一种实时荧光监测冷冻聚焦离子束加工装置及方法制造方法及图纸

本发明专利技术涉及一种实时荧光监测冷冻聚焦离子束加工装置及方法，包括真空腔室、离子束系统和荧光成像系统。其中，真空腔室内设置有冷台，用于放置冷冻样品，冷冻样品内设有荧光标记物。离子束系统设于真空腔室上，指向冷冻样品设置，用于对冷冻样品进行离子束加工。荧光成像系统设于真空腔室上，位于冷冻样品的下方，用于对冷冻样品进行实时光学成像。加工时，通过荧光成像系统对冷冻样品发射激发光，激发样品中的荧光标记物发射荧光，荧光被荧光成像系统接收形成冷冻样品中目标结构的图像。通过对荧光图像和信号的监测分析，实时监控冷冻样品的加工过程，实现了冷冻样品的原位实时监测加工，无需转移，提高了目标结构的加工准确度，缩短了加工时间。缩短了加工时间。缩短了加工时间。

【技术实现步骤摘要】
一种实时荧光监测冷冻聚焦离子束加工装置及方法


[0001]本专利技术涉及显微成像的
，尤其涉及一种实时荧光监测冷冻聚焦离子束加工装置及方法。

技术介绍

[0002]冷冻电镜技术通过快速冷冻或高压冷冻技术把生物样品冷冻在近生理状态，保存高分辨结构。而电子断层成像技术是冷冻电镜的重要技术手段。通过对冷冻样品的系列倾转成像，进行三维重构，得到生物样品超微结构的高分辨三维结构。由于透射样品只能观察几十至几百纳米厚的样品。对于几微米甚至更厚的细胞组织样品，无法直接观察，需要进行切片。对冷冻的生物样品切片的技术主要有两类：一类是使用冷冻超薄切片机对样品进行切片。使用钻石刀可以切到约100nm厚的切片。但该技术难度大，不易普及，且切片产生皱褶形变，冰晶污染等问题，而且成功率很低。另一种技术是使用冷冻聚焦离子束技术。利用聚焦到几纳米的高能离子束对样品进行加工，可以得到非常平整的200nm左右的生物薄片样品。该技术成为目前非常重要的技术手段。
[0003]对于冷冻聚焦离子束技术的操作中，对冷冻样品精确的定位切割加工是非常重要的技术环节，冷冻双束扫描本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种实时荧光监测冷冻聚焦离子束加工装置，其特征在于，包括：真空腔室(1)，内部设置有冷台(3)，用于存放冷冻样品(8)，所述冷冻样品(8)内设有荧光标记物；离子束系统(6)，设于所述真空腔室(1)上，并指向所述冷冻样品(8)设置，用于对所述冷冻样品(8)进行离子束加工；荧光成像系统(2)，设于所述真空腔室(1)上，并位于所述冷冻样品(8)的下方，用于对所述冷冻样品(8)发射激发光并进行实时光学成像。2.根据权利要求1所述的实时荧光监测冷冻聚焦离子束加工装置，其特征在于，所述荧光成像系统(2)包括沿光路依次设置的激光器(207)、物镜(201)、反光镜(202)、镜筒透镜(203)、二向色镜(204)、滤光片(205)和图像探测器(206)；其中，所述真空腔室(1)上设有荧光窗口(110)，所述荧光窗口(110)位置密封连接有真空法兰(209)；所述真空法兰(209)一端连接有光学连接筒(208)，另一端连接有底座(210)，所述光学连接筒(208)位于所述真空腔室(1)外侧，所述底座(210)位于所述真空腔室(1)内侧；所述物镜(201)和所述反光镜(202)均设于所述底座(210)上；所述镜筒透镜(203)、所述二向色镜(204)、所述滤光片(205)均设于所述光学连接筒(208)内，所述图像探测器(206)设于所述光学连接筒(208)远离所述真空法兰(209)的一侧；所述真空法兰(209)的中心设置有透光片，所述透光片用于对所述真空腔室(1)进行密封；所述光学连接筒(208)的筒壁的支路上还设有激光器(207)，所述激光器(207)位于所述二向色镜(204)与滤光片(205)垂直的一侧。3.根据权利要求2所述的实时荧光监测冷冻聚焦离子束加工装置，其特征在于，所述底座(210)上设置有线性平移台(211)；所述物镜(201)和所述反光镜(202)均设于所述线性平移台(211)上，所述线性平移台(211)工作能够带动所述物镜(201)和所述反光镜(202)向靠近和/或远离所述冷冻样品(8)的方向移动。4.根据权利要求3所述的实时荧光监测冷冻聚焦离子束加工装置，其特征在于，所述线性平移台(211)上还设有物镜调节装置和反光镜调节装置；所述物镜(201)设于所述物镜调节装置上，所述物镜调节装置适于带动所述物镜(201)三维移动和/或倾转；所述反光镜(202)设于所述反光镜调节装置上，所述反光镜调节装置适于带动所述反光镜(202)平面移动和/或倾转。5.根据权利要求4所述的实时荧光监测冷冻聚焦离子束加工装置，其特征在于，所述物镜调节装置包括物镜倾转台(213)和物镜平移台(212)；所述物镜(201)设于所述物镜平移台(212)上，所述物镜平移台(212)设于所述物镜倾转台(213)上，所述物镜倾转台(213)设于所述线性平移台(211)上，所述物镜平移台(212)工作能够带动所述物镜(201)三维移动，所述物镜倾转台(213)工作能够带动所述物镜(201)倾转。
6.根据权利要求4所述的实时荧光监测冷冻聚焦离子束加工装置，其特征在于，所述反光镜调节装置包括反光镜平移台(214)和反光镜倾转台(215)；所述反光镜(202)设于所述反光镜倾转台(215)上，所述反光镜倾转台(215)设于所述反光镜平移台(214)上，所述反光镜平移台(214)设于所述线性平移台(211)上，所述反光镜倾转台(215)工作能够带动所述反光镜(202)倾转，所述反光镜平移台(214)工作能够带动所述反光镜(202)平面移动。7.根据权利要求1所述的实时荧光监测冷冻聚焦离子束加工装置，其特征在于，所述真空腔室(1)上还设有电子束系统(5)，用于对所述冷冻样品(8)进行电子束成像；所述电子束系统(5)相对...

【专利技术属性】
技术研发人员：季刚，李硕果，孙飞，
申请(专利权)人：中国科学院生物物理研究所，
类型：发明
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