FGL2在制备妊娠期糖尿病诊断和预后的试剂中的应用制造技术

本发明专利技术涉及FGL2在制备妊娠期糖尿病诊断和预后的试剂中的应用，属于疾病诊断领域。本发明专利技术通过检测FGL2基因和蛋白表达水平，可以及早判断和预示是否存在GDM，并且通过监测FGL2表达水平的变化可以判断GDM的进程，预示是否存在GDM子代胚胎和胎盘发育不良，以及反映GDM患者治疗效果和预后，为患者的疾病风险及治疗方案提供重要依据。方案提供重要依据。方案提供重要依据。

【技术实现步骤摘要】
FGL2在制备妊娠期糖尿病诊断和预后的试剂中的应用


[0001]本专利技术属于疾病诊断领域，具体涉及FGL2在制备妊娠期糖尿病诊断和预后的试剂中的应用。

技术介绍

[0002]妊娠期糖尿病(Gestational diabetes mellitus,GDM)是指妊娠期间首次发生的糖耐量受损或者血糖升高。GDM是最常见的妊娠并发症之一，在全球育龄期妇女中的患病率约为16.9％。目前，推荐的GDM诊断标准是：孕妇在妊娠24
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28周进行75g口服葡萄糖耐量实验(OGTT),空腹血糖≤5.1mmol/L、口服葡萄糖1小时后血糖≤10.0mmol/L、口服葡萄糖2小时后血糖≤8.5mmol/L，任意一点血糖值达到或超过以上标准即可诊断为GDM。迄今为止，关于GDM发病机制的研究主要集中于：妊娠期间的胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能障碍导致的胰岛素分泌不足。已知妊娠期间雌激素，孕酮和皮质醇水平升高，会诱导胰岛素抵抗。除此之外，各种免疫细胞(包括如巨噬细胞，树突状细胞和Th1细胞)功能失调并在母体蜕膜和胎盘中释放炎症介质也可以诱导胰岛素抵抗和损伤β细胞功能，从而导致GDM的发生。GDM严重威胁了母婴的健康，GDM孕妇易患妊娠期高血压和子痫前期，新生儿易患高胆红素血症、巨大儿和呼吸窘迫综合征等。因此，早期诊断和干预对GDM的预防至关重要。由于GDM的发病机理复杂，并且在妊娠期间缺乏可靠的筛查和监测的生物学指标，因此，寻找预防、诊断和治疗GDM的潜在分子靶点具有重要意义。

技术实现思路

[0003]有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供FGL2在制备妊娠期糖尿病诊断和预后的试剂中的应用。
[0004]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0005]1、FGL2在制备妊娠期糖尿病诊断和预后的试剂中的应用，所述FGL2的核苷酸序列为SEQ ID NO.1，所述FGL2来源于血液。
[0006]作为优选的技术方案之一，所述FGL2的编码蛋白氨基酸序列为SEQ ID NO.2
[0007]作为优选的技术方案之一，所述FGL2的基因和蛋白的表达水平与妊娠期糖尿病的发展呈正相关。
[0008]作为优选的技术方案之一，所述所述FGL2的基因和蛋白的表达水平与妊娠期糖尿病孕妇宫内胎儿的发育和胎盘功能呈负相关。
[0009]作为优选的技术方案之一，所述诊断和预示具体为妊娠期糖尿病的筛查、辅助诊断、疗效评价、预后评估或复发监控。
[0010]本专利技术的有益效果在于：
[0011]本专利技术提供了一种新的GDM有效检测标志物。本专利技术通过检测FGL2(Fibrinogen
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Like Protein 2，纤维蛋白原样蛋白2)蛋白表达水平，可以及早判断和预示是否存在GDM，并且通过监测FGL2表达水平的变化来判断GDM的进程。并且，通过检测FGL2基因和蛋白表达
水平的变化，可预示是否存在GDM子代胚胎和胎盘发育不良，以及反映GDM患者治疗效果和预后。本专利技术只需通过制备血清即可进行检测，患者在医院就医进行常规查血检验时就可一并进行，无需特殊设备，操作简便。本专利技术通过检测FGL2基因或FGL2蛋白在GDM小鼠和正常妊娠小鼠蜕膜中的表达水平，为深入研究GDM发病机理提供靶分子。
附图说明
[0012]为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术作优选的详细描述，其中：
[0013]图1为GDM患者血清中FGL2表达水平。
[0014]图2为GDM患者OGTT血糖值与FGL2表达水平相关性分析。
[0015]图3为GDM小鼠血清中FGL2表达水平。
[0016]图4为GDM小鼠OGTT血糖值与FGL2表达水平相关性分析。
[0017]图5为GDM小鼠子代胚胎的吸收情况。
[0018]图6为GDM小鼠子代胚胎和胎盘与FGL2表达水平相关性分析。
[0019]图7为GDM小鼠蜕膜中FGL2基因和蛋白表达水平。
具体实施方式
[0020]下面结合具体的优选实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如分子克隆实验指南(第三版，J.萨姆布鲁克等著)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0021]实施例1
[0022]FGL2蛋白在正常孕妇和GDM孕妇中的表达
[0023](1)GDM动物模型的建立
[0024]实验动物为6～8周健康雌性C57小鼠20只，6～8周健康雄性C57小鼠10只。
[0025]将雌鼠随机分为2组，GDM组(n＝10)和control组(n＝10)。适应性喂养1周后与雄鼠按2∶1比例合笼，次日清晨检查阴栓，若观察到阴栓则标记为妊娠0.5d。于孕12.5d予模型组腹腔注射链脲佐霉素(Streptozocin，STZ)150mg/kg，予control组腹腔注射等体积PBS缓冲液。于孕16.5d行OGTT试验，若模型组血糖异常升高，则造模成功。
[0026](2)制备检测血清
[0027]GDM孕妇和正常孕妇的血液样本来自重庆医科大学附属第一医院产科。将GDM孕妇和正常孕妇、GDM孕鼠和正常孕鼠的血样置于37℃孵箱放置20min，然后3000rpm离心10min，小心收集上层清亮液体备用。
[0028](3)检测FGL2蛋白表达水平
[0029]采用Biolegend试剂盒说明书进行。操作步骤如下：所有试剂在使用前均恢复室温，并在室温下静置20min。
①
配制蛋白标准品及检测样品：蛋白标准品采用Assay Buffer A进行梯度稀释，浓度分别是40ng/ml，20ng/ml，10ng/ml，5ng/ml，2.5ng/ml，0ng/ml；待测血清用Assay Buffer A进行10倍稀释并充分混匀。
②
免疫反应：用300μL洗涤液洗涤ELISA上样板4次，然后加入50μL Assay buffer A和50μL
①
中配制好的标准品和检测样品，混匀，封
板，在室温孵育2h。接着，弃去每孔废液，用300μL洗板4次，拍干后于每孔内加入100μL FGL2 detection antibody，封板后室温摇床孵育1h。然后，弃去每孔废液并洗涤，拍干后加入100μL Anti
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rabbit IgG
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HRP二抗，封板后室温摇床孵育1h。洗板后每孔加入100μL Substrate Solution F，封板后室温避光孵育30min，每孔加入100μL Stop Solution终止反应。
③
OD值检测：立即于波长450nm处检测吸光度值并记录，最后根据标准品绘制标准曲线并计算出样品浓度。
[0030](4)结果
[0031]结果如图1、2和3所示，NP(normal preg本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.FGL2在制备妊娠期糖尿病诊断和预后的试剂中的应用，其特征在于，所述FGL2的核苷酸序列为SEQ ID NO.1，所述FGL2来源于血液。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述FGL2的编码蛋白氨基酸序列为SEQ ID NO.2。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述FGL2的基因和蛋白的表...

【专利技术属性】
技术研发人员：漆洪波，栾晓瑾，付雍，童超，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：