腺病毒抗原多肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及免疫学领域，具体而言，涉及一种腺病毒抗原多肽及其应用。本发明专利技术所提供的抗原多肽制备简单，可以使用最简单的大肠杆菌表达系统进行表达，且表达knob多肽为三聚体结构，表达量高、免疫原性强，生产和纯化方便、成本低；knob多肽免疫原性强，可以诱导高滴度的中和抗体；最重要的是，HAdV

【技术实现步骤摘要】
腺病毒抗原多肽及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫学领域，具体而言，涉及一种腺病毒抗原多肽及其应用。

技术介绍

[0002]人肠道腺病毒(Human adenovirus，HAdV)于1953年最早从人类的腺样组织分离出来，故名为腺病毒。其对淋巴腺有亲和力，可以在淋巴腺中潜伏很久。它们引起多种疾病，包括上呼吸道感染，结膜炎(眼部感染)，膀胱感染，肺炎，脑炎和肠胃炎。它们也与心脏病和肥胖症有关。
[0003]HAdV包括两种型别HAdV
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40和HAdV
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41，是引起儿童病毒性腹泻的第二重要病原，目前没有特异性药物和疫苗，临床以支持、对症治疗为主。重组蛋白疫苗成本低、制备方便，目前已有多种重组蛋白疫苗在临床使用，但没有针对人肠道腺病毒的疫苗。
[0004]腺病毒衣壳主要包括纤毛蛋白、五邻体基座和六邻体，现有技术研究一般认为六邻体是腺病毒的主要中和抗原，而纤毛蛋白是吸附细胞的受体结合蛋白，是次要的中和抗原，其诱导中和抗体的能力较差，与受体结合的主要结构域位于纤毛蛋白头(knob)。腺病毒包括有7组52种血清型，不同血清型间没有交叉中和作用，包括HAdV
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40和HAdV
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41之间也没有交叉中和作用。本专利技术申请人之前已经发现并证明大肠杆菌表达系统分别重组表达人3型、7型、11型、55型腺病毒knob多肽，免疫小鼠可以诱导高滴度中和抗体，并发现其中一些型别的knob抗体有一定的交叉中和作用，可以作为多价腺病毒疫苗候选。
>[0005]完整的HAdV
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40和HAdV
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41病毒粒子免疫只能诱导型特异性中和抗体，没有型间交叉保护作用；不同型别腺病毒基因组间易发生重组，可能产生毒力更强的新型腺病毒；人肠道腺病毒细胞培养困难，产量低；因此人肠道腺病毒难于研制传统的灭活或减毒活疫苗。因此如何研制一种能够同时预防HAdV
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40和HAdV
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41的高免疫原性、低成本的疫苗是我们要解决的问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术专利技术人在研究HAdV
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40和HAdV
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41两种腺病毒的基因组时，意外地发现HAdV
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40和HAdV
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41的长纤毛蛋白有非常较高的相似性，而短纤毛蛋白差异较大，推测长纤毛蛋白可能是受体结合蛋白，长纤毛蛋白的纤毛头部分(L
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Knob)可能是受体结合结构域，可能作为亚单位疫苗候靶标。经过测试，由此提出本专利技术。具体的为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
[0007]本专利技术的第一方面涉及抗原多肽，其为SEQ ID NO：1和/或SEQ ID NO：2所示的多肽。
[0008]本专利技术的第二方面涉及分离的核酸，其表达权利要求1所述的抗原多肽。
[0009]可选的，如上所述的核酸，其为SEQ ID NO：3和/或SEQ ID NO：4所示的核苷酸片段。
[0010]本专利技术的第三方面涉及载体，其含有如上所述的核酸。
[0011]本专利技术的第四方面涉及宿主细胞，其含有如上所述的核酸，或被如上所述的载体所转化。
[0012]可选的，如上所述的宿主细胞，其为大肠杆菌。
[0013]本专利技术的第五方面涉及生产如上所述的抗原多肽的方法，包括：
[0014]在合适的培养条件下培养如上所述的宿主细胞；以及
[0015]从培养基中或从所培养的宿主细胞中回收如此产生的抗原多肽。
[0016]本专利技术的第六方面涉及疫苗，其含有如上所述的抗原多肽，或权利要求2或3所述的核酸，或权利要求4所述的载体。
[0017]可选的，如上所述的疫苗，其进一步包含佐剂。
[0018]本专利技术的第七方面涉及试剂盒，其包含如上所述的疫苗。
[0019]本专利技术的第八方面涉及如上所述的抗原多肽，或如上所述的核酸，或如上所述的载体，或如上所述的疫苗在制备用于预防HAdV
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40和/或HAdV
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41型腺病毒感染的药物中的应用。
[0020]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0021]本专利技术所提供的抗原多肽制备简单，可以使用最简单的大肠杆菌表达系统进行表达，且表达knob多肽为三聚体结构，表达量高、免疫原性强，生产和纯化方便、成本低；knob多肽免疫原性强，可以诱导高滴度的中和抗体；最重要的是，HAdV
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40L
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Knob或HAdV
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41L
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Knob诱导的中和抗体对HAdV
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40和HAdV
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41有交叉中和作用，中和滴度相似，可以作为广谱人肠道腺病毒疫苗应用。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0023]图1为本专利技术一个实施例中腺病毒纤毛蛋白knob纯化产物SDS
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PAGE；R为煮沸样品，NR为未煮沸样品；
[0024]图2为本专利技术一个实施例中的细胞微量中和实验结果。
具体实施方式
[0025]现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
[0026]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0027]本专利技术涉及抗原多肽，其为SEQ ID NO：1和/或SEQ ID NO：2所示的多肽。
[0028]当同时含有SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2时，二者可以为混合物的形式使用，也可以融合蛋白的形式使用。
[0029]本专利技术所提供的抗原多肽制备简单，可以使用最简单的大肠杆菌表达系统进行表达，且表达knob多肽为三聚体结构，表达量高、免疫原性强，生产和纯化方便、成本低；knob多肽免疫原性强，可以诱导高滴度的中和抗体；最重要的是，HAdV
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40L
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Knob或HAdV
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41L
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Knob诱导的中和抗体对HAdV
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40和HAdV
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗原多肽，其为SEQ ID NO：1和/或SEQ ID NO：2所示的多肽。2.分离的核酸，其表达权利要求1所述的抗原多肽。3.根据权利要求2所述的核酸其为SEQ ID NO：3和/或SEQ ID NO：4所示的核苷酸片段。4.载体，其含有权利要求2或3所述的核酸。5.宿主细胞，其含有权利要求2或3所述的核酸，或被权利要求4所述的载体所转化。6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其为大肠杆菌。7.生产权利要求1所述的抗原多肽的方法，包括：在合适的培养条件下培养权利要求5或6所述的宿主细胞；以及...

【专利技术属性】
技术研发人员：田新贵，刘振卫，周志超，李潇，刘文宽，周荣，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院广州呼吸中心，
类型：发明
国别省市：