细胞生长因子的浓度为20ng/mL，所述纤连蛋白的浓度为70μg/mL，所述黄芪甲苷的浓度为12mg/mL，所述党参提取物的浓度为10mg/mL，所述芦荟提取物的浓度为12mg/mL。6.一种脂肪间充质干细胞的无血清培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：分别获取转铁蛋白、重组人胰岛素、成纤维细胞生长因子、纤连蛋白、黄芪甲苷、党参提取物和芦荟提取物；将所述转铁蛋白、所述重组人胰岛素、所述成纤维细胞生长因子、所述纤连蛋白、所述黄芪甲苷、所述党参提取物和所述芦荟提取物与DMEM/F12培养基进行混合处理，得到脂肪间充质干细胞的无血清培养基。7.如权利要求6所述的无血...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱仕杰，朱建安，陈喆，宋强华，
申请(专利权)人：保信亚太生物科技深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：