一种肝癌诊断或辅助诊断的核酸组合、检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种肝癌诊断或辅助诊断的核酸组合、检测试剂盒及其应用，涉及基因检测技术领域。以人GNB4基因的CpG岛的甲基化为标志物，通过检测其甲基化的增加可以对肝癌进行诊断或辅助诊断，具有较高的灵敏度和特异性。采用本发明专利技术提供的检测试剂和试剂盒能有效地提高肝癌的检出率，从而满足肝细胞癌早筛早诊的临床需求。的临床需求。

【技术实现步骤摘要】
一种肝癌诊断或辅助诊断的核酸组合、检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及基因检测
，具体而言，涉及一种肝癌诊断或辅助诊断的核酸组合、检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]原发性肝癌是我国第4位常见恶性肿瘤及第2位肿瘤致死病因。原发性肝癌主要包括肝细胞癌、肝内胆管癌和肝细胞癌
‑
肝内胆管癌混合型3种不同病理学类型，其中肝细胞癌占85％～90％，其风险因素包括乙型/丙型肝炎病毒(HBV/HCV)感染、肥胖引起的非酒精性脂肪肝疾病、慢性酒精滥用等，这些因素可能直接导致肝硬化的发展，肝硬化患者每年发生肝癌的比率约为2％
‑
4％。
[0003]全球每年原发性肝癌新发病例85.5万，全球每年因原发性肝癌死亡81万例。肝癌患者的5年生存率在日本是30.1％，在韩国是27.2％，而在美国是17.4％。肝细胞癌的预后与疾病诊断时的严重程度相关。因为发现晚，仅有25％的初诊肝癌患者可以进行手术切除。85％的初诊肝癌患者已经处于中晚期阶段，由于肝细胞癌早期症状不明显，往往诊断时已经到达中晚期，失去手术机会。早筛早诊早治是降低肝细胞癌发病率与死亡率的有效方法，而方便、安全、快捷、高通量的筛查方法尤为重要。
[0004]目前我国肝细胞癌诊疗指南推荐的方案是：高危人群，每隔6个月进行1次肝脏超声检查和血清甲胎蛋白(Alpha
‑
fetoprotein，AFP)检测，进行肝癌早期筛查。AFP是目前唯一可用的检测和监测肝癌的血液标志物，但AFP的敏感性和特异性仅为58.2％和85.3％，难以满足肝细胞癌早筛早诊的临床需求。影像学检查对早期肝细胞癌的确诊仍然相当困难，在实际应用中易受病灶大小、机器灵敏度及操作者水平等因素的影响。为了提高我国肝细胞癌高风险人群的早诊比例，急需一种灵敏性和特异性高的检测方法来普及肝癌早筛，并提高早期筛查的准确度。
[0005]目前，肝细胞癌缺乏灵敏度和准确性高的检测手段。
[0006]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种肝癌诊断或辅助诊断的核酸组合、检测试剂盒及其应用以解决上述技术问题。
[0008]DNA甲基化是癌症发生的早期事件，现有技术表明血液中的循环肿瘤DNA(Ct DNA)与肿瘤组织中的DNA有很强的一致性。通过检测血液Ct DNA的甲基化为肝癌的早期无创检测提供了可能。癌变过程中，DNA甲基化水平的异常多发生在CpG岛内，CpG岛主要位于基因的启动子和外显子区域，是富含CpG二核苷酸的区域，长度在200
‑
3000bp之间，G+C的含量超过50％。
[0009]本专利技术是这样实现的：
[0010]本专利技术提供了肝癌诊断或辅助诊断的试剂在制备肝癌诊断或辅助诊断试剂盒中
的应用，该试剂用于检测分子标记物，分子标记物为人GNB4基因的CpG岛的甲基化，CpG岛选自GNB4基因的如下区域中的全长区域或部分区域：
[0011]Chr3:179450970
‑
179451662bp正链和/或
[0012]Chr3:179451803
‑
179451038bp负链。
[0013]专利技术人以人GNB4基因的CpG岛的甲基化为标志物，通过检测人GNB4基因的CpG岛的甲基化水平的增加对肝癌进行诊断或辅助诊断，具有较高的灵敏度和特异性，为肝癌的诊断提供一种新的思路和选择。
[0014]所检测的区域可选自的Chr3:179450970
‑
179451662bp正链和Chr3:179451803
‑
179451038bp负链全长区域或者该区域中的部分区域，通过对靶区域的检测实现对肝癌进行诊断或辅助诊断。
[0015]需要说明的是，本专利技术提到的位点或区域的位置均以hg38基因组为参考基因组。
[0016]Chr3:179450970
‑
179451662bp正链的碱基序列如下(5
’‑3’
)：
[0017]CACGCACGGGCTCGTGCTCTGAGTTCCTGGAAGGAGGCCTCGGGGAGTGACGAGAAACCAGGGGGGTCTGCAGGACTTGGACCGCCGACCGTTCCTCGCTCCCCGGGGCGAGCGGTCTGGACCGCCCGGGAAGTGCCTGCGCCGGCGGTCGTGGGGCCAGTTCCCGCGTGGCAGCTGGGCGCGACACAGGCGCGCCCTCCTCGTCCCTCCCGGGCAGCGTCGGCCGCCCGAGCCCGGGGAGACCCGCCCCGCCCCGCGCCGTCACCCGGGCCCCGTTCCGCAGGGGTGGCTCGCGGCGCCCCACGTCCCTGCGAGAAGCCCGGGATCGCTTCGCGGGGCGCACCGACGAGCCGCCGCTCGCGAGCTCGCCGCCTACCTGGAGGGAGCTCAGGCCCGCGTCGACCGCGCGCTGCCGGTGTCCGCTGGGCGCTCAGCAGCCCCTGGAGCGCGGAGCCGGCGTGGAGAGCGCAGCTCACAGCCGAGACCAGAGCCGCCGGCCACACCCAGTCCCGCACCTCCCAGCAGCCAACTCCGCGGCGCGCCGGAGCCGGGGCGGGGACGTGGCTGGAGGCGCGAGGCGCGAGGCACGAGGCGCGCGGGCCCGGCGGGGACGTGCCGGGGACGCGCAGACCCTCGGAGCGCGCGCAGCCCGGGCGGGGGGCGAAGGGAGCGGGCGCCGCGCGCAGCTTCTGC。
[0018]Chr3:179451803
‑
179451038bp负链上的碱基序列如下(5
’‑3’
):
[0019]CCGGAAAGGAAACTGGCCACGCCACTTAGACGGGCGCTACTTAGCAGCGTGCCCCGGCGCCACACCAACAAGAAAACGAAACTGCCCGGGAATGAATGTTTTTCTTCTCCTTCTGGCAGGAAACGAGAGAGAAAATAGGAAGCAGAAGCTGCGCGCGGCGCCCGCTCCCTTCGCCCCCCGCCCGGGCTGCGCGCGCTCCGAGGGTCTGCGCGTCCCCGGCACGTCCCCGCCGGGCCCGCGCGCCTCGTGCCTCGCGCCTCGCGCCTCCAGCCACGTCCCCGCCCCGGCTCCGGCGCGCCGCGGAGTTGGCTGCTGGGAGGTGCGGGACTGGGTGTGGCCGGCGGCTCTGGTCTCGGCTGTGAGCTGCGCTCTCCACGCCGGCTCCGCGCTCCAGGGGCTGCTGAGCGCCCAGCGGACACCGGCAGCGCGCGGTCGACGCGGGCCT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肝癌诊断或辅助诊断的试剂在制备肝癌诊断或辅助诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂用于检测分子标记物，所述分子标记物为人GNB4基因的CpG岛的甲基化，所述CpG岛选自GNB4基因的如下区域中的全长区域或部分区域：Chr3:179450970
‑
179451662bp正链和/或Chr3:179451803
‑
179451038bp负链。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述CpG岛选自GNB4基因的如下至少一种区域中的全长区域或部分区域：区域1、区域2、区域3、区域4、区域5、区域6、区域7、区域8和区域9；其中，所述区域1选自Chr3:179450970
‑
179451058bp正链，所述区域2选自Chr3:179451090
‑
179451203bp正链，所述区域3选自Chr3:179451231
‑
179451356bp正链，所述区域4选自Chr3:179451379
‑
179451472bp正链，所述区域5选自Chr3:179451444
‑
179451662bp正链，所述区域6选自Chr3:179451803
‑
179451709bp负链，所述区域7选自Chr3:179451675
‑
179451569bp负链，所述区域8选自Chr3:179451457
‑
179451278bp负链，所述区域9选自Chr3:179451158
‑
179451038bp负链。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述CpG岛选自GNB4基因的如下至少一种区域中的全长区域或部分区域：区域2正链、区域3正链、区域8负链和区域9负链。4.一种检测人GNB4基因的CpG岛甲基化水平的核酸组合，其特征在于，所述CpG岛选自GNB4基因的如下区域中的全长区域或部分区域：Chr3:179450970
‑
179451662bp正链和/或Chr3:179451803
‑
179451038bp负链；优选地，所述CpG岛选自GNB4基因的如下至少一种区域中的全长区域或部分区域：区域1、区域2、区域3、区域4、区域5、区域6、区域7、区域8和区域9；其中，所述区域1选自Chr3:179450970
‑
179451058bp正链，所述区域2选自Chr3:179451090
‑
179451203bp正链，所述区域3选自Chr3:179451231
‑
179451356bp正链，所述区域4选自Chr3:179451379
‑
179451472bp正链，所述区域5选自Chr3:179451444
‑
179451662bp正链，所述区域6选自Chr3:179451803
‑
179451709bp负链，所述区域7选自Chr3:17...

【专利技术属性】
技术研发人员：张良禄，张玮，董兰兰，李国强，昂学，李婷婷，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：