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检测位于生物全血中血细胞外侧的至少一种核酸的体外方法以及用于该目的的装置和试剂盒制造方法及图纸

技术编号:31079259 阅读:33 留言:0更新日期:2021-12-01 11:37
本发明专利技术涉及一种用于检测位于生物全血中血细胞外侧的至少一种核酸(优选DNA和/或RNA,特别优选DNA)的体外方法、装置和试剂盒。根据本发明专利技术的方法的优点在于,与现有技术中的已知方法相比,实施该方法需要更少的时间和装置工作,并且使污染的风险和待扩增的无细胞核酸(例如,无细胞DNA)损失的风险最小化。因此,该方法比已知的无细胞核酸(例如,无细胞DNA)检测方法更经济且具有更高的检测精度。此外,与基于全血稀释的现有技术的检测方法相比,检测灵敏度首先得到提高。此外,提出使用提供的装置和提供的试剂盒。置和提供的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】检测位于生物全血中血细胞外侧的至少一种核酸的体外方法以及用于该目的的装置和试剂盒
[0001]提供用于检测位于生物全血中血细胞外侧的至少一种核酸(优选DNA和/或RNA、特别优选DNA)的体外方法、装置和试剂盒。根据本专利技术的方法的优点在于,与现有技术的已知方法相比,该方法的实施需要更少的时间和装置工作,并且使污染的风险和待扩增的无细胞核酸(例如无细胞DNA)损失的风险最小化。因此,该方法比已知的无细胞核酸(例如无细胞DNA)的检测方法更经济并且具有更高的检测精度。此外,与现有技术中基于全血稀释的检测方法相比,尤其提高了检测灵敏度。此外,还提出使用提供的装置和提供的试剂盒。
[0002]可以在生物全血中发现核酸(例如DNA和/或RNA),所述核酸位于血细胞外侧或不包含在全血中的生物双层膜中,因此可以说在生物血液中“自由”循环。这种所谓的无细胞核酸,例如可以是无细胞DNA(“cfDNA”),在血浆中的浓度可变,约为1ng/ml至1500ng/ml。它由垂死细胞产生,但例如肿瘤细胞和胎儿细胞也释放cfDNA(例如在胎儿细胞的胎盘上)。cfDNA是双链的,主要大小在约60至本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于检测位于生物全血中血细胞外侧的至少一种核酸的体外方法,其包括以下步骤:a)提供与至少一个引物对一起适合进行等温扩增反应的反应混合物,其中所述反应混合物包含至少一个引物对,所述至少一个引物对适于将存在于全血中的至少一种核酸扩增;或将至少一个这样的引物对加入到所述反应混合物中;b)将生物全血加入到所述反应混合物中;c)在≤45℃的温度下进行等温扩增反应;和d)借助至少一种检测试剂检测DNA,其中所述检测在步骤c)期间或步骤c)之后进行,其特征在于,所述反应混合物适于防止包含在所述生物全血中的血细胞裂解。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述反应混合物i)与所述全血形成液体混合物,所述液体混合物与血细胞基本上等渗;和/或ii)与所述全血形成液体混合物,所述液体混合物具有基本上对应于血细胞的渗透压的渗透压,优选渗透压为230mosmol/kg至350mosmol/kg、优选260mosmol/kg至320mosmol/kg、特别优选270mosmol/kg至310mosmol/kg、特别是280mosmol/kg至300mosmol/kg;和/或iii)不包含适于进行裂解血细胞的任何表面活性剂,优选不包含适于进行裂解血细胞的物质或物质混合物。3.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述检测试剂不适于通过所述全血中包含的血细胞的细胞膜。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述检测试剂选自荧光探针、结合DNA的染料分子、用于检测焦磷酸盐的试剂以及它们的组合,其中优选地i)所述荧光探针包含或组成为寡核苷酸,所述寡核苷酸包含或组成为:猝灭剂、荧光团和存在于所述猝灭剂与所述荧光团之间的DNA序列,其中所述DNA序列适于被核酸内切酶或核酸外切酶切割,所述DNA序列优选为DHF或AP DNA序列;和/或ii)结合DNA的染料分子选自EVAGreen、SYBR Green、Syto染料、TOPO染料以及它们的组合;和/或iii)用于检测焦磷酸盐的试剂为镁盐。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,DNA的检测通过检测单元进行,其中所述检测单元优选地选自吸收测量装置、荧光测量装置、浊度计、照相机、手机以及它们的组合。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,扩增DNA的量通过评价单元进行量化,其中所述评价单元优选地与检测单元通信连接。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,引物对中的至少一个引物、任选地引物对中的两个引物适于结合生物DNA中的重复DNA序列,优选地结合选自LINE序列、SINE序列和ALU序列的重复序列。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,引物对中的至少一个引物、任选地引物对的两个引物适于结合生物DNA中的DNA序列,所述DNA序列存在于生物患有疾病开始、期间或之后和/或过度肌肉劳损的开始、期间或之后的血液循环中。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,在步骤d)期间或之后扩增DNA的情况下,得出存在疾病和/或过度肌肉劳损的结论,其中所述疾病特别选自炎症、癌症、自
身免疫性疾病、冠状动脉、中风、败血症、染色体畸变、基因拷贝数的变化、基因突变以及它们的组合。10.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述反应混合物包含多个引物对,任选地至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个引物对,所述引物对各自适于扩增所述全血中存在的至少一种核酸;或将多个这样的引物对加入到所述反应混合物中,其中各引物对优选适于扩增不同核酸、优选存在于生物全血中的核酸,所述生物过度肌肉劳损和/或患有选自如下的疾病:炎症、癌症、自身免疫性疾病、冠状动脉、中风、败血症、染色体畸变、基因拷贝数的变化、基因突变以及它们的组合。11.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述反应混合物和所述检测试剂,任选地所述反应混合物、所述引物对和所述检测试剂包含在侧流试纸条。12.一种适于体外检测存在于生物全血中的血细胞外侧的至少一种核酸的装置和/或试剂盒,其包含a)反应混合物,所述反应混合物与至少一个引物对一起适于在≤45℃的温度下进行等温扩增反应;b)至少一个引物对,所述至少一个引物对适于扩增全血中存在的至少一种核酸,其中所述至少一个引物对任选地包含在...

【专利技术属性】
技术研发人员:拉尔夫
申请(专利权)人:约翰内斯
类型:发明
国别省市:

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