一种防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂及其制备方法，它由绿色木霉和淡紫拟青霉在含有氯化锌和硫酸锌的液体培养基中发酵并经过超声波破碎后获得的胞内代谢物和2种类型纳米锌、以及萃取的胞外代谢物、植物生长调节剂、成膜剂混匀制成的制剂。该制剂含有可杀灭黄皮梢腐病和炭疽病病原菌生长的纳米锌和绿色木霉及淡紫拟青霉的胞内外代谢产物，也具有提高黄皮果实抗逆性和抑制果实熟化的植物生长调节剂乙二醇缩糠醛和苯肽胺酸，同时该菌剂具有成膜能力，喷施后能在果实表面形成维持25天以上的保护膜，该膜能保持菌剂中的内含物质长期附着在果实表面，对内杀灭果实表面病原菌对外阻隔病原菌侵染。原菌侵染。原菌侵染。

【技术实现步骤摘要】
一种防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物农药
，特别涉及一种防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]黄皮梢腐病和炭疽病均能造成黄皮果实腐烂，病原菌分别为黄皮砖红镰孢长孢变种(Fusarium lateritium Nees ex LK.Var.Longum Wollenw)和胶胞炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。这两种病害在果实生长期和储存期均能发生，一旦显症则难于防治，给黄皮产业带来巨大的威胁。高温多雨季节，这两种病害发生发展迅速，造成农户在生产过程中过量使用化学农药，并且加上黄皮果实小，食用时嘴巴不可避免会接触果皮，因此更容易造成化学农药中毒。因此，使用生态友好型制剂防治黄皮果实病害是大势所趋，能为该产业可持续发展提供保障。
[0003]纳米锌(ZnO
‑
NPs、ZnS
‑
NPs)为1～100nm粒径的纳米颗粒，具有广谱抗菌能力，具有小尺寸效应、表面效应和体积效应等特有性质使其性能远优于传统锌材料，对细菌、真菌和病毒等均显示出显著抑制和杀灭能力((纳米锌对杀鲑气单胞菌的灭活效果及其细胞毒性.中国海洋大学学报(自然科学版)刁菁等，2019)。目前认为，纳米锌不仅破坏病原菌细胞形态结构，而且可以穿过细胞膜进入胞体内干扰胞内生物学功能((纳米锌抗菌机理的研究进展.口腔医学研究)孙千月等，2015)。纳米锌具有良好的生物相容性和对环境友好等优良特性，目前已逐渐推广应用于医疗和卫生等领域。相比于物理和化学合成纳米锌，利用微生物合成纳米锌具有反应条件温和、价格低廉和环境友好等特点。利用微生物合成的纳米锌表面包被有微生物分泌的蛋白质，可提高纳米锌颗粒的稳定性和分散性。由于纳米锌具有杀菌作用，所以对多数微生物细胞具有毒害作用，因此寻找或选育具有耐受性的菌株才能进行生物合成纳米锌。
[0004]木霉和淡紫拟青霉是目前广泛应用的生防菌，木霉分泌的代谢物具有优良的拮抗植物病原物和诱导植物产生抗病性的能力，已经成功的用于防治多种植物病害。淡紫拟青霉基本用于防治植物根节线虫，但也有研究论文表明其对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)和尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)具有拮抗作用。前人研究表明，复合使用产生不同拮抗代谢物的不同生防微生物防治病害比用单一生防菌的防治效果要高。这可能的原因是，具有协同作用的不同种类生防菌产生的拮抗代谢物互补，不同种类菌株在共同存在条件下诱导产生新的抗性物质。然而，不是菌株间的随意组合就能产生协同作用，多数菌种在共存是具有相互拮抗和排斥现象，造成菌株无法增值甚至死亡，从而导致丧失生防能力或者抑菌能力比单一菌低((四株生防菌对大豆根腐尖镰孢菌及根腐病的作用效果，黑龙江农业科学)杨帆等2021；(几种生防细菌对尖孢镰刀菌的抑菌效果及其相互间包容性生长的快速检测,热带农业科学)孙茜茜等2019)。
[0005]乙二醇缩糠醛和苯肽胺酸能诱导植物抗逆性，但是未见报道其在黄皮果实上应
用。本专利发现两者按一定比例混合后能提高果实抗性相关酶和抑制果实熟化。
[0006]海藻酸钠和明胶是常用的成膜基质，但是明胶没有保鲜作用，海藻酸钠干燥成膜后质地变脆，耐水性和强度差，弹性强度以及耐水性均不太理想。脂肪醇聚氧乙烯醚是常用的表面活性剂，甘油具有优良的乳化性能，常作为乳化稳定剂。利用海藻酸钠、明胶、脂肪醇聚氧乙烯醚和甘油按一定比例配置后可得到性能优良的成膜剂。
[0007]由此，为了绿色无公害防治黄皮果实的两种病害，本专利技术利用在共同培养时能大量产孢(增值)，且纳米锌产率比单独培养时高，同时它们的胞内外代谢产物能拮抗黄皮砖红镰孢长孢变种和胶胞炭疽菌的绿色木霉和淡紫拟青霉共同合成纳米锌(ZnO
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NPs、ZnS
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NPs)，并将合成的纳米锌与这两种生防菌的胞内外代谢物、乙二醇缩糠醛和苯肽胺酸，以及成膜剂混合制备一种防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌的生物制剂。

技术实现思路

[0008]鉴以此，本专利技术提出一种防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂及其制备方法，解决上述问题。
[0009]本专利技术的技术方案是这样实现的：一种防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂：包括以下原料：含纳米锌和胞内代谢物的破壁液22～40份、粉状胞外代谢物18～29份、植物生长调节剂0.1～0.5份、成膜剂4～6份、蒸馏水100～150份，所述含纳米锌和胞内代谢物的破壁液是将有机物料、无机物料经种子液发酵，得到的发酵液离心，取沉淀破壁制得，所述粉状胞外代谢物是将粉状胞外代谢物上清液经萃取干燥制得。
[0010]优选地，防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂，所述有机物料由以下重量份原料组成：干酪素0.2
‑
0.5份、糖蜜2
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2.5份、酵母粉1
‑
1.5份、维生素B12 0.01
‑
0.02份、花生油0.05
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0.08份、复合氨基酸0.5
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1份、牛肉浸膏0.5
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1份、鱼蛋白粉1
‑
1.5份、麦芽浸粉0.5
‑
0.9份。
[0011]优选地，防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂，其特征在于：所述无机物料由以下重量份原料组成：磷酸氢二钾1
‑
1.5份、碳酸氢铵0.5
‑
1份，氯化镁0.6
‑
1.5份、钼酸铵0.05
‑
0.1份，氯化钠0.5
‑
1份。
[0012]优选地，所述成膜剂由以下重量份原料组成：海藻酸钠1
‑
1.5份、明胶0.5
‑
0.85份、脂肪醇聚氧乙烯醚0.3
‑
0.5份、甘油0.3
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0.4份。
[0013]优选地，所述植物生长调节剂由以下重量份原料组成：乙二醇缩糠醛0.3
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1份、苯肽胺酸1
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2份。
[0014]进一步的，所述的一种防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
[0015]S1、种子液制备：将绿色木霉在固体培养基(每升含：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉16g)中，于22
‑
30℃，黑暗条件下静置培养5
‑
9天后刮取孢子，制成孢子悬浮液，配置孢子浓度为1.5
‑
2.5
×
106个/mL，作为绿色木霉种子液，将淡紫拟青霉在固体培养基中，于22
‑
30℃，黑暗条件下静置培养5
‑
9天后刮取孢子，制成孢子悬浮液，配本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂，其特征在于：包括以下重量份原料：含纳米锌和胞内代谢物的破壁液22～40份、粉状胞外代谢物18～29份、植物生长调节剂0.1～0.5份、成膜剂4～6份、蒸馏水100～150份，所述含纳米锌和胞内代谢物的破壁液是将有机物料、无机物料经种子液发酵，得到的发酵液离心，取沉淀破壁制得，所述粉状胞外代谢物是将粉状胞外代谢物上清液经萃取干燥制得。2.如权利要求1所述的一种防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂，其特征在于：所述有机物料由以下重量份原料组成：干酪素0.2
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0.5份、糖蜜2
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2.5份、酵母粉1
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1.5份、维生素B12 0.01
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0.02份、花生油0.05
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0.08份、复合氨基酸0.5
‑
1份、牛肉浸膏0.5
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1份、鱼蛋白粉1
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1.5份、麦芽浸粉0.5
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0.9份。3.如权利要求1所述的一种防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂，其特征在于：所述无机物料由以下重量份原料组成：磷酸氢二钾1
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1.5份、碳酸氢铵0.5
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1份，氯化镁0.6
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1.5份、钼酸铵0.05
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0.1份，氯化钠0.5
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1份。4.如权利要求1所述的一种防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂，其特征在于：所述成膜剂由以下重量份原料组成：海藻酸钠1
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1.5份、明胶0.5
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0.85份、脂肪醇聚氧乙烯醚0.3
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0.5份、甘油0.3
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0.4份。5.如权利要求1所述的一种防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂，其特征在于：所述植物生长调节剂由以下重量份原料组成：乙二醇缩糠醛0.3
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1份、苯肽胺酸1
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2份。6.如权利要求1～5任一项所述的一种防治造成果实腐烂的黄皮梢腐病和炭疽病的含纳米锌生物制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、种子液制备：将绿色木霉在固体培养基中，于22
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30℃，黑暗条件下静置培养5
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【专利技术属性】
技术研发人员：周游，杨腊英，黄俊生，汪军，郭立佳，梁昌聪，刘磊，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：