TET酶活性测定方法及TET酶活性小分子激活剂或抑制剂的高通量筛选方法技术

本发明专利技术提供了一种TET酶活性测定方法，其特征在于其步骤包括：将5mC DNA与待测TET酶混合后孵育；在反应体系中加入SDH和DCPIP进行反应；加入三氯乙酸终止反应；酶标仪测量反应液在600nm处的吸收峰值，峰值越高则代表酶活性越强。还公开了SDH和DCPIP联合在测定TET酶活性中的应用，以及TET酶活性小分子激活剂或抑制剂的高通量筛选方法。本发明专利技术提供了一种简便快速的TET酶活性测定方法，利用TET酶氧化反应产物琥珀酸盐在琥珀酸脱氢酶的催化下释放出还原氢，还原氢被DCPIP捕获生成DCPIPH2（蓝色），在波长600 nm处出现特异性的吸收峰。整个方法流程只需要4步操作、一管式反应、耗时1 h即可完成，具有成本低、通量大、适用范围广和准确性高的优点。确性高的优点。确性高的优点。

【技术实现步骤摘要】
TET酶活性测定方法及TET酶活性小分子激活剂或抑制剂的高通量筛选方法


[0001]本专利技术专利涉及一种TET酶活性测定方法及TET酶活性小分子激活剂或抑制剂的高通量筛选方法，属于生物


技术介绍

[0002]胞嘧啶甲基化（5mC）是DNA上最常见的修饰碱基，占所有胞嘧啶的1%
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8%，是DNA甲基化的主要形式。有些特定的胞嘧啶位点如细菌的Dam甲基化位点或真核生物的CpG岛中的胞嘧啶位点发生甲基化修饰的比例可高达近100%，因此5mC也被称为“第五种碱基”。DNA甲基化是调控基因表达的重要形式，主要介导基因的沉默。这种由DNA甲基化介导基因沉默的调控方式在生命体内时刻发生，是基因差异性表达的分子基础，也是决定胚胎发育、细胞功能性分化、个体生长、衰老和病变的关键途径。比如，细胞分化过程中维持细胞干性的基因会高度甲基化来抑制自身的表达，而促进细胞分化的组织特异性功能基因会去甲基化来增强自身的表达活性。这种有条不紊的甲基化/去甲基化稳态是保证细胞正常生理状态的基础。DNA 5mC双加氧酶家族TET（又称为DNA 5mC羟本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种TET酶活性测定方法，其特征在于其步骤包括：（1）将含有5mC 的DNA与待测TET酶混合后孵育；（2）在反应体系中加入SDH和DCPIP进行反应；（3）加入三氯乙酸终止反应；（4）酶标仪测量反应液在600nm处的吸收峰值，峰值越高则代表酶活性越强。2.根据权利要求1所述的TET酶活性测定方法，其特征在于：步骤（1）中所述含5mC 的DNA为5mCDNA标准品，其序列为AAAAAAAm5CGAAAAAAATTTTTTTm5CGTTTTTTT。3.根据权利要求1所述的TET酶活性测定方法，其特征为：步骤（1）中5mC DNA与TET酶在TET酶反应缓冲液中孵育10
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30min。4.根据权利要求3所述的TET酶活性测定方法，其特征为：步骤（2）中还加入吩嗪二甲酯硫酸盐。5.根据权利要求4所述的TET酶活性测定方法，其特征为：步骤（2）的SDH至少含有人源SDHA和SDHB。6.SDH和DCPIP联合在测定T...

【专利技术属性】
技术研发人员：江翱，刘倩，马海玲，孙睿，陈晶晶，侯策，曹振，宋东亮，
申请(专利权)人：翌圣生物科技上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：