一种花生新种质创制及育种方法技术

本发明专利技术提供一种花生新种质创制及育种方法，属于花生新品种培育技术领域，经快中子辐照、航天诱变的花生种子，取出种胚消毒；花生种胚在无菌水中浸泡然后放入灭菌的培养皿中，剥离胚小叶，随即接种于体细胞胚诱导培养基中进行培养；然后在体细胞胚萌发培养基上培养；以灭菌的沙子中无菌催芽的8～10日龄花生种子实生苗作为砧木，体细胞胚萌发长成的高1.5cm以上的小苗作为接穗，成熟后按单株收获M2代种子，然后依次获得收获荚果M3代种子、单株荚果M4代种子。收获的M4代优良单株荚果种子按株行种植，生育期和收获期表现一致的优良单株混收，成为入选的优良株系。本发明专利技术能克服常规诱变技术突变体嵌和现象、大部分突变细胞不能遗传的瓶颈。传的瓶颈。

【技术实现步骤摘要】
一种花生新种质创制及育种方法


[0001]本专利技术属于花生新品种培育
，具体地说是涉及到一种花生新种质创制及育种方法。

技术介绍

[0002]花生是重要的油料作物和经济作物，在国民经济中占有重要的位置。培育高产优质专用多抗性花生新品种对提高花生产值和增加农民收益有着重要意义。但当前花生栽培中的遗传基础狭窄问题愈来愈突出，已经在很大程度上限制了花生育种的突破性进展，目前北方花生品种一般都有伏花生的亲缘，而南方花生一般都有狮头企的亲缘，造成花生品种亲缘关系近，利用常规杂交育种方法培育高产优质多抗性花生品种难以获得突破。
[0003]诱变技术的应用能创造自然界不存在的或极为罕见的新性状新个体。快中子辐照、航天诱变是很好的诱变源，但辐照处理材料的空间有限，而花生种子较大，只能减少辐照处理的种子数量。为提高有益突变体获得频率，一般以半致死量为适宜的诱变剂量，也即辐照处理的种子约一半不能正常发芽生长，仅有一半能发芽长成植株的剂量为适宜诱变剂量。这样，辐照处理种子数量少，加之一半不能正常发芽成苗，达不到育种的选择群体，因为诱变育种往往需要足够大的群体才能获得有益突变体。
[0004]因此，非常需要一种方法，从辐照的有限少量种子中获得大量的植株，从而扩大诱变选择群体，获得有益突变体。

技术实现思路

[0005]为了解决
技术介绍
的上述技术问题，本专利技术提供了一种花生新种质创制及育种方法，本专利技术能克服常规诱变技术突变体嵌和现象、大部分突变细胞不能遗传的瓶颈；每个辐照处理的种子可获得60个以上再生植株，育种选择群体增加60倍以上，大幅增加选择群体，提高选择几率，可以解决常规诱变育种中1粒有活力的种子只能得到1棵苗，突变群体小、达不到育种选择群体的困难。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：一种花生新种质创制及育种方法，包括以下步骤：
[0007](1)快中子辐照、航天诱变的花生种子，取出种胚进行表面消毒；
[0008](2)经表面消毒的花生种胚在无菌水中浸泡8～12小时；
[0009](3)浸泡的种胚取出，放入经高压灭菌的培养皿中，剥离胚小叶，随即接种于体细胞胚诱导培养基中进行培养；
[0010](4)接种胚小叶培养的体细胞胚诱导培养基为：MS+5～15mg/L2,4
‑
D；调整培养基pH并灭菌；
[0011](5)在体细胞胚诱导培养基上培养，胚小叶外植体开始形成体细胞胚，之后逐渐有体细胞胚形成；将存活的形成体细胞胚的胚小叶外植体转移到体细胞胚萌发培养基上培养，诱导体细胞胚萌发成苗；
[0012](6)体细胞胚萌发培养基为：MS+4～6mg/LBAP；调整培养基pH并灭菌；
[0013](7)在体细胞胚萌发培养基上培养，每4周继代培养一次，促使体细胞胚萌发成苗；当小苗长到1.5cm以上时，即可作为接穗嫁接；
[0014](8)以灭菌的沙子中无菌催芽的8～10日龄花生种子实生苗作为砧木，体细胞胚萌发长成的高1.5cm以上的小苗作为接穗，采用插接法在超净工作台中进行无菌嫁接，用封口膜包扎好嫁接口；嫁接苗在沙子中再培养3～5天，促使嫁接伤口愈合，然后移栽田间；
[0015](9)嫁接苗移栽田间前2个周注意保湿，之后按常规进行田间管理；成熟后按单株收获M2代种子；
[0016](10)收获的M2代种子按单株种成株行，以诱变亲本作为对照；
[0017](11)在M2代性状发生变异和分离的株行中，选择结果多、荚果整齐，分枝数7～10条，抗倒伏，抗叶斑病的优良单株，单独收获荚果M3代种子；
[0018](12)收获的M3代优良单株荚果种子按株行种植，生育期观察标记出苗早、开花集中、抗倒伏能力强、株形直立的单株，结合收获期选择结果多、荚果整齐，分枝数7～10条，抗叶斑病的优良单株，单独收获单株荚果M4代种子；
[0019](13)收获的M4代优良单株荚果种子按株行种植，生育期和收获期表现一致的优良单株混收，成为入选的优良株系；
[0020](14)入选的优良株系进行产量鉴定试验；试验设置3次重复，每个重复播种1垄；收获后晒干，称重产量；选择产量高的株系晋升为品系；
[0021](15)入选的品系进行产量比较试验；试验设置3次重复，每个重复播种3垄；以当地品种区域试验对照品种或当地推广品种作为对照；成熟收获后晒干，称重产量；选择产量高的品系，参加省品种区域试验，试验通过，申报国家非主要农作物品种登记。
[0022]作为优选，步骤(1)中，消毒方法：用70～75％的酒精浸泡20秒，再用0.1％升汞溶液侵泡8～10分钟，之后用高压灭菌的无菌水清洗3～5次。
[0023]作为优选，步骤(1)中，消毒操作在超净工作台中进行，操作用的器具需高压灭菌或酒精灯灼烧。
[0024]作为优选，步骤(3)中，每粒种子8个胚小叶，也即种子出苗时的第一对真叶，每个真叶有4个小叶，一对真叶有8个小叶，这8个小叶是由8个胚小叶发育而成。
[0025]作为优选，步骤(3)中，选用胚小叶的理由是：与幼叶或成熟叶片相比，胚小叶分化程度低，再生能力强。
[0026]作为优选，步骤(4)和步骤(6)中，调整培养基的pH5.8，在高压灭菌锅120℃灭菌20分钟。
[0027]作为优选，步骤(5)在体细胞胚诱导培养基上培养2周后，胚小叶外植体开始形成体细胞胚，之后逐渐有体细胞胚形成；由于辐照诱变作用，使部分胚小叶外植体褐化凋亡；一般适宜诱变剂量为半致死量或半再生率时的剂量，即一半外植体不能形成体细胞胚；培养4周后，将存活的形成体细胞胚的胚小叶外植体转移到体细胞胚萌发培养基上培养，诱导体细胞胚萌发成苗。
[0028]作为优选，步骤(10)中，生育期及收获期田间观察，与亲本一样、无变异和分离的株行淘汰；同一株行的单株间表现不一样、有明显分离，并且不同于诱变亲本，说明再生植株的胚性细胞为发生突变的细胞，由此再生的植株后代经自交，性状发生变异和分离；选择
变异植株，再经过自交2～3代，使决定变异性状的基因纯合，创造花生新的种质资源。
[0029]作为优选，步骤(10)
‑
(13)中的播种为单粒播种，起垄，垄距80～100cm，每个垄上种2行，垄上小行距25～35cm，穴距16
‑
20cm，每穴播种1粒种子。
[0030]作为优选，步骤(14)
‑
(15)中，播种为双粒播种，起垄，垄距80～90cm，每个垄上种2行，垄上小行距22～30cm，穴距16
‑
20cm，每穴播种2粒种子。
[0031]本专利技术利用快中子辐照、航天诱变等结合组织培养大量创制花生种质资源。
①
常规诱变处理后1粒种子只能长出1棵苗。而利用本专利技术，以辐照处理后花生种子胚小叶为外植体进行组织培养，每个胚小叶外植体可再生8个以上小苗，每粒种子8个胚小叶，如此每粒种子可获得64个以上再生苗。再生苗经嫁接移栽本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种花生新种质创制及育种方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)快中子辐照、航天诱变的花生种子，取出种胚进行表面消毒；(2)经表面消毒的花生种胚在无菌水中浸泡8～12小时；(3)浸泡的种胚取出，放入经高压灭菌的培养皿中，剥离胚小叶，随即接种于体细胞胚诱导培养基中进行培养；(4)接种胚小叶培养的体细胞胚诱导培养基为：MS+5～15mg/L2,4
‑
D；调整培养基pH并灭菌；(5)在体细胞胚诱导培养基上培养，胚小叶外植体开始形成体细胞胚，之后逐渐有体细胞胚形成；将存活的形成体细胞胚的胚小叶外植体转移到体细胞胚萌发培养基上培养，诱导体细胞胚萌发成苗；(6)体细胞胚萌发培养基为：MS+4～6mg/LBAP；调整培养基pH并灭菌；(7)在体细胞胚萌发培养基上培养，每4周继代培养一次，促使体细胞胚萌发成苗；当小苗长到1.5cm以上时，即可作为接穗嫁接；(8)以灭菌的沙子中无菌催芽的8～10日龄花生种子实生苗作为砧木，体细胞胚萌发长成的高1.5cm以上的小苗作为接穗，采用插接法在超净工作台中进行无菌嫁接，用封口膜包扎好嫁接口；嫁接苗在沙子中再培养3～5天，促使嫁接伤口愈合，然后移栽田间；(9)嫁接苗移栽田间前2个周注意保湿，之后按常规进行田间管理；成熟后按单株收获M2代种子；(10)收获的M2代种子按单株种成株行，以诱变亲本作为对照；(11)在M2代性状发生变异和分离的株行中，选择结果多、荚果整齐，分枝数7～10条，抗倒伏，抗叶斑病的优良单株，单独收获荚果M3代种子；(12)收获的M3代优良单株荚果种子按株行种植，生育期观察标记出苗早、开花集中、抗倒伏能力强、株形直立的单株，结合收获期选择结果多、荚果整齐，分枝数7～10条，抗叶斑病的优良单株，单独收获单株荚果M4代种子；(13)收获的M4代优良单株荚果种子按株行种植，生育期和收获期表现一致的优良单株混收，成为入选的优良株系；(14)入选的优良株系进行产量鉴定试验；试验设置3次重复，每个重复播种1垄；收获后晒干，称重产量；选择产量高的株系晋升为品系；(15)入选的品系进行产量比较试验；试验设置3次重复，每个重复播种3垄；以当地品种区域试验对照品种或当地推广品种作为对照；成熟收获后晒干，称重产量；选择产量高的品系，参加省品种区域试验，试验通过，申报国家非主要农作物品种登记。2.根据权利要求1所述的一种花生新种质创制及育种方法，其特征在于：步骤(1)中，消毒方法：用70～75...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晶珊，刘斌，
申请(专利权)人：山东青农产业发展有限公司，
类型：发明
国别省市：