HCV核心脂质结合结构域单克隆抗体制造技术

本发明专利技术涉及HCV核心脂质结合结构域单克隆抗体。本发明专利技术提供了用于检测丙型肝炎病毒(HCV)抗原的单克隆抗体。所述抗体特异性与HCV核心抗原氨基酸残基134

【技术实现步骤摘要】
HCV核心脂质结合结构域单克隆抗体
[0001]相关申请本申请是国际申请日为2013年12月23日的国际申请PCT/US2013/077499进入中国、申请号为201380075956.1的题为“HCV核心脂质结合结构域单克隆抗体”的专利技术专利申请的分案申请。本申请作为要求2013年3月14日提交的美国临时专利申请号61/783,529的优先权权益的PCT专利申请提交。前述申请的整个文本通过引用整体并入本文。


[0002]本公开内容提供了HCV核心蛋白的新单克隆抗体以及将其用于检测HCV感染的方法和组合物。

技术介绍

[0003]根据WHO统计，全世界多达1.7亿人被丙型肝炎病毒(HCV)感染，即肝脏的一种病毒性感染。75
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85％的被HCV感染的人会发展成慢性感染，这些病例中的大约20％会发展慢性丙型肝炎的并发症，包括感染20年以后的肝硬化或肝细胞癌。当前推荐的HCV感染的治疗是干扰素和利巴韦林药物的组合，但是，该治疗并不是在所有情况下都是有效的，并且在丙型肝炎相关的末期肝病中指示肝移植。目前，没有可用于预防HCV感染的疫苗，因此必须采取所有预防措施来避免感染。
[0004]因而，患者护理、以及通过血液和血液制品或通过亲近人接触发生的丙型肝炎病毒(HCV)的传播的预防需要使用灵敏检测测定的极度警觉。这建立了对用于筛查和鉴定HCV的载体和HCV
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污染的血液或血液制品的特定方法的需求。HCV暴露的血清学测定依赖于存在于人血浆或血清中的HCV的检测。这可以通过检测由该病毒编码的独特结构蛋白和非结构蛋白来完成。
[0005]HCV病毒是黄病毒科家族的肝炎病毒属中的一种(+)义单链有包膜RNA病毒。病毒基因组具有大约10kb的长度，且编码3011个氨基酸的多蛋白前体。HCV基因组具有编码独特多蛋白的单个大开放读码框(ORF)。该多蛋白在翻译同时和在翻译后通过细胞蛋白酶和病毒蛋白酶加工成3种结构蛋白，即，核心、E1和E2和至少6种非结构NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B蛋白(Choo等人，Science 244：359
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362(1989))。
[0006]在HCV暴露以后，该病毒进入易感的肝细胞并发生病毒复制。在大约10天的隐晦期阶段中，病毒的存在不是明显的(即，不可检测到病毒RNA)，血清转氨酶水平是在正常限度内，且不存在针对HCV的免疫应答的证据(Busch等人，Transfusion 40：143(2000))。通常，在暴露后约10天，可以检测到HCV RNA，经常具有每ml血清100,000
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120,000,000个HCV RNA拷贝的病毒载量。通常在几周后，观察到ALT水平的增加，从而指示肝脏的炎症；在暴露以后平均约70天检测到抗体。
[0007]对HCV的暴露的血液筛查(通过检测HCV的抗体，或通过检测血清/血浆中的病毒特异性的分子(例如，HCV RNA或HCV核心蛋白))是患者护理的一个重要组成部分。通过这些试验鉴定为已经暴露于HCV的个体所衍生出的血液或血液制品被从血液供给除去，且不用于
分配给血液制品的受体(参见，例如，美国专利号6,172,189)。这些试验也可以用在临床场合中以诊断可归因于HCV感染的肝病。
[0008]血清学抗体试验依赖于代表病毒多蛋白的选定片段的重组抗原或合成肽的应用。第一代抗
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HCV筛查试验是基于针对重组蛋白(HCV基因型1a)的抗体的检测，所述重组蛋白源自位于非结构NS
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4蛋白(C100
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3)中的序列(Choo等人，Science 244：359(1989)；Kuo等人，Science 244：362(1989))。第一代测定不能检测大约10％的具有慢性HCV感染的个体和多达10
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30％的呈现急性HCV感染的个体中的抗体。第二代抗
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HCV测定已经包含得自HCV基因组(HCV基因型1a)的3个不同区域的重组蛋白，包括得自核心、NS3和NS4蛋白的氨基酸序列(Mimms等人，Lancet 336：1590(1990)；Bresters等人，Vox Sang 62：213(1992))，从而允许对在鉴定HCV感染的血液供体中的第一代试验的显著改进(Aach等人，N Engl J Med 325：1325(1991)；Kleinman等人，Transfusion 32：805(1992)。第二代测定检测接近100％的慢性HCV病例(Hino K.，Intervirology 37：77(1994))和在感染后12周之前在几乎100％的急性病例(Alter等人，N Engl J Med 327：1899(1992)；Bresters等人，Vox Sang 62：213(1992))中的抗体。第三代试验包括表达得自NS5区域的氨基酸序列的重组蛋白、以及得自核心、NS3和NS4的抗原。有些研究已经指示第三代试验与第二代试验相比灵敏度的轻微提高(Lee等人，Transfusion 35：845(1995)；Courouce等人.Transfusion 34：790
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795(1994))，但是该提高主要归因于NS3蛋白的变化，而不是NS5的包含(Courouce等人，Lancet 343：853(1994))。
[0009]一般而言，第二代和第三代HCV抗体试验检测暴露以后约70天对HCV的暴露。由于HCV建立持久的、且在许多情况下终生的感染，HCV的抗体的检测代表一种非常有效的确定对HCV的暴露的方法。但是，单独的抗体试验经常不能在暴露以后的前70天中检测HCV感染的个体。
[0010]已经提出，针对HCV抗原的试验比抗体试验明显更早地检测对HCV的暴露，并且代表在血清转化前阶段中检测对HCV的暴露的核酸试验的替代方案。HCV抗原检测试验是快速的、简单的，可能不需要样品提取或其它预处理，且不象在HCV RNA试验中可能发生的那样易于出现操作错误(例如，污染)。因而，HCV核心抗原试验提出了用于筛查血液供体或用于监测抗病毒疗法的、针对HCV RNA的实用替代方案。
[0011]现有的HCV抗原试验依赖于检测HCV核心抗原在血清或血浆中的存在。HCV核心蛋白是包含多蛋白的前191个氨基酸的HCV的结构蛋白，且其形成将基因组RNA衣壳化的内部病毒包膜。已经开发了2种不同类型的血清学测定，其允许检测血清中的HCV核心抗原。一种测定形式检测血清转化之前受试者中的HCV核心抗原并用在筛查血液供体中，而另一种测定形式仅检测丙型肝炎患者中的核心抗原(不论它们的HCV抗体状态)，且用在临床实验室中以诊断对HCV的暴露或监测抗病毒疗法。目前可得到的核心抗原检测测定都使用针对HCV核心的位于核心蛋白的氨基酸1
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125处的DNA结合结构域的抗体。所述核心蛋白也含有位于氨基酸134
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171之间的脂质结合结构域。迄今为止，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.单克隆抗体，其可与HCV核心抗原的脂质结合结构域特异性地免疫反应。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其中所述HCV核心抗原是HCV的氨基酸残基134
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171。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其中所述抗体特异性地结合由氨基酸序列MGYIPLVGAPLGGAARALAHGVRVLEDGVNYATGNLPG形成的至少一个表位。4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其中所述抗体可与由HCV核心抗原的氨基酸141
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161、134
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154和151
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171形成的表位免疫反应。5.单克隆抗体，其可与HCV核心抗原的脂质结合结构域特异性地免疫反应，其中所述单克隆抗体具有选自表1A中列出的抗体的重链可变结构域和具有选自表1B中列出的抗体的轻链可变结构域。6.免疫测定试剂，其包含权利要求1的单克隆抗体，其中所述抗体用可检测标记物标记。7.免疫测定试剂，其包含权利要求1的单克隆抗体，其中所述抗体结合至固相。8.根据权利要求6或权利要求7所述的免疫测定试剂，所述的免疫测定试剂进一步包含针对HCV抗原的另外抗体。9.根据权利要求8所述的免疫测定试剂，其中所述另外抗体是另外的抗
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核心抗体。10.用于检测试验样品中的HCV的免疫测定，所述免疫测定包括：(i)使疑似含有HCV的试验样品与针对HCV核心抗原的第一抗体接触以形成所述第一抗体和位于所述试验样品内的抗原之间的复合物；(ii)使在步骤(i)中形成的所述复合物与权利要求1
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6中的任...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：雅培制药有限公司，
类型：发明
国别省市：