用于通过对经保存细胞的挽救和连续传代来提高微生物保存产量的方法、装置和系统制造方法及图纸

本公开提供了提高保存之后的微生物活力的方法，所述方法包括使靶微生物细胞群体经受一种或多种保存激发以及使用由所述方法产生的经保存的活力增强的微生物细胞群体制备产品。本公开还提供了包含通过本文所述的方法产生的经保存的活力增强的微生物细胞的产品。生的经保存的活力增强的微生物细胞的产品。生的经保存的活力增强的微生物细胞的产品。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于通过对经保存细胞的挽救和连续传代来提高微生物保存产量的方法、装置和系统
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年2月28日提交的美国临时申请号62/812,232的优先权，所述临时申请的内容以引用的方式整体并入。
[0003]以电子方式提交的文本文件的说明
[0004]与本申请相关的序列表以文本格式而非纸质副本形式提供，并据此以引用的方式并入本说明书。含有序列表的文本文件的名称是ASBI
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017_01WO_ST25.txt。所述文本文件是8kb，创建于2020年2月28日，并且通过EFS
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Web以电子方式提交。

技术介绍

[0005]微生物在自然界中作为群落共存并参与各种相互作用，从而导致个体群落成员之间的合作和竞争。微生物生态学的进步揭示了大多数群落中高水平的物种多样性和复杂性。微生物在环境中无处不在，寄居于生物圈内的各种生态系统中。单独微生物及其相应的群落在诸如海洋场所(深海和海洋表面)、土壤和动物组织(包括人体组织)的环境中发挥独特的作用。

技术实现思路

[0006]在一些实施方案中，本公开提供了一种提高保存之后的微生物活力的方法，所述方法包括：使靶微生物细胞群体经受第一保存激发以提供经激发的微生物细胞群体；从所述经激发的微生物细胞群体收获活的经激发的微生物细胞；保存所述活的经激发的微生物细胞以提供经保存的活力增强的微生物细胞群体；以及使用所述经保存的活力增强的微生物细胞群体制备产品。
[0007]在一些实施方案中，所述第一保存激发包括冷冻干燥、冻干、低温保存、通过蒸发达成的保存、通过泡沫形成达成的保存、玻璃化、通过玻璃形成达成的稳定化、通过汽化达成的保存、喷雾干燥、吸附干燥、挤出或流化床干燥中的一者。在一些实施方案中，保存所述活的经激发的细胞包括冷冻干燥、冻干、低温保存、通过蒸发达成的保存、通过泡沫形成达成的保存、玻璃化、通过玻璃形成达成的稳定化、通过汽化达成的保存、喷雾干燥、吸附干燥、挤出干燥或流化床干燥。在一些实施方案中，使所述经激发的细胞群体经受至少一种另外的保存激发。
[0008]在一些实施方案中，本公开提供了一种用于微生物活力增强和保存的方法，所述方法包括：使靶微生物细胞群体经受第一保存激发以提供第一经激发的微生物细胞群体；从所述第一经激发的微生物细胞群体收获活的经激发的微生物细胞以提供第一活的经激发的微生物细胞群体；使所述第一活的经激发的微生物细胞群体经受第二保存激发以提供第二经激发的微生物细胞群体；从所述第二经激发的微生物细胞群体收获活的经激发的微生物细胞以提供第二活的经激发的微生物细胞群体；保存所述第二活的经激发的微生物细胞群体以提供经保存的活力增强的微生物细胞群体；以及使用所述经保存的活力增强的微
ID NO:9具有至少97％序列同一性的16S rRNA序列；所述普雷沃菌属种包含与SEQ ID NO:10具有至少97％序列同一性的16S rRNA序列；或者毛螺菌科的所述物种包含与SEQ ID NO:12具有至少97％序列同一性的16S rRNA序列。
附图说明
[0014]图1提供示出根据本公开的方法的工艺流程图。
[0015]图2提供根据本公开的实施方案的激发/挽救活力增强的流程。
[0016]图3提供将公开的方法应用于两种不同微生物的示例性结果。
具体实施方式
[0017]综述
[0018]根据本公开的一些实施方案，用于激发/挽救活力增强的方法、装置和系统，包括通过细胞的挽救和连续激发/传代来提高微生物稳定/保存产量。作为非限制性实例，此类方法可用于形成合成集合体、合成生物集合体和/或活微生物产品。在一些实施方案中，此类合成集合体含有和/或包含一种或多种稳定化的和/或保存的微生物，例如，如以下中的一项或多项中所公开的一种或多种微生物：美国专利申请公布号2018/0310592、2018/0333443和2018/0223325(各自出于所有目的以引用的方式明确并入本文)。
[0019]根据本公开的一些实施方案，用于激发/挽救活力增强的方法、装置和系统，包括通过细胞的挽救和连续激发/传代来提高微生物稳定/保存产量。作为非限制性实例，此类方法可用于形成合成集合体、合成生物集合体和/或活微生物产品。在一些实施方案中，此类合成集合体含有和/或包含一种或多种稳定化的和/或保存的微生物。
[0020]根据一些实施方案，鉴定了靶菌株。然后，一旦鉴定了靶菌株，就生长所述菌株的第一培养物，然后从所述第一培养物收获细胞。一旦收获，就可设置/建立激发前基线和/或测试初始活力。收获后，将细胞制备用于激发，例如，通过与保存溶液合并。作为非限制性示例，示例性保存溶液可包括：细胞内保护剂(例如，糖类，尤其是非还原糖类；糖醇，如山梨糖醇；和/或类似物)、pH缓冲剂(例如，谷氨酸单钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和/或类似物)、膜保护剂(例如，聚乙烯吡咯烷酮K
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15和/或类似物)以及有助于保存的组分(例如，在适用的情况下，用于玻璃形成的蔗糖等)和有助于质量控制的组分(例如，氧化还原指示剂，如与厌氧微生物一起使用的刃天青等)。一旦细胞准备好用于激发，就进行第一保存激发。保存/稳定化激发的示例可包括但不限于：冷冻干燥/冻干、低温保存、通过蒸发达成的保存、通过泡沫形成达成的保存、玻璃化/通过玻璃形成达成的稳定化、通过汽化达成的保存、喷雾干燥、吸附干燥、挤出或流化床干燥和/或类似方法。根据一些实施方案，在掺入最终产品中和/或形成最终产品之前可能存在多个激发。在一些实施方案中，一个或多个激发可与最终保存/稳定化相同，而在其它实施方案中，可使用多于一种类型的激发，所述激发中的每一者可与最终保存相同或不同。例如，当PBV是最终稳定化/保存步骤时，一个或多个激发可包括PBV激发，并且在一些实施方案中，除了PBV激发和最终PBV过程之外，还可包括低温保存激发。
[0021]一旦进行了第一保存激发，就制备经激发的菌株/经保存的细胞并在挽救培养物中生长，并且从所述挽救培养物收获细胞并测试活力。经激发的菌株可被制备用于并且经受一个或多个另外的激发(如上文所讨论的，所述一个或多个另外的激发可与先前的一个
或多个激发和/或最终保存/稳定化相同或不同)。一旦激发已经完成，就从挽救培养物收获存活经激发的细胞用于保存/稳定化，并且所述收获的经激发的细胞被保存/稳定化以提供活力增强的细胞。然后，活力增强的细胞可用于最终产品和/或掺入最终产品中，所述最终产品如集合体、活微生物饲料添加剂、活微生物饲料补充剂和/或类似物。
[0022]定义
[0023]除非上下文另外清楚地指示，否则如本申请中所用，单数形式“一个/种(a/an)”和“所述”包括复数个指示物。因此，例如，术语“生物体类型”意图表示单一生物体类型或多种生物体类型。对于另一个实例，术语“环境参数”可表示单一环境参数或多个环境参数，因此不定冠词“一个/种(a/an)”不排除存在多于一个环境参数的可能性，除非本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种提高保存之后的微生物活力的方法，所述方法包括：a.使靶微生物细胞群体经受第一保存激发以提供经激发的微生物细胞群体；b.从所述经激发的微生物细胞群体收获活的经激发的微生物细胞；c.保存所述活的经激发的微生物细胞以提供经保存的活力增强的微生物细胞群体；以及d.使用所述经保存的活力增强的微生物细胞群体制备产品。2.如权利要求1所述的方法，其中所述第一保存激发包括冷冻干燥、冻干、低温保存、通过蒸发达成的保存、通过泡沫形成达成的保存、玻璃化、通过玻璃形成达成的稳定化、通过汽化达成的保存、喷雾干燥、吸附干燥、挤出或流化床干燥中的一者。3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中保存所述活的经激发的细胞包括冷冻干燥、冻干、低温保存、通过蒸发达成的保存、通过泡沫形成达成的保存、玻璃化、通过玻璃形成达成的稳定化、通过汽化达成的保存、喷雾干燥、吸附干燥、挤出干燥或流化床干燥。4.如权利要求1
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3中任一项所述的方法，所述方法还包括使所述经激发的细胞群体经受至少一种另外的保存激发。5.一种用于微生物活力增强和保存的方法，所述方法包括：a.使靶微生物细胞群体经受第一保存激发以提供第一经激发的微生物细胞群体；b.从所述第一经激发的微生物细胞群体收获活的经激发的微生物细胞以提供第一活的经激发的微生物细胞群体；c.使所述第一活的经激发的微生物细胞群体经受第二保存激发以提供第二经激发的微生物细胞群体；d.从所述第二经激发的微生物细胞群体收获活的经激发的微生物细胞以提供第二活的经激发的微生物细胞群体；e.保存所述第二活的经激发的微生物细胞群体以提供经保存的活力增强的微生物细胞群体；以及f.使用所述经保存的活力增强的微生物细胞群体制备产品。6.如权利要求5所述的方法，其中所述第一保存激发和所述第二保存激发具有相同的激发类型。7.如权利要求5所述的方法，其中所述第一保存激发和所述第二保存激发具有不同的激发类型。8.如权利要求5所述的方法，其中所述第一保存激发和所述第二保存激发选自表1中描述的组合。9.如权利要求5
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8中任一项所述的方法，所述方法还包括使所述第二经激发的细胞群体经受至少一种另外的保存激发。10.如权利要求5
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9中任一项所述的方法，其中保存所述第二活的经激发的细胞群体包括冷冻干燥、冻干、低温保存、通过蒸发达成的保存、通过泡沫形成达成的保存、玻璃化、通过玻璃形成达成的稳定化、通过汽化达成的保存、喷雾干燥、吸附干燥、挤出干燥或流化床干燥。11.如权利要求1
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10中任一项所述的方法，其中所述靶微生物细胞群体包含梭菌属种细菌、琥珀酸弧菌属种细菌、丁酸弧菌属种细菌、芽孢杆菌属种细菌、乳酸菌属种细菌、普雷
沃菌属种细菌、互营球菌属种细菌或瘤胃球菌属种细菌。12.如权利要求1
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10中任一项所述的方法，其中所述靶微生物细胞群体包含盲肠鞭菌属种真菌、毕赤酵母属种真菌、根囊鞭菌属种真菌或梨囊鞭菌属种真菌。13.如权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：S吉尔莫，C道奇，
申请(专利权)人：原生微生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：