基于外周血的NK细胞体外培养方法技术

本发明专利技术公开了基于外周血的NK细胞体外培养方法，包括以下步骤：取用外周血和B958细胞备用，利用外周血经分离液处理后获得PBMC细胞，利用B958细胞获得含有EB病毒颗粒的EBV上清液，将所得PBMC细胞利用EBV上清液转化为永生化EBV

【技术实现步骤摘要】
基于外周血的NK细胞体外培养方法


[0001]本专利技术涉及外周血细胞培养，具体为基于外周血的NK细胞体外培养方法，属于细胞培养


技术介绍

[0002]人体免疫系统中，自然杀伤细胞(natural killere cell，NK)是机体重要的免疫细胞，大约占人外周血淋巴细胞的10％
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15％，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生，能够识别细胞、杀伤介质。
[0003]NK细胞在形态上属于大颗粒淋巴细胞，来源于骨髓，是除T细胞、B细胞之外的第三大淋巴细胞，和T细胞、B细胞不同的是，它不需要相关抗原刺激，就能识别和杀伤肿瘤细胞以及病毒感染细胞等靶细胞，NK细胞有两方面抗癌作用；一是直接杀伤肿瘤细胞，通过释放后穿孔素和颗粒酶或通过死亡受体杀死肿瘤细胞；二是通过分泌细胞因子和趋化因子扮演免疫系统的调节细胞因子，激活T细胞等的杀伤作用。
[0004]NK细胞作为人体免疫的第一道防线，几乎所有的肿瘤细胞都会先受到NK细胞的攻击，并及时将情况迅速上报并启动整个免本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于外周血的NK细胞体外培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：取用外周血和B958细胞备用，利用外周血经分离液处理后获得PBMC细胞，利用B958细胞获得含有EB病毒颗粒的EBV上清液，将所得PBMC细胞利用EBV上清液转化为永生化EBV
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LCL细胞；步骤二：利用所得PBMC细胞经磁珠分选分离获得纯化后的NK细胞；步骤三：将NK细胞经原代培养后置于无血清培养基中进行传代培养，获得增殖后的NK细胞。2.根据权利要求1所述的基于外周血的NK细胞体外培养方法，其特征在于：所述步骤三中更换为无血清培养基的NK细胞处于对数生长中期，所述无血清培养基中加入了葡萄糖、胰岛素、青霉素、链霉素、含锌和铜的无机盐物质、促生长因子及激素、CD3抗体活化剂、吲哚美辛和酶抑制剂、转铁蛋白、必需氨基酸、非必需氨基酸和谷氨酰胺、丙酮酸钠、多聚赖氨酸、昆布氨酸等氨基酸。3.根据权利要求1所述的基于外周血的NK细胞体外培养方法，其特征在于：所述步骤一中外周血的提供源自健康人体，所述外周血采用RPMI1640培养液，所述RPMI1640培养液中加入15％PBS和细胞因子，所述细胞因子包括IL
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2、IL
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15和IL
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12，所述外周血制备PBMC采用ficoll分离液进行分离，所述分离需经过多次水平离心和清洗。4.根据权利要求1所述的基于外周血的NK细胞体外培养方法，其特征在于：所述步骤一到三中PBMC的分离、B958细胞的培养和NK细胞的培养均需在37℃、5％CO2条件下进行。5.根据权利要求1所述的基于外周血的NK细胞体外培养方法，其特征在于：所述步骤一中B958细胞培养于RPMI1640培养液中，所述RPMI1640培养液内加入10％胎牛血清、50U/ml青霉素和50μg/ml链霉素。6.根据权利要求1所述的基于外周血的NK细胞体外培养方法，其特征在于：所述步骤一中B958正常传代培养后调整为细胞密度为1
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106个/ml，置于无血清RPMI1640的培养基中...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈健，刘正明，欧阳效晴，杨淑青，
申请(专利权)人：江苏蒙彼利生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：