有共同轻链的双互补位和多互补位抗体和使用方法技术

本发明专利技术涉及具有两个或多个互补位的双特异性或多特异性抗体分子。至少一个互补位是Fv或scFv，而其他互补位为单价或双价Fab形式。这些新型分子还具有允许在体内的半衰期延长的Fc部分。Fc部分。Fc部分。

【技术实现步骤摘要】
PLoS One10(5):e0124135,2015)。后一种情况的实例是DVD
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Ig分子，其中两个互补位 都靶向HER2，但是在两个不同的表位(Gu J.et al.,PLoS One 9(5):e97292,2014)，相比 于曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的组合用于抗曲妥珠单抗治疗的异种移植肿瘤模型表现出 功效的提升。
[0008]然而，在识别HER2上的两个表位的双互补位DVD
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Ig分子的情况下，虽然该DVD
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Ig 分子已被证明是多个癌细胞系的拮抗剂，但已被证明对N87癌细胞系具有激动活性(Guet al.,2014)。
[0009]可替代地，双互补位分子也可以以其他形式构建，诸如具有两个不同重链的异二聚 体mAb。当使用两个不同轻链时，除了重链和轻链的正确配对以产生互补位A和互补 位B之外，还可能出现不正确的重链
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轻链配对而导致非功能互补位。
[0010]克服不正确的重链和轻链配对的策略之一是使用共同轻链。该
中已经公开 了由曲妥珠单抗和帕妥珠单抗设计的靶向HER2的结构域II和结构域IV两者。 US20170029529公开了具有除使用曲妥珠单抗的CDR
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L3外，使用基于帕妥珠单抗轻链 的共同轻链的异二聚体形式的双互补位分子。
[0011]WO2016110267公开了另一种双互补位分子，具有使用基于帕妥珠单抗或曲妥珠单 抗的轻链的共同轻链的异二聚体形式，分别在CDR
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L1中的残基31处有Thr或Ile替换， 以及在CDR
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L3中的残基94处有Thr或Tyr替换。在这种情况下，无法同时保持两个 互补位的结合亲和性。

技术实现思路

[0012]本公开的实施方式涉及对同一抗原或不同抗原中的至少两个表位具有特异性的多 互补位抗体构建体，特别是双互补位抗体构建体。这些抗体构建体包括能够与至少两个 不同的重链可变结构域配对以形成功能互补位的共同的轻链。多互补位抗体构建体可用 于治疗癌症，在该癌症中由抗体构建体互补位识别(结合)的抗原在肿瘤中表达。
[0013]在一些实施方式中，多互补位抗体构建体包括识别(结合)HER2的结构域II的第 一互补位。在一些实施方式中，该互补位源自帕妥珠单抗。
[0014]在一些实施方式中，多互补位抗体构建体包括识别(结合)HER2的结构域IV的 第二互补位。在一些实施方式中，该互补位源自曲妥珠单抗。
[0015]在一些实施方式中，多互补位抗体构建体包括识别(结合)血管内皮生长因子受体 2(VEGFR2)的第二互补位。在一些实施方式中，该互补位源自雷莫芦单抗。
[0016]在其他实施方式中，第一和/或第二互补位源自另一种抗体，该抗体识别在包括癌(瘤)细胞和肿瘤血管细胞的肿瘤细胞表面表达的另一种抗原。
[0017]在一些实施方式中，对一个或多个互补位的重链可变结构域进行优化，以在与共同 轻链配对时保留或改进互补位与对应表位的结合。优化可以包括在可变结构域中且特别 是在CDR中进行氨基酸替换。
[0018]在一些实施方式中，多互补位抗体构建体包括优化的共同轻链。共同轻链可以基于 来自至少两个亲本抗体之一的轻链。与典型的轻链相比，或与特定多互补位抗体构建体 的其他亲本抗体的轻链相比，亲本轻链对互补位的贡献可能最小。
[0019]一些实施方式涉及基于曲妥珠单抗的轻链的共同轻链，但包含改善其与源自第二
亲 本抗体的可变结构域的相互作用的突变。在一些实施方式中，帕妥珠单抗是第二亲本抗 体。各种实施方式包括位于CDR
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L2的56位或CDR
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L3的91、94或96位的突变，例 如：S56T、S56A或S56Y；H91Y、H91F或H91W；T94Y、T94F或T94W；或者P96Y、 P96F或P96W；或者在这些位置中的1、2、3或4个处的替换的组合。在一些实施方式 中，曲妥珠单抗相关的共同轻链还包括在CDR
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L1的30位处的突变，例如：N30A或 N30S，用于解决与N30脱酰胺相关的稳定性问题。
[0020]一些实施方式涉及基于雷莫芦单抗的轻链的共同轻链，但包含改善其与源自第二亲 本抗体的可变结构域的相互作用的突变。在一些实施方式中，帕妥珠单抗是第二亲本抗 体。各种实施方式包括位于CDR
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L2的55位或CDR
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L3的91或96位的突变，例如： D55Y；A91Y；P96Y；或者这些位置中的1、2或3个处的替换的组合。
[0021]在互补位之一源自帕妥珠单抗的实施方式中，帕妥珠单抗相关的重链可变结构域未 被修改，或包括位于CDR
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H2中54位处的突变或位于CDR
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H3中98位处的突变，例如： T30A、T30S、T30N或T30D；G56A、G56S或G56T；或者在这些位置的每个处的替换 的组合。
[0022]在互补位之一源自曲妥珠单抗的实施方式中，曲妥珠单抗相关的重链可变结构域未 被修改，或包括位于CDR
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H1中30位处的突变或位于CDR
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H2中56位处的突变，例如： N54S、N54T或N54A；D98W、D98S、D98T或D98R；或者在这些位置的每个处的替 换的组合。
[0023]在一些实施方式中，多互补位抗体构建体是双互补位的。在一些实施方式中，双互 补位抗体构建体具有Fab
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Ig形式。在一些实施方式中，双互补位抗体构建体具有Ig
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Fab 形式。在一些实施方式中，双互补位构建体具有异二聚体形式。在一些实施方式中，双 互补位构建体具有一个基础，向该基础添加额外的抗原结合域，以形成对对应表位的一 种或另一种具有更高价的多互补位抗体构建体，其识别更多数量的表位，或两者兼有。
[0024]在一些实施方式中，多互补位抗体构建体已修改Fc区，以调节它们介导各种免疫 活动(诸如ADCC、ADCP和CDC)，或它们与亲和纯化试剂的相互作用的能力。在一 些实施方式中，多互补位抗体构建体的Fc区已经被修改以增加其血清半衰期。在特定 实施方式中，增加血清半衰期的修改为M428L。
[0025]一些实施方式是编码多互补位抗体构建体的核酸，包括这些编码核酸序列的表达载 体，以及用这些表达载体转化的宿主细胞。在一些实施方式中，编码序列已经过密码子 优化。
[0026]一些实施方式是治疗癌症的方法，其中向有需要的患者给药多互补位抗体构建体。 在一些实施方式中，治疗方法还包括外科手术、放射治疗或给药其他抗癌药物，包括化 疗、靶向疗法和激素治疗。在一些实施方式中，多互补位抗体构建体与药物缀合。其他 实施方式涉及多互补位抗体构建体在治疗癌症或在制造用于治疗癌症的药物中的用途， 以及包括多互补位抗体构建体的组合物用于治疗癌症的用途。
附图说明
[0027]图1：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包括修改后的曲妥珠单抗轻链可变结构域的抗体轻链，所述修改后的曲妥珠单抗轻链可变结构域包括由以下组成的互补决定区3(CDR
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L3)或CDR
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L2修改：a)T94Y、T94F或T94W；b)H91Y、H91F或H91W；c)P96Y、P96F或P96W；d)S56T、S56A或S56Y；或e)a)和b)、a)和c)、a)和d)、b)和c)、b)和d)、c)和d)、a)和b)和c)、a)和b)和d)、a)和c)和d)、b)和c)和d)，或a)和b)和c)和d)中的每个的一种修改的任何组合；其中，所述包括修改后的曲妥珠单抗轻链可变结构域的抗体轻链能够作为在包括至少一种帕妥珠单抗相关的重链可变结构域和与第二抗体的重链可变结构域相关的至少一种重链可变结构域的多互补位抗体构建体中的共同轻链，其中，所述第二抗体的互补位与帕妥珠单抗的互补位相比结合不同的表位；且其中，未修改的曲妥珠单抗轻链可变结构域由SEQ ID NO:5的氨基酸序列组成，且未修改的帕妥珠单抗重链可变结构域由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成。2.根据权利要求1所述的包括修改后的曲妥珠单抗轻链可变结构域的抗体轻链，还包括由N30S或N30A组成的CDR
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L1修改。3.一种多互补位抗体构建体，包括至少一种帕妥珠单抗相关的重链可变结构域和与第二抗体的重链可变结构域相关的至少一种重链可变结构域，其中，所述第二抗体的互补位与帕妥珠单抗的互补位相比结合不同的表位；以及共同轻链，其中，所述公共轻链为包括根据权利要求1或2所述的修改后的曲妥珠单抗轻链可变结构域的抗体轻链。4.根据权利要求3所述的多互补位抗体构建体，其中，所述至少一种帕妥珠单抗相关的重链可变结构域是a)未修改的，或b)包括由以下组成的修改：i)T30A、T30S、T30N或T30D；ii)G56A、G56S或G56T；或iii)各个i)和ii)的一种修改的任意组合。5.根据权利要求3或4所述的多互补位抗体，其中，所述与第二抗体的重链可变结构域相关的重链可变结构域是曲妥珠单抗相关的重链可变结构域，且所述未修改的曲妥珠单抗重链可变结构域由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。6.根据权利要求5所述的多互补位抗体构建体，其中，所述至少一种曲妥珠单抗相关的重链可变结构域是a)未修改的，或b)包括由以下组成的修改：i)N54S、N54T或N54A；ii)D98W、D98S、D98T或D98R；或iii)各个i)和ii)的一种修改的任意组合。7.包括修改后的雷莫芦单抗轻链可变结构域的抗体轻链，包括a)由D55Y组成的CDR
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L2修改；
b)由A91Y组成的CDR
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【专利技术属性】
技术研发人员：肖守华，朱晓东，
申请(专利权)人：北京轩竹康明生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：