【技术实现步骤摘要】
基于硼酸定向偶联免疫亲和的外泌体捕获分析一体化方法
[0001]本专利技术属于分析化学及临床检验领域，具体涉及一种基于硼酸定向偶联免疫亲和的外泌体捕获分析一体化方法。
技术介绍
[0002]癌症一直以来都是人类社会致死率最高的疾病之一，尽管近几十年来相关诊疗技术不断发展，依然难以彻底治愈。近年，为提升癌症患者的生存率，人们提出了精准医学的概念。即依据患者内在生物学信息以及临床症状和体征，对患者实施分类分型并给出针对性临床诊疗方案的治疗策略。目前我国已陆续开展临床用基因组学、蛋白组学、精准医学大数据资源整合等多方面的研究。但由于疾病基因学的复杂性决定了单一的组学研究很难系统且完全地解释疾病的整体生物学行为，从而影响精准的疾病细分。因此，开发和完善新的组学信息分析方法，构建相应的疾病知识网络，对提高癌症先期诊断和分类分型的准确率至关重要。
[0003]外泌体因其分布广泛，且携有母源细胞丰富的生理信息，尤其是其表面蛋白的分化和表达能够与其母源细胞在疾病形成过程中发生的显著变化保持一致，是目前大受欢迎的非侵入性癌症诊断、预后...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.基于硼酸定向偶联免疫亲和的外泌体捕获分析一体化方法，其特征在于，步骤为：1).制备Wulff型石墨相氮化碳：将加入了尿素的氧化铝坩埚置于管式炉中，加热升温至600℃并保持4h后自然冷却至室温，得到的黄色粉末即为原始石墨相氮化碳；随后通过HBTU/DIEA酰胺反应将间
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羧基苯硼酸修饰到上步制备出的原始石墨相氮化碳上得到Wulff型石墨相氮化碳，60℃下烘干，随后将Wulff型石墨相氮化碳置于去离子水中，液体辅助超声并离心，收集上清液即得Wulff型石墨相氮化碳分散液；2).构建外泌体捕获分析一体化方法：将表面常见跨膜蛋白CD63用PBS缓冲液稀释至10
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50μg mL
‑1，取20
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100μL上述浓度CD63抗体与100μL所述步骤1中的Wulff型石墨相氮化碳分散液混合，在37℃条件下孵育20
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45min后离心以除去未标记上的抗体，并将沉淀重新分散于120
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200μLPBS中，即得到CD63抗体
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Wulff型石墨相氮化碳；取120
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200μL上述CD63抗体
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Wulff型石墨相氮化碳，并与MCF
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7细胞来源的外泌体混合孵育30
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60min，随后离心并将下层沉淀重悬于120
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200μLPBS中，最后测试体系在320nm激发下的荧光光谱，记录其在440nm左右的荧光强度，带入标准曲线算出样本中目标外泌体的浓度；3).外泌体的表型分析：通过前期构建的外泌体捕获分析一体化方法，将不同外泌体表面膜蛋白对应的抗体标记到Wulff型石墨相氮化碳上，依次对不同细胞来源的不同外泌体表面膜蛋白进行分析鉴定，对外泌体表面不同靶蛋白产生的荧光信号进行箱线图制作和分析，并采用双边student t
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test进行显著性分析。2....
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