L-FABP的免疫测定方法以及用于所述方法的测定试剂技术

[问题]本发明专利技术提供使用抗L

【技术实现步骤摘要】
L
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FABP的免疫测定方法以及用于所述方法的测定试剂
[0001]本申请是国际申请号PCT/JP2016/055576，国际申请日2016年2月25日，中国申请号201680023791.7，专利技术名称为“L
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FABP的免疫测定方法以及用于所述方法的测定试剂”的专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及使用抗L
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FABP抗体的用于L
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FABP的免疫学测定方法以及该方法中使用的测定试剂。

技术介绍

[0003]脂肪酸结合蛋白(FABP)是存在于细胞溶胶中并具有约14千道尔顿的分子量和结合脂肪酸的能力的一组蛋白质，并且包括至少七种已知分子种类，如肝脏型(L
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FABP)、肠型(I
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FABP)、心型(H
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FABP)、脑型(B
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FABP)、皮肤型(C
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FABP/E
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FABP)、脂肪细胞型(aP2)和外周神经细胞型(髓磷脂P2)，这些被认为是由共同的祖先基因进化来的家族。尽管每种类型的FABP显示出特定的组织分布，但是名称表明在其中首先发现该类型的组织，而不必然表示该类型仅存在于所述组织中。例如，至少两种类型的FABP，即肝脏型(L
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FABP)和心型(H
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FABP)在人肾脏组织中表达，其中L
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FABP分布在近端小管中，而H
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FABP主要分布在远端小管中(Maatman等，Biochemical Journal，第288卷，第285
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290页，1992；Maatman等，Biochemical Journal，第273卷，第759
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766页，1991)。
[0004]专利文献1公开了一种肾病检查方法，其特征在于关注L
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FABP在肾组织中的表达与肾病的预后之间的关系和检测试验样品中存在的来源于肾组织的脂肪酸结合蛋白。更具体地，在描述的实例中，使用由肾病患者收集的尿作为样品，通过使用抗小鼠L
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FABP多克隆抗体利用夹心ELISA测定渗漏到尿中的L
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FABP的量。然而，没有描述详细的测定条件(样品处理和抗原
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抗体反应的条件)、检测灵敏度、测定值等。
[0005]在专利文献2中，公开了一种脓毒症或多器官功能衰竭的预测方法，其中，根据以下发现：通过用氧化还原剂如血红素(氯[3，7，12，17
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四甲基
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8，13
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二乙烯基卟啉
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2，18
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二丙酸(2
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)]铁(III)，也称为氯(卟啉)合铁(III)络合物(chloro(porphyrinato)iron(III)complex))处理尿来增强尿L
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FABP的免疫反应性，和当增强度(诱导倍数)越大时患有脓毒症或多器官功能衰竭的患者的预后越差，通过使用特定抗体的ELISA检测L
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FABP，以比较用氧化还原剂处理之前和之后的收集尿样品中的检测值。
[0006]另外，专利文献3公开了一种方法，其中将选自还原剂(谷胱甘肽、半胱氨酸、青霉胺等)、离液剂(尿素、胍等)和表面活性剂(正十二烷基苯磺酸钠等)中的一种或两种化合物作为变性剂添加到尿样品用于以这些化合物预处理尿样品从而改善免疫测定的灵敏度，即对作为分析物的尿蛋白的测定灵敏度，并且L
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FABP被描述为尿蛋白的实例。然而，作为测定尿蛋白的方法的一个具体实例，仅描述了用变性剂处理巨蛋白(megalin)，以用于利用使用识别两个不同表位的抗人巨蛋白LBD1单克隆抗体的夹心ELISA进行检测，而没有包括关于L
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FABP检测的具体描述。
[0007]另一方面，专利文献4公开了一种肾病的检查方法及其检查试剂盒，其特征在于使用以量子点标记的探针和检测试验样品中存在的来源于肾组织的L
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FABP。该文献中描述的一个具体实例是使用以量子点标记的探针的免疫色谱，滴下并展开未进行如稀释的操作的尿样品用于免疫色谱，当施加激发光(波长：350nm)时，通过红色荧光裸眼观察L
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FABP与量子点标记的单克隆抗体之间的复合物的捕获量。
[0008]引用列表
[0009]专利文献
[0010]专利文献1：日本已公开的专利公开第H11
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242026号
[0011]专利文献2：日本已公开的专利公开第2011
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22000号
[0012]专利文献3：日本已公开的专利公开第2014
‑
85208号
[0013]专利文献4：WO 2009/081680

技术实现思路

[0014]技术问题
[0015]本专利技术人尝试通过乳胶比浊免疫测定(latex turbidimetric immunoassay，以下有时称为LTIA)检测L
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FABP，以开发更快和更简单的测定L
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FABP的方法。当利用具有包含作为第一试剂的缓冲液和作为第二试剂的含有固定化抗L
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FABP抗体的乳胶颗粒的缓冲液的一般构成的LTIA试剂测定L
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FABP时，无法获得期望的灵敏度，并且在尿L
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FABP的测定中，在与基于ELISA的体外诊断产品(Renapro(注册商标)L
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FABP试验TMB(由Cmic Holdings制造))的相关性方面也无法获得期望性能。
[0016]本专利技术要解决的问题是提供使用抗L
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FABP抗体的用于样品中的L
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FABP的免疫学测定方法，其检测灵敏度等于或大于现有的基于ELISA的体外诊断产品的检测灵敏度，并且具有良好相关性。本专利技术要解决的另一问题是提供用于使用抗L
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FABP抗体的用于样品中的L
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FABP的免疫学测定方法的试剂和试剂盒。
[0017]问题的解决方案
[0018][1]一种利用抗L
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FABP抗体检测样品中的L
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FABP(肝脏型脂肪酸结合蛋白)的方法，其包括使抗L
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FABP抗体以及分子中具有NH2‑
C＝N
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局部结构和环状结构的化合物与疑似包含L
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FABP的样品接触的步骤。
[0019][2]根据以上第[1]项所述的方法，其中所述分子中具有NH2‑
C＝N
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局部结构和环状结构的化合物为选自式(1)表示的化合物或其盐或酯和式(2)表示的化合物或其盐中的一种或两种以上：
[0020本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.(a)第一试剂和(b)第二试剂在制备免疫测定尿样品中的L
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FABP的乳胶比浊免疫测定试剂盒中的用途，其中所述第一试剂用于预处理所述尿样品，其中所述第一试剂包含分子中具有NH2‑
C＝N
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局部结构和环状结构的化合物，其中所述第二试剂包含其上固定了抗L
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FABP抗体的乳胶颗粒，其中所述分子中具有NH2‑
C＝N
‑
局部结构和环状结构的化合物是苯甲脒盐酸盐、苯甲脒盐酸盐水合物、2
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氨基
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噻唑啉盐酸盐和肌酸酐的一种或多种，其中所述化合物的浓度为300mmol/L至500mmol/L。2.根据权利要求1所述的用途，其中免疫测定尿样品中的L
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FABP与现有的基于ELISA的体外诊断产品具有良好相关性。3.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：小林幸司，松本拓二，山本光章，
申请(专利权)人：积水医疗株式会社，
类型：发明
国别省市：