PDX建模佐剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种PDX建模佐剂及其应用，其包括转化生长因子β、表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子、胰岛素、氢化可的松、Y

【技术实现步骤摘要】
PDX建模佐剂及其应用


[0001]本专利技术涉及抗肿瘤药物研发领域，特别是涉及一种PDX建模佐剂及其应用。

技术介绍

[0002]癌症一直以来都是危害人类健康的重大困扰，许多癌症早期患者无明显症状，直到晚期或者转移时才能被发现，治疗结果往往令人失望。尽管肿瘤的基础研究、临床研究及转化医学取得了不少的成绩，但新治疗方法并未给患者带来理想的治疗方案和预后效果。为了更深入地研究肿瘤发展以及寻找更好的药物治疗方法，研究肿瘤的模型特别是动物模型将具有非常重要的价值。
[0003]传统的异种移植肿瘤模型为人源肿瘤细胞系异种移植(cell derived xenograft,CDX)，即将人类肿瘤细胞在体外筛选，经过体外传代培养，建立稳定细胞株，然后接种至免疫缺陷小鼠皮下、肾包膜下或原位移植而建立的模型，这种模型的建立以及在肿瘤研究中的应用已有漫长历史。早在20世纪90年代早期，美国国立癌症研究所(National Cancer Institute,NCI)就依据来源于9种不同类型肿瘤(脑、结肠癌、白血病、肺、黑素瘤、卵巢癌、肾癌、乳腺癌和前列腺癌)的60位癌症患者肿瘤细胞系，引入了一种“disease
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oriented”的药物筛选策略，简单来说，就是先用人肿瘤细胞系进行高通量体外药物筛选，再用CDX模型进行体内验证。但是，研究者逐渐发现人源肿瘤细胞系经长期体外培养后，其肿瘤细胞生物学行为及基因谱表达水平、肿瘤异质性都与原始肿瘤组织存在较大的差异，从而在预测临床药效方面不甚理想。有研究表明，经此模型鉴定筛选的药物仅约1/3在二期临床试验中验证有效。其原因在于，连续传代的肿瘤细胞株适应了外界培养皿的环境，缺乏肿瘤微环境，这些细胞株种植到免疫缺陷小鼠后形成的肿瘤与小鼠具有同质性，丢失了原代肿瘤的特性，因此不能客观地反应原代肿瘤的情况。
[0004]而人源肿瘤异体移植模型(PDX模型)是目前在抗肿瘤药物研发领域广泛应用的一种替身模型。该模型是将癌症患者自身的肿瘤组织移植到免疫缺陷动物上，使其在继续生长、传代，从而生产大量携带该患者肿瘤的荷瘤动物。由于PDX模型保持了患者肿瘤的病理、分子特征及异质性，其对抗肿瘤药物的敏感性与供体患者肿瘤相同。相较于传统的细胞系移植模型(cell
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derived xenograft,CDX)，PDX模型未经过体外培养，较好地保持了原发肿瘤的遗传特性和异质性，实验结果临床预见性更好，可以说是现阶段最优秀的肿瘤动物模型。PDX模型可以进行传代扩增，研究表明传代的肿瘤组织能够和初始肿瘤组织保持高度的一致性，为药物筛查和病人患病机制研究提供了很好的条件。因此，检测准备于临床中应用的备选治疗方案在PDX模型上的药效能够预测这些治疗方案在肿瘤患者临床治疗中的药效，从而为医生选择合适的治疗方案提供可靠参考。目前，PDX模型对于患者临床用药的一致性已经得到广泛认可。
[0005]然而，目前PDX模型建模方法上普遍使用的依然是瘤块接种小鼠皮下的方法，该方法成功率有限，往往造成大量建模不成功的情况，常见生长缓慢、边生长边坏死、生长不稳定、无法快速生长扩大等问题，不仅产生较大的成本支出，同时也无法满足患者个体化医疗
模型建模的需求。因此，PDX模型建模成功率低、周期长，是造成目前精准医疗实验不成功的主要原因。

技术实现思路

[0006]基于此，有必要提供一种可提高建模成功率和建模速度的PDX建模佐剂。
[0007]一种PDX建模佐剂，包括转化生长因子β、表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子、胰岛素、氢化可的松、Y
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27632、胎牛血清和溶剂。
[0008]在其中一个实施例中，所述PDX建模佐剂中，所述转化生长因子β的浓度为100ng/mL～1μg/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为10ng/mL～0.1μg/mL，所述碱性成纤维细胞生长因子的浓度为10ng/mL～0.1μg/mL，所述血管内皮生长因子的浓度为10ng/mL～0.1μg/mL，所述胰岛素的浓度为50μg/mL～0.5mg/mL，所述氢化可的松的浓度为50μg/mL～0.5mg/mL，所述Y
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27632的浓度为10μM～50μM，所述胎牛血清的体积百分比为5％～15％。
[0009]在其中一个实施例中，所述PDX建模佐剂中，所述转化生长因子β的浓度为100ng/mL～200ng/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为10ng/mL～20ng/mL，所述碱性成纤维细胞生长因子的浓度为10ng/mL～20ng/mL，所述血管内皮生长因子的浓度为10ng/mL～20ng/mL，所述胰岛素的浓度为50μg/mL～100μg/mL，所述氢化可的松的浓度为50μg/mL～100μg/mL，所述Y
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27632的浓度为10μM～20μM，所述胎牛血清的体积百分比为5％～10％。
[0010]在其中一个实施例中，所述PDX建模佐剂中，所述转化生长因子β的浓度为100ng/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为10ng/mL，所述碱性成纤维细胞生长因子的浓度为10ng/mL，所述血管内皮生长因子的浓度为10ng/mL，所述胰岛素的浓度为50μg/mL，所述氢化可的松的浓度为50μg/mL，所述Y
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27632的浓度为10μM，所述胎牛血清的体积百分比为5％。
[0011]在其中一个实施例中，所述PDX建模佐剂中还包括浓度为1X～5X的青霉素
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链霉素双抗。
[0012]在其中一个实施例中，所述PDX建模佐剂中，所述青霉素
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链霉素双抗的浓度为1X～2X。
[0013]在其中一个实施例中，所述溶剂为磷酸缓冲液、1640培养基和DMEM培养基中的一种或多种。
[0014]本专利技术还提供了如上所述的PDX建模佐剂在制备PDX动物模型中的应用。
[0015]在其中一个实施例中，制备所述PDX动物模型中所使用的动物为免疫缺陷小鼠。
[0016]本专利技术还提供了一种PDX动物模型的制备方法，包括以下步骤：将如上所述的PDX建模佐剂与肿瘤细胞混合，然后接种于免疫缺陷动物体内。
[0017]通过研究发现，造成PDX模型建模成功率较低的主要问题之一是人肿瘤细胞接种于免疫缺陷动物皮下后，在短时间内营养不足，无法适应免疫缺陷动物体内环境所致。因此，改善免疫缺陷动物接种位置的环境，是提高PDX模型接种成功率的一个主要途径。在肿瘤组织或细胞接种于免疫缺陷动物后，肿瘤细胞分泌的促血管生成因子会吸引宿主血管网的生成，从而获得宿主的血液供应，以获取充足的营养。然而，由于血管网建立需要一定的时间，肿瘤细胞生长又造成了对营养物质及血氧供应的较高需求，往往来不及等到血管网建立，肿瘤内部的细胞便由于供养不足而凋亡、钙化或坏死，造成原代PDX模型生长缓慢或
死亡。此外，由于外源性物质接种导致的局部炎性反应能够大量招募小鼠巨噬细胞，大量巨噬细胞浸润会干扰肿瘤细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种PDX建模佐剂，其特征在于，包括转化生长因子β、表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子、胰岛素、氢化可的松、Y
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27632、胎牛血清和溶剂。2.根据权利要求1所述的PDX建模佐剂，其特征在于，所述PDX建模佐剂中，所述转化生长因子β的浓度为100ng/mL～1μg/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为10ng/mL～0.1μg/mL，所述碱性成纤维细胞生长因子的浓度为10ng/mL～0.1μg/mL，所述血管内皮生长因子的浓度为10ng/mL～0.1μg/mL，所述胰岛素的浓度为50μg/mL～0.5mg/mL，所述氢化可的松的浓度为50μg/mL～0.5mg/mL，所述Y
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27632的浓度为10μM～50μM，所述胎牛血清的体积百分比为5％～15％。3.根据权利要求1所述的PDX建模佐剂，其特征在于，所述PDX建模佐剂中，所述转化生长因子β的浓度为100ng/mL～200ng/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为10ng/mL～20ng/mL，所述碱性成纤维细胞生长因子的浓度为10ng/mL～20ng/mL，所述血管内皮生长因子的浓度为10ng/mL～20ng/mL，所述胰岛素的浓度为50μg/mL～100μg/mL，所述氢化可的松的浓度为50μg/mL～100μg/mL，所述Y
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27632的浓度为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈大为，李佐青，康恺，刘津，王玉龙，
申请(专利权)人：创模生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：