分选柱的制备方法及分选柱技术

本发明专利技术实施例提供一种分选柱的制备方法，包括：通过聚合物材料粘合铁砂以及将铁砂粘合在分选柱本体内；在第一预设条件下对粘合了铁砂的分选柱本体进行离心；在第二预设条件下对经离心后的分选柱本体进行烘烤；其中，所述聚合物材料由单体聚合而成或者为高分子聚合物。本发明专利技术实施例通过聚合物材料粘合铁砂以及将铁砂粘合在分选柱本体内，然后依次在第一预设条件下对分选柱本体进行离心，在第二预设条件下对分选柱本体进行烘烤，采用常见的聚合物材料和通过特定的制备工艺得到符合小磁珠吸附和分选的细胞分选技术需使用的分选柱，制备工艺简单、成本较低。成本较低。成本较低。

【技术实现步骤摘要】
分选柱的制备方法及分选柱


[0001]本专利技术涉及细胞分选
，尤其涉及一种分选柱的制备方法及分选柱。

技术介绍

[0002]细胞分选技术在临床诊断、细胞免疫治疗、癌症治疗等方面有着重要的作用。近年来，在癌症治疗方面，一种被称为CAR
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T疗法（嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，Chimeric Antigen Receptor T
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Cell Immunotherapy）的方法被广泛研究，在临床肿瘤治疗上取得了很好的效果。在CAR
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T治疗血癌的过程中有一个非常重要的步骤是T细胞分选，即通过外周血血细胞分离机从肿瘤病人的血液中分离出单个核细胞，然后采用细胞分选技术磁珠纯化T细胞。
[0003]当前，常用的细胞分选技术分为两大类。第一类是大磁珠吸附和分选，使用的大磁珠的直径较大，一般为微米级别。分选过程是大磁珠吸附在目标细胞表面，外加磁场作用在容纳有多种细胞的溶液的普通试管，吸引表面附着了大磁珠的目标细胞。但是这种分选方法的分选纯度较低，一般在90%左右。而且大磁珠的磁力较大，有可能对目标细胞表面的活性位点造成不可逆的损伤；分选后需要进行洗脱操作。第二类是小磁珠吸附和分选，使用的小磁珠的直径较小，一般小于100纳米，具有顺磁性的特点，是一种超顺纳米磁珠。分选过程是小磁珠吸附在目标细胞表面，使包含了多种细胞的溶液通过分选柱，同时外加磁场作用于分选柱，吸引表面附着了小磁珠的目标细胞。这种分选方法的分选纯度较高，可以达到95%以上。而且小磁珠的磁力较小，对目标细胞表面的活性位点影响较小；分选后不需要进行洗脱操作，有利于后续实验或治疗的进行。
[0004]小磁珠吸附和分选的细胞分选技术必须使用分选柱进行磁力吸引，而分选柱的制备流程非常复杂、价格较高，导致细胞分选的成本非常高。这些因素直接制约了小磁珠吸附和分选的细胞分选技术的大范围推广。

技术实现思路

[0005]本专利技术实施例提供一种分选柱的制备方法，旨在解决现有技术中分选柱的制备流程复杂、成本高的问题。
[0006]第一方面，提供了一种分选柱的制备方法，包括：通过聚合物材料粘合铁砂以及将铁砂粘合在分选柱本体内；在第一预设条件下对粘合了铁砂的分选柱本体进行离心；在第二预设条件下对经离心后的分选柱本体进行烘烤；其中，所述聚合物材料由单体聚合而成或者为高分子聚合物，所述单体为丙烯酸单体或者苯乙烯单体，所述高分子聚合物为丙烯酸树脂类、聚氨酯类、环氧类或者硅胶类的高分子聚合物；所述第一预设条件为：离心力等于1000乘以重力加速度，离心时间为1分钟
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10分钟；所述第二预设条件为：烘烤温度等于100摄氏度，烘烤时间为3小时
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10小时。
[0007]第二方面，提供了一种分选柱，由上述的方法制备得到。
[0008]本专利技术实施例通过聚合物材料粘合铁砂以及将铁砂粘合在分选柱本体内，然后依次在第一预设条件下对分选柱本体进行离心，在第二预设条件下对分选柱本体进行烘烤，采用常见的聚合物材料和通过特定的制备工艺得到符合小磁珠吸附和分选的细胞分选技术需使用的分选柱，制备工艺简单、成本较低。
附图说明
[0009]本专利技术上述的和/或附加的方面和优点从下面结合附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：图1是小磁珠吸附和分选的细胞分选技术的示意图；图2是本专利技术实施例一提供的分选柱的示意图；图3是本专利技术实施例二提供的分选柱的制备方法的流程图；图4是本专利技术实施例二提供的图3中步骤S302的流程图；图5是本专利技术实施例二提供的图3中步骤S302的另一流程图。
具体实施方式
[0010]下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的模块或具有相同或类似功能的模块。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。相反，本专利技术的实施例包括落入所附加权利要求书的精神和内涵范围内的所有变化、修改和等同物。
[0011]小磁珠吸附和分选的细胞分选技术中所使用的小磁珠，直径较小，一般小于100纳米。具有顺磁性的特点，在外加磁场下被磁化，外加磁场被撤掉后磁性会马上消失，是一种超顺纳米磁珠。
[0012]图1是小磁珠吸附和分选的细胞分选技术的示意图。分选过程为：分选柱和外加磁场配合使用，使外加磁场作用于分选柱填充了铁砂的区域。在外加磁场的作用下，铁砂内形成感应磁场。外加磁场和感应磁场相互叠加，在分选柱填充了铁砂的区域形成相当于几百倍甚至上千倍于外加磁场的叠加磁场，由此，纳米级别的小磁珠也可被吸引。将包含了多种细胞的溶液（其中含有表面吸附了小磁珠的目标细胞）通过分选柱，目标细胞经过分选柱填充了铁砂的区域时在叠加磁场的作用下迅速移动、聚集，实现细胞分选。
[0013]实施例一图2是本专利技术实施例一提供的分选柱的示意图。如图2所示，分选柱包括分选柱本体和铁砂。在本专利技术实施例中，细胞分选时，分选柱本体作为容器使用，需要具备一定程度的刚性，至少满足在5千克外加压力下不变形。此外，分选柱本体采用医用的PS（聚苯乙烯，Polystyrene）、PP（聚丙烯，plyprpylene）、PC（聚碳酸酯，polycarbonate）、PVC（聚氯乙烯，Polyvinyl chloride）等塑料制成，满足对细胞无毒无害的要求。在分选柱本体的一定区域内填充铁砂，铁砂的直径控制在50um
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500um之间。分选柱本体包括第一部分、第二部分和尖端。这三个部分均近似为圆柱状，依次首尾相接、贯通，直径依次减小。即第二部分位于第一部分和尖端之间，第二部分的直径介于第一部分的直径和尖端的直径之间。在第二部分内填充铁砂，对第二部分引入外加磁场时，在第二部分内会产生叠加磁场。
[0014]细胞分选时，包含了多种细胞的溶液（其中含有表面吸附了小磁珠的目标细胞）从第一部分的入口进入分选柱。进入第二部分时遇到铁砂，而且第二部分的直径小于第一部分的直径，溶液流速变慢，此时第一部分相当于容器，可容纳一部分溶液。溶液进入第二部分后受到叠加磁场的作用，表面吸附了小磁珠的目标细胞定向移动，聚集到铁砂上，其他成分从铁砂的间隙流过然后从尖端流出。尖端的直径小于第二部分的直径，可进一步降低溶液的流速，延长溶液流经铁砂的时间，使得叠加磁场对目标细胞的影响更为充分。
[0015]为了防止铁砂在制备分选柱的过程中流出，在填充铁砂之前将圆球放入分选柱内。在本专利技术实施例中，圆球的直径介于第二部分的直径和尖端的直径之间，堵塞从第二部分到尖端的通道。圆球的材质包括但不限于金属、陶瓷和玻璃等。
[0016]填充在第二部分的铁砂，铁砂和铁砂之间、铁砂和第二部分之间的粘合程度是决定分选柱是否符合细胞分选要求的关键。本专利技术实施例的分选柱由如下实施例的制备方法制备得到，在此不展开详述。
[0017]实施例二图3是本专利技术实施例二提供的分选柱的制备方法的流程图。在本专利技术实施例中，分选柱的结构与实施例一相同，与实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.分选柱的制备方法，其特征在于，所述方法包括：通过聚合物材料粘合铁砂以及将铁砂粘合在分选柱本体内；在第一预设条件下对粘合了铁砂的分选柱本体进行离心；在第二预设条件下对经离心后的分选柱本体进行烘烤；其中，所述聚合物材料由单体聚合而成或者为高分子聚合物，所述单体为丙烯酸单体或者苯乙烯单体，所述高分子聚合物为丙烯酸树脂类、聚氨酯类、环氧类或者硅胶类的高分子聚合物；所述第一预设条件为：离心力等于1000乘以重力加速度，离心时间为1分钟
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10分钟；所述第二预设条件为：烘烤温度等于100摄氏度，烘烤时间为3小时
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10小时。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分选柱本体包括第一部分、第二部分和尖端；所述第二部分位于所述第一部分和所述尖端之间，所述第二部分的直径介于所述第一部分的直径和所述尖端的直径之间。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在所述通过聚合物材料粘合铁砂以及将铁砂粘合在分选柱本体内之前还包括：将圆球放入分选...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗哲民，修先帅，潘雅楠，
申请(专利权)人：深圳市瑞沃德生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：