一种尿酸的检测方法及其应用技术

本发明专利技术属于生物化学技术检测领域，尤其涉及一种尿酸的检测方法及其应用。本发明专利技术将胍基杯[5]芳烃和荧光素钠制成混合溶液，将待测样品加入混合溶液中，通过荧光信号的改变来检测所述待测样品中尿酸的浓度，该方法具有高灵敏度、高选择性、快速简易的特点，能够简便、高效地检测出待测样品中的尿酸。该检测方法几乎不受尿液中其他干扰成分的影响，能够用于尿液中尿酸的检测；并可通过在紫外线(366nm)下样品的荧光变化实现尿酸的检测，从而应用于便携式、可视化的无创尿酸检测方法的开发。可视化的无创尿酸检测方法的开发。可视化的无创尿酸检测方法的开发。

【技术实现步骤摘要】
一种尿酸的检测方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物化学技术检测领域，尤其涉及一种尿酸的检测方法及其应用。

技术介绍

[0002]高尿酸血症是由于尿酸排泄不足或/和肾脏过载导致血清尿酸浓度过高引发的疾病。血中尿酸量过高是导致尿酸盐沉积，诱发痛风的关键风险因素。此外，高尿酸血症还与肾脏疾病、心血管疾病、糖尿病等疾病密切相关。尿酸是人体内嘌呤代谢的产物，三分之二尿酸通过尿液排出体外。在检测的体液样本中，尿液具有生物信息集成度高、样本采集无创、低生物风险性等优势，是多种代谢性疾病早期诊断的首选生物样本。
[0003]目前，尿液中尿酸的检测方法有电化学法、荧光光谱法、高效液相色谱法、液相色谱
–
质谱联用法等。这些方法具有较高的选择性和灵敏度，但存在样品预处理复杂、操作繁琐、检测时间长及成本高等缺点。因此，亟待开发一种快速、简便、低成本且高灵敏度的尿液中尿酸检测方法，将对高尿酸血症的早期预警具有重要意义。

技术实现思路

[0004]针对以上技术问题，本专利技术提供了一种尿酸的检测方法及其应用，基于指示剂置换(Indicator displacement assays，IDA)策略，实现了尿液中尿酸的检测，该检测方法具有高灵敏度、高选择性、快速简易的特点，能够简便、高效地检测出待测样品中的尿酸。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术第一方面提供了一种尿酸的检测方法：将胍基杯[5]芳烃和荧光素钠制成混合溶液，将待测样品加入所述混合溶液中，通过荧光信号的改变来检测所述待测样品中尿酸的浓度。
[0006]相对于现有技术而言，本专利技术以胍基杯[5]芳烃(GC5A)
·
荧光素钠(Fl)为主客体对，加入的尿酸与Fl竞争结合GC5A的空腔，将Fl从GC5A
·
Fl主客体络合物中置换出来，Fl恢复在溶液中的发光性能，荧光信号增敏(Switch
‑
on)。通过荧光强度与尿酸浓度的线性关系，可实现尿酸简便、高效的检测。其中胍基杯[5]芳烃即5,11,17,23,29
‑
五胍基
‑
31,32,33,34,35
‑
五(4
‑
甲基戊烷氧基)杯[5]芳烃，为上缘胍基修饰的杯[5]芳烃。
[0007]结合第一方面，在HEPES缓冲液中检测尿酸浓度时，所述胍基杯[5]芳烃与所述荧光素钠的最终浓度分别为0.8μmol/L和1μmol/L。
[0008]本专利技术第二方面提供了上述检测方法在检测尿液中尿酸浓度中的应用。该检测方法几乎不受尿液中其他干扰成分的影响，能够用于尿液中尿酸的检测。
[0009]结合第二方面，用上述检测方法检测尿液中尿酸可采用以下操作：取人工尿液，离心后收集上清液，用HEPES缓冲液稀释后与含有胍基杯[5]芳烃和荧光素钠的溶液混合，逐步滴入以人工尿液为溶剂的尿酸溶液，测定荧光素钠的荧光强度，以尿酸浓度与荧光素钠的荧光强度值建立尿酸检测的线性关系，利用所述线性关系检测尿液中的尿酸浓度。
[0010]优选地，所述以人工尿液为溶剂的尿酸溶液中尿酸的浓度范围为0～50μmol/L。在该浓度范围内，尿酸浓度与荧光强度呈良好的线性关系。
[0011]优选地，所述含有胍基杯[5]芳烃和荧光素钠的溶液中，所述胍基杯[5]芳烃与所述荧光素钠的浓度分别为8μmol/L和4μmol/L。
[0012]本专利技术第三方面提供了上述检测方法在利用拍摄工具进行尿酸浓度检测中的应用。利用上述检测方法借助拍摄工具进行尿酸浓度检测时，可通过紫外线(366nm)照射产生的荧光变化，经色彩处理提取其G值，建立G值与尿酸浓度的线性关系，从而实现便携式、可视化的尿液中尿酸浓度的检测。
[0013]结合第三方面，用上述检测方法在利用拍摄工具进行尿酸检测可采用以下步骤：
[0014]用HEPES缓冲液配制GC5A
·
F1主客体对混合溶液，加入不同用量的尿酸，即得一系列浓度的尿酸溶液；将所述尿酸溶液在366nm紫外线下照射，用拍摄工具拍照，提取所得图片的绿色强度值(G值)，以尿酸浓度与所述G值建立尿酸检测的线性关系；利用所述线性关系检测待测样品中的尿酸浓度。
[0015]用上述检测方法利用拍摄工具对尿液进行尿酸浓度检测时可采用以下操作：
[0016]取真实尿液离心并收集上清液，加入HEPES缓冲液稀释，得稀释液，将胍基杯[5]芳烃和荧光素钠的混合溶液及不同用量的尿酸加入至所述稀释液中，混匀，即得一系列浓度的尿酸溶液；将所述尿酸溶液在366nm紫外线下照射，用拍摄工具在相同条件下拍照，提取所得图片的G值，以尿酸浓度与所述G值建立尿酸检测的线性关系；利用所述线性关系检测尿液中的尿酸浓度。
[0017]拍照功能可通过数码相机、智能手机来实现，拍照后利用图像处理软件即可获取图片的G值，可实现尿酸的便携式、可视化检测，以适用于不同人群的尿液样本的分析。
[0018]优选地，所述尿酸溶液中尿酸的浓度为0～0.8mmol/L，在该浓度范围时，尿酸浓度与G值呈良好的线性关系。
[0019]优选地，所述尿酸溶液中所述胍基杯[5]芳烃与所述荧光素钠的浓度分别为10μmol/L和5μmol/L。
[0020]本专利技术所提供的尿酸检测方法具有高灵敏度、高选择性、快速简易的特点，几乎不受尿液中其他干扰成分的影响，能够简便、高效地检测尿液中尿酸的浓度。利用该检测方法，可通过在紫外线(366nm)下样品的荧光变化实现尿酸的检测，经色彩处理提取其G值，建立尿酸浓度与G值之间的线性关系，从而应用于便携式、可视化的无创尿酸检测方法开发。
附图说明
[0021]图1为实施例1中Fl(1μmol/L)的荧光强度随着尿酸浓度增加的荧光谱图(λ
ex
＝500nm，λ
em
＝505
–
650nm)；
[0022]图2为实施例2中GC5A
·
Fl(0.80μmol/L/1.00μmol/L)主客体对荧光强度随着尿酸浓度增加的变化趋势(λ
ex
＝500nm，λ
em
＝505
–
650nm)；A为随着尿酸浓度(0～119.88μmol/L)的增加，Fl荧光发射光谱曲线的变化；B为Fl荧光强度与尿酸浓度的非线性拟合曲线(λ
em
＝513nm)；
[0023]图3为实施例3中在HEPES缓冲液中荧光强度比例值(I/I0)对尿酸浓度的线性拟合；
[0024]图4为实施例4中选择性考察；A为在HEPES缓冲液中，加入尿酸和干扰物时Fl荧光强度变化；B为在人工尿液中，荧光强度比例值(I/I0)对尿酸浓度的线性拟合；
[0025]图5为实施例4中志愿者真实尿液中荧光强度比例值(I/I0)对尿酸浓度的线性拟合；
[0026]图6为实施例4中真实尿样中尿酸的检测结果；
[0027]图7为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种尿酸的检测方法，其特征在于，将胍基杯[5]芳烃和荧光素钠制成混合溶液，将待测样品加入所述混合溶液中，通过荧光信号的改变来检测所述待测样品中尿酸的浓度。2.根据权利要求1所述的尿酸的检测方法，其特征在于，在HEPES缓冲液中检测尿酸浓度时，所述胍基杯[5]芳烃与所述荧光素钠的最终浓度分别为0.8μmol/L和1μmol/L。3.权利要求1所述的尿酸的检测方法在检测尿液中尿酸浓度中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测尿液中尿酸浓度包括以下操作：取人工尿液，离心后收集上清液，用HEPES缓冲液稀释后与含有胍基杯[5]芳烃和荧光素钠的溶液混合，逐步滴入以人工尿液为溶剂的尿酸溶液，测定荧光素钠的荧光强度，以尿酸浓度与荧光素钠的荧光强度值建立尿酸检测的线性关系，利用所述线性关系检测尿液中的尿酸浓度。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述以人工尿液为溶剂的尿酸溶液中尿酸的浓度范围为0～50μmol/L。6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述含有胍基杯[5]芳烃和荧光素钠的溶液中，所述胍基杯[5]芳烃与所述荧光素钠的浓度分别为8μmol/L和4μmol/L。7.权利要求1所述的尿酸的检测方法在利用拍摄工具进行尿酸浓度...

【专利技术属性】
技术研发人员：于卉娟，张亚平，王跃飞，柴欣，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：