一锅式核酸-抗体共检测方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种一锅式核酸抗体共检测方法及应用，涉及体外诊断领域。本发明专利技术通过设计制备特异性抗抗体

【技术实现步骤摘要】
一锅式核酸
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抗体共检测方法及应用


[0001]本专利技术涉及体外诊断领域，尤其涉及一种核酸和抗体共检测方法。

技术介绍

[0002]蛋白质(抗原或抗体)和核酸(DNA或RNA)是体外诊断的两个主要目标类别，通常需要独立的平台，无法在单个平台上同时得到核酸和蛋白检测结果。
[0003]核酸检测涉及各种聚合酶链反应(PCR)策略，如经典PCR、实时PCR、多重PCR和数字PCR，可以检测低水平的核酸；蛋白质检测一般采用结合电场效应、纳米结构氧化锆、微流体、荧光、磁阻纳米线网、光纤、电化学等方法的生物传感器和夹心免疫分析，然而，这些方法由于缺乏信号放大设备导致检测灵敏度有限。
[0004]微流控技术由于芯片制备所用材料生物相容性不够好，可能会引起细胞功能发生改变。同时，由于芯片制备工艺复杂，对单细胞分离检测难以控制，大规模推广仍有较大困难。单细胞蛋白质印迹法(western blot)结合了聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS
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PAGE)的分子筛效应，该方法主要用于细胞裂解液中的痕量蛋白表达，但在生物样品本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种一锅式固相核酸
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抗体共检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、设计制备抗抗体
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寡核苷酸邻位延伸探针、多重PCR引物和Taqman探针；步骤2、使用抗原预包被反应管；步骤3、在反应管中加入待测生物样品；步骤4、将抗抗体
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寡核苷酸探针加入反应管；步骤5、在反应管中加入延伸体系，进行邻位延伸反应；步骤6、进行反转录荧光定量PCR，读取多重探针荧光强度，实现对目标核酸
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抗体的定量分析。2.权利要求1所述的一锅式固相核酸
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抗体共检测方法，其特征在于步骤1所述特异性抗抗体
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寡核苷酸邻位延伸探针包括抗抗体和寡核苷酸序列，所述抗抗体与寡核苷酸连接方式包括通过胺
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巯基交联剂进行交联反应，链霉亲和素
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寡核苷酸与生物素化多克隆抗体反应。3.权利要求2所述的一锅式核酸
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抗体共检测方法，其特征在于所述寡核苷酸序列包括与Taqman探针、PCR引物的结合位点。4.权利要求1所述的一锅式核酸
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抗体共检测方法，其特征在于步骤2具体操作如下：步骤2.1、将PCR管用8％戊二醛溶液处理，使用包被缓冲液稀释抗原，取稀释后抗原加入到处理后的PCR管中孵育过夜；步骤2.2、将处理后的预包被管用洗涤缓冲液洗涤，添加1％BSA的1
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PBS封闭后再洗涤。5.权利要求1所述的一锅式核酸
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抗体共检测方法，其特征还在于步骤3具体操作如下：步骤3.1、在抗原包被管中加入待测样品孵育，然后用洗涤缓冲液洗涤；步骤3.2、在管中加入探针后，在室温下摇动，用洗涤缓冲液洗涤。6.权利要求1所述的一锅式核酸
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抗体共检测方法，其特征还在于步骤5所述延伸体系包含5x反应缓冲液，T4 DNA聚合酶和dNTP混合物。7.权利要求1～7所述任何一项一锅式核酸
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抗体共检测方法在新型冠状肺炎病毒检测中的应用，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁显廷，严思嘉，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：