一种吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体及其制备制造技术

本发明专利技术公开了属于抗肿瘤药物技术领域的一种吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体及其制备。该吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体，包括温度敏感阳离子脂质体和与所述温度敏感阳离子脂质体吸附的氧化石墨烯。阳离子脂质体通过静电作用将带有负电荷的核酸分子包裹起来，表面正电荷的特性通过“质子海绵效应”实现有效的溶酶体逃逸，有效递送核酸及各种类型药物。氧化石墨烯吸附于阳离子脂质体表面翻转电荷为负电荷，保护核酸的同时减弱非特异性蛋白吸附，逃避巨噬细胞吞噬，延长血液循环时间。本发明专利技术公开的吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体在核酸药物递送、抗肿瘤药物制备中具有重要应用。备中具有重要应用。备中具有重要应用。

【技术实现步骤摘要】
一种吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体及其制备


[0001]本专利技术属于抗肿瘤药物
，具体涉及一种吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体及其制备。

技术介绍

[0002]核酸药物主要指具有遗传特性和药理活性的含有核苷酸或者脱氧核苷酸的化合物，包括shRNA、miRNA、siRNA、质粒DNA。核酸药物分为RNA药物和DNA药物。RNA在血液递送过程中容易被血清中的RNA水解酶(RNAse)水解，且容易被单核吞噬系统(mononuclear phagocytic system，MPS)识别并吞噬，进入细胞后容易被溶酶体内的多种消化酶降解。RNA只有通过细胞外的“胞外屏障”和细胞内的“内体逃逸”后才能到达细胞内靶部位，最终发挥功能。为了克服以上阻碍，需要在递送RNA时将其包裹在载体内以避免被酶水解，同时药物载体还需具备溶酶体逃逸的能力。阳离子脂质体被认为是一种具有发展前景的药物载体，其通过静电作用将带有负电荷的RNA分子包裹起来，表面正电荷的特性通过“质子海绵效应”实现有效的溶酶体逃逸。然而，阳离子脂质体在体内应用时仍然存在困难。主要是阳离子脂质体与RNA的复合物表面带有正电荷，易于与带有负电荷的血清蛋白发生非特异性吸附，形成大尺寸的聚合物，该聚合物易被吞噬系统清楚，从而导致阳离子脂质体与RNA的复合物在血液中的循环能力变差。
[0003]因此，寻找一种既能避免RNA被酶水解，同时具备溶酶体逃逸的能力，又能在血液中稳定存在的药物载体具有重要意义。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术中的不足，本专利技术的目的是提出一种吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体及其制备。具体技术方案如下：
[0005]本专利技术第一方面提供一种吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体，包括温度敏感阳离子脂质体和与所述温度敏感阳离子脂质体吸附的氧化石墨烯。
[0006]本专利技术的上述技术方案中，所述吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体的平均粒径为200～300nm，优选为230～270nm；
[0007]优选地，所述氧化石墨烯与温度敏感阳离子脂质体的质量比为1:1～16，更优选为1:4～8；
[0008]优选地，所述氧化石墨烯的厚度为2～10nm，更优选为4～8nm，粒径为80～150nm，更优选为100～130nm，电位为
‑
40～
‑
30mV；
[0009]优选地，所述温度敏感阳离子脂质体的粒径为40～80nm，更优选为60～80nm，电位为30～50mV，相变温度为45～52℃。
[0010]本专利技术限定温度敏感阳离子脂质体和氧化石墨烯的粒径在上述范围内，便于控制吸附氧化石墨烯后药物载体的粒径，利于提高体内被动靶向实体瘤的高通透性和滞留效应。
[0011]本专利技术第二方面提供一种吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体的制备方法，包括如下步骤：
[0012]将氧化石墨烯水溶液超声破碎至纳米级别，得到反应液一；
[0013]将1,2
‑
二棕榈酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸胆碱、(2,3
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二油酰基
‑
丙基)
‑
三甲基氯化铵、1
‑
硬脂酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸胆碱、N
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(羰基
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甲氧基聚乙二醇2000)
‑
1,2
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二硬酯酰
‑
SN
‑
甘油
‑3‑
磷酰乙醇胺四种磷脂和有机溶剂混合，薄膜梯度压强法制备得到脂质体薄膜，用水化试剂水化脂质体薄膜，得到反应液二；
[0014]将所述反应液二与NaCl溶液孵育得到反应液三；
[0015]将反应液一加入到反应液三中，反应得到吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体。
[0016]本专利技术的上述技术方案中，所述超声破碎条件为：超声功率为800～1000W，超声1～3s，间隔1～3s，超声时间为16～20h；优选地，超声功率为850～950W，超声1～2s，间隔1～2s，超声时间为18～20h；
[0017]优选地，所述1,2
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二棕榈酰
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sn
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甘油
‑3‑
磷酸胆碱、(2,3
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二油酰基
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丙基)
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三甲基氯化铵、1
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sn
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甘油
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磷酸胆碱、N
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(羰基
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甲氧基聚乙二醇2000)
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1,2
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二硬酯酰
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SN
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甘油
‑3‑
磷酰乙醇胺的摩尔比为33：15：1：1；
[0018]优选地，所述有机溶剂为氯仿或二氯甲烷与甲醇的混合液，更优选为氯仿和甲醇的混合液，所述氯仿或二氯甲烷与甲醇的体积比为5：1～2：1，更优选为3:1～2:1；
[0019]优选地，所述薄膜梯度压强法的转速为45～52r/min，更优选为48～50r/min，旋转蒸发温度为40～45℃，更优选为42～44℃，旋转蒸发梯度压强为0.02、0.04、0.06、0.08、0.1MPa，在所述梯度压强的旋转蒸发时间为45～60min、30～40min、20～30min、20～30min、15～20min，更优选为50～55min、35～45min、22～28min、22～28min、16～18min；
[0020]优选地，所述水化试剂为磷酸盐缓冲液或超纯水，优选为不含核酸酶的超纯水，水化温度为50～60℃，更优选为54～58℃，水化时间为30～60min，更优选为40～50min；
[0021]优选地，所述NaCl溶液的pH为7～7.4，更优选为7.2～7.4，离子浓度为5～20nmol，更优选为10～15nmol；
[0022]优选地，反应液二与NaCl溶液在温度为20～30℃，搅拌转速为150～200r/min的条件为孵育20～40min；
[0023]优选地，反应液一和反应液三在温度为20～30℃，搅拌转速为150～200r/min的条件为反应24～72h；
[0024]优选地，得到所述反应液二后用细胞破碎仪进行超声处理，使得到的脂质体混悬液粒径更均一。超声处理的超声功率为100～200W，超声1～3s，间隔1～3s，超声时间为10～30min；更优选地，超声功率为150～180W，超声1～2s，间隔1～2s，超声时间为15～25min。
[0025]本专利技术第三方面提供上述的吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体在核酸药物递送、抗肿瘤药物制备中的应用。
[0026]本专利技术第四方面提供一种核酸药物的载本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体，其特征在于，包括温度敏感阳离子脂质体和与所述温度敏感阳离子脂质体吸附的氧化石墨烯。2.根据权利要求1所述的吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体，其特征在于，所述吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体的平均粒径为200～300nm；优选地，所述氧化石墨烯与温度敏感阳离子脂质体的质量比为1:1～16，更优选为1:4～8；优选地，所述氧化石墨烯的厚度为2～10nm，粒径为80～150nm，电位为
‑
40～
‑
30mV；优选地，所述温度敏感阳离子脂质体的粒径为40～80nm，电位为30～50mV，相变温度为45～52℃。3.一种吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将氧化石墨烯水溶液超声破碎至纳米级别，得到反应液一；将1,2
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二棕榈酰
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sn
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甘油
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磷酸胆碱、(2,3
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二油酰基
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丙基)
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三甲基氯化铵、1
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硬脂酰
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磷酸胆碱、N
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甲氧基聚乙二醇2000)
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二硬酯酰
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SN
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甘油
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磷酰乙醇胺四种磷脂和有机溶剂混合，薄膜梯度压强法制备得到脂质体薄膜，用水化试剂水化脂质体薄膜，得到反应液二；将所述反应液二与NaCl溶液孵育得到反应液三；将反应液一加入到反应液三中，反应得到吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体。4.根据权利要求3所述的吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体的制备方法，其特征在于，所述超声破碎条件为：超声功率为800～1000W，超声1～3s，间隔1～3s，超声时间为16～20h；优选地，所述1,2
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二棕榈酰
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甘油
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磷酸胆碱、(2,3
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二油酰基
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丙基)
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甲氧基聚乙二醇2000)
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甘油
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磷酰乙醇胺的摩尔比为33：15：1：1；优选地，所述有机溶剂为氯仿或二氯甲烷与甲醇的混合液，所述氯仿或二氯甲烷与甲醇的体积比优选为5：1～2：1；优选地，所述薄膜梯度压强法的转速为45～52r/min，旋转蒸发温度为40～45℃，旋转蒸发梯度压强为0.02、0.04、0.06、0.08、0.1MPa，在所述梯度压强的旋转蒸发时间为45～60min、30～40min、20～30min、20～30min、15～20min；优选地，所述水化试剂为磷酸盐缓冲液或超纯水，水化温度为50～60℃，水化时间为30～60min；优选地，所述NaCl溶液的pH为7～7.4，离子浓度为5～20nmol；优选地，反应液二与NaCl溶液在温度为20～30℃，搅拌转速为150～200r/min的条件为孵育20～40min；优选地，反应液一和反应液三在温度为20～30℃，搅拌转速为150～200r/min的条件为反应24～72h；优选地，对所述反应液二进行超声处理，超声处理的超声功率为100～200W，超声1～3s，间隔1～3s，超声时间为10～30min。5.权利要求1所述的吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂质体在核酸药物递送、抗肿
瘤药物制备中的应用。6.一种核酸药物的载药系统，其特征在于，包括权利要求1所述吸附氧化石墨烯的温度敏感阳离子脂...

【专利技术属性】
技术研发人员：李健，高艳婷，栗坤，石明，刘志伟，
申请(专利权)人：燕山大学，
类型：发明
国别省市：