一种利用葡萄糖-金纳米粒子检测黄曲霉毒素B1的方法技术

本发明专利技术涉及化学分析领域，具体而言，涉及一种利用葡萄糖

【技术实现步骤摘要】
一种利用葡萄糖
‑
金纳米粒子检测黄曲霉毒素B1的方法


[0001]本专利技术涉及化学分析领域，具体而言，涉及一种利用葡萄糖
‑
金纳米粒子检测黄曲霉毒素B1的方法。

技术介绍

[0002]黄曲霉毒素B1(AFB1)是黄曲霉菌产生的次级代谢产物，是具有极高毒性和致癌性的天然化合物之一。因而，对黄曲霉毒素B1的监测和微量检测对于食品安全以及人类健康都有重要意义。目前常用的黄曲霉毒素B1检测方法包括高效液相色谱法，液相色谱质谱法，薄层色谱法等。然而，现有方法存在诸如耗时，费力，需要昂贵的仪器及专业操作人员等缺陷。因此，发展一种简单、快速的检测黄曲霉毒素B1的方法迫在眉睫。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种利用葡萄糖
‑
金纳米粒子检测液体样品中黄曲霉毒素B1的方法。该方法所用葡萄糖
‑
金纳米粒子因表面基团为葡萄糖，具有很好的生物相容性。这种葡萄糖
‑
金纳米粒子具有过氧化物酶样活性，能够在H2O2及醋酸
‑
醋酸钠缓冲溶液存在下，氧化3，3
′
，5，5
′‑
四甲基联苯胺，使之从无色变为蓝色，且在652nm处出现最高吸收峰。核酸适配体加入后，会吸附在金纳米粒子表面，阻断金纳米粒子表面一些活性位点，使金纳米粒子的活性降低，表现为652nm处的吸收降低。然而，加入黄曲霉毒素B1之后，因核酸适配体与黄曲霉毒素B1有高的亲和力，黄曲霉毒素B1会与核酸适配体结合，从而使核酸适配体从金纳米粒子表面脱离，使金纳米粒子的过氧化物酶样活性恢复，表现为652nm处的吸收增强。金纳米粒子的过氧化物酶样活性增强程度与黄曲霉毒素B1浓度成线性关系，所以可以检测黄曲霉毒素B1的浓度。且核酸适配体与黄曲霉毒素B1有高的特异性，因此，该检测方法具有很好的选择性，其它物质的存在不会干扰黄曲霉毒素B1的检测。因此可以利用葡萄糖
‑
金纳米粒子和核酸适配体高灵敏、选择性检测黄曲霉毒素B1。整个操作简便、快捷、耗时短，有利于黄曲霉毒素B1的快速检测。
[0004]为了实现上述目的，本专利技术实施例采用的技术方案如下：
[0005]一种利用葡萄糖
‑
金纳米粒子检测液体样品中黄曲霉毒素B1的方法，
[0006]第一步：绘制标准曲线。
[0007]将葡萄糖
‑
金纳米粒子、核酸适配体溶液、3，3
′
，5，5
′‑
四甲基联苯胺溶液和H2O2溶液混合后，培育3
‑
20分钟，用紫外分光光谱仪测其652nm处的紫外可见吸收，为I0；然后，加入不同浓度的黄曲霉毒素B1，晃动，使之充分混合，测其652nm处的紫外可见吸收，为I。用黄曲霉毒素B1的浓度作为横坐标，不同浓度下的增强倍数(I
‑
I0)/I0做纵坐标，做出标准曲线。
[0008]第二步：测液体样品中黄曲霉毒素B1的浓度。
[0009]将葡萄糖
‑
金纳米粒子、核酸适配体溶液、3，3
′
，5，5
′‑
四甲基联苯胺溶液和H2O2溶液混合后，培育3
‑
20分钟，然后，加入液体样品，晃动，使之充分混合，测其652nm处的紫外可见吸收，为I
未
。求出增强倍数(I
未
‑
I0)/I0的数值，利用标准曲线求出相应的黄曲霉毒素B1的
浓度。
[0010]其中，葡萄糖
‑
金纳米粒子是先向HAuCl4溶液中加入葡萄糖溶液，然后再加入NaOH溶液，加热搅拌至反应结束，冷却至室温后制得。
[0011]在本专利技术较佳的实施例中，
[0012]葡萄糖
‑
金纳米粒子，是在30℃时，向搅拌着的0.1
‑
0.3μmol/L HAuCl4溶液中加入0.5
‑
1.5mol/L葡萄糖溶液，然后继续搅拌升温。上述混合液升温到60℃时，向混合溶液中加入0.8
‑
2.5mol/L NaOH溶液，继续搅拌10s。冷却至室温。
[0013]在本专利技术较佳的实施例中，
[0014]HAuCl4溶液、葡萄糖溶液和NaOH溶液的体积比为：900∶100∶2
[0015]在本专利技术较佳的实施例中，
[0016]搅拌速度为300
‑
800转/min，升温速度为：3
‑
10℃/min
[0017]在本专利技术较佳的实施例中，
[0018]将葡萄糖
‑
金纳米粒子、核酸适配体溶液、3，3
′
，5，5
′‑
四甲基联苯胺溶液、H2O2溶液及醋酸
‑
醋酸钠缓冲溶液混合后，培育温度为20
‑
80℃。
[0019]在本专利技术较佳的实施例中，
[0020]加入不同浓度的黄曲霉毒素B1之后，晃动时间为10
‑
30s，使之充分混合均匀。
[0021]在本专利技术较佳的实施例中，
[0022]葡萄糖
‑
金纳米粒子、核酸适配体溶液、3，3
′
，5，5
′‑
四甲基联苯胺溶液、H2O2溶液及醋酸
‑
醋酸钠缓冲溶液的体积比为：100∶50∶300∶300∶300。
[0023]在本专利技术较佳的实施例中，
[0024]3，3
′
，5，5
′‑
四甲基联苯胺溶液的浓度为2
‑
10mmol/L；所述H2O2溶液的浓度为0.1
‑
2mol/L；所述核酸适配体溶液浓度为2
‑
8μmol/L；所述醋酸
‑
醋酸钠缓冲溶液浓度为：20
‑
50mmol/L。
[0025]在本专利技术较佳的实施例中，
[0026]核酸适配体序列为：5
′‑
GTT GGG CAC GTG TTG TCT CTC TGT GTC TCG TGC CCT TCG CTA GGG CCC
‑
NH2‑3′
。
[0027]在本专利技术较佳的实施例中，
[0028]醋酸
‑
醋酸钠缓冲溶液的pH为3.6
‑
5.4。
[0029]本专利技术的有益效果是：
[0030]本专利技术提供了一种利用葡萄糖
‑
金纳米粒子、核酸适配体溶液、3，3
′
，5，5
′‑
四甲基联苯胺溶液、H2O2溶液及醋酸
‑
醋酸钠缓冲溶液检测黄曲霉毒素B1的方法。这种葡萄糖
‑
金纳米粒子具有过氧化物酶样活性，能够在H2O2及醋酸
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用葡萄糖
‑
金纳米粒子检测液体样品中黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，第一步：将葡萄糖
‑
金纳米粒子、核酸适配体溶液、3，3
′
，5，5
′‑
四甲基联苯胺溶液、H2O2溶液及醋酸
‑
醋酸钠缓冲溶液混合后，培育3
‑
20分钟，用紫外分光光谱仪测其在652nm处的紫外可见吸收，为I0；然后，加入不同浓度的黄曲霉毒素B1，晃动，使之充分混合，测其在652nm处的紫外可见吸收，为I。用黄曲霉毒素B1的浓度作为横坐标，不同浓度下的增强倍数(I
‑
I0)/I0做纵坐标，做出标准曲线；第二步：测液体样品中黄曲霉毒素B1的浓度将葡萄糖
‑
金纳米粒子、核酸适配体溶液、3，3
′
，5，5
′‑
四甲基联苯胺溶液、H2O2溶液及醋酸
‑
醋酸钠缓冲溶液混合后，培育3
‑
20分钟，然后加入液体样品，晃动，使之充分混合，测其在652nm处的紫外可见吸收，为I
未
。求出增强倍数(I
未
‑
I0)/I0的数值，利用标准曲线求出相应的黄曲霉毒素B1的浓度；所述葡萄糖
‑
金纳米粒子是先向HAuCl4溶液中加入葡萄糖溶液，然后再加入NaOH溶液，加热搅拌至反应结束，冷却至室温后制得。2.如权利要求1所述的利用葡萄糖
‑
金纳米粒子检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，所述葡萄糖
‑
金纳米粒子，是在30℃时，向搅拌着的0.1
‑
0.3μmol/L HAuCl4溶液中加入0.5
‑
1.5mol/L葡萄糖溶液，然后继续搅拌升温；上述混合液升温到60℃时，向混合溶液中加入0.8
‑
2.5mol/L NaOH溶液，继续搅拌10s。冷却至室温。3.如权利要求2所述的利用葡萄糖
‑
金纳米粒子检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，所述HAuCl4溶液、葡萄糖溶液和NaOH溶液的体积比为：900∶100∶2。4.如权利要求2所述的利用葡萄糖
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金纳米粒子检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，搅拌速度为300
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【专利技术属性】
技术研发人员：姜翠凤，王金山，罗驹华，
申请(专利权)人：盐城工学院，
类型：发明
国别省市：