一种利用TORC1关键基因突变株靶向识别蛋白食品中特殊氨基酸产生的方法技术

本发明专利技术属于食品技术领域，公开了一种利用TORC1关键基因突变株靶向识别蛋白食品中特殊氨基酸产生的方法，本发明专利技术通过对18种氨基酸添加对尖孢镰孢菌野生株、Gtr1、Gtr2、Sch9与Tap42基因敲除突变及回补株的菌落生长、产孢、产T

【技术实现步骤摘要】
一种利用TORC1关键基因突变株靶向识别蛋白食品中特殊氨基酸产生的方法


[0001]本专利技术涉及食品
，更具体地，涉及一种利用TORC1关键基因突变株靶向识别蛋白食品中特殊氨基酸产生的方法。

技术介绍

[0002]真菌细胞中，TORC1可感知环境中的营养物质、生长因子、压力等信号，来参与调节蛋白质翻译、核糖体合成、基因转录等信号通路，进而调节真菌的生长及代谢。上游响应元件Gtr1与Gtr2结合为异源二聚体，可介导上游多个信号通路，进而通过下游效应器调控细胞的生理过程，而下游支路中，Sch9与Tap42作为代谢效应元件，可响应上级通路传导的信号因子并通过下游调控镰孢菌的生长代谢。但Gtr1、Gtr2、Sch9与Tap42单一元件由TORC1通路介导对菌丝生长及次生代谢物生成的调控作用，目前还未有报道。
[0003]氨基酸作为TORC1信号通路的激活因子，具有显著调控细胞功能的作用。氨基酸根据性质的不同，可分为酸性氨基酸、碱性氨基酸、支链氨基酸、含硫氨基酸等。在不同种类的氨基酸激活下，可通过真菌TORC1元件传达不同的响应信号，对特定氨基酸进行响应，并通过下游支路的协同作用吸收利用于生长代谢。但目前对不同种类的氨基酸如何调控镰孢菌的生长与代谢，目前还深入研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术为了克服现有技术中存在的上述缺陷，首先提供了一种利用尖孢镰孢菌和/或尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株靶向识别蛋白食品中特殊氨基酸产生的方法。
[0005]本专利技术的第二个目的是提供上述方法的应用。
[0006]本专利技术的目的通过以下技术方案实现：
[0007]一种利用尖孢镰孢菌和/或尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株靶向识别蛋白食品中特殊氨基酸产生的方法，所述尖孢镰孢菌的保藏编号为GDMCC 60824；所述尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株包括尖孢镰孢菌基因敲除株
△
FoGtr1、
△
FoGtr2、
△
FoSch9、
△
FoTap42和尖孢镰孢菌基因回补株
△
FoGtr1
‑
C、
△
FoGtr2
‑
C、
△
FoSch9
‑
C、
△
FoTap42
‑
C；所述生长和代谢指标包括：菌落生长、产孢能力和产毒能力；
[0008](1)当利用尖孢镰孢菌识别时，包括以下步骤：
[0009]S11、待测样品的制备：将蛋白食品制成待测样品溶液；
[0010]S12、将S11制备得到的待测样品溶液与尖孢镰孢菌共培养作为实验组；
[0011]S13、结果判读：与安慰剂组相比较，实验组中尖孢镰孢菌的生长和代谢指标发生变化，则所述待测样品溶液中含有特殊氨基酸；所述特殊氨基酸包括L
‑
Asp、L
‑
Cys、L
‑
Glu、L
‑
Met、L
‑
Leu、L
‑
Val、L
‑
Try、L
‑
Ala、Gly、L
‑
Phe、L
‑
Tyr、L
‑
Arg、L
‑
Lys。
[0012](2)当利用尖孢镰孢菌和尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株识别时，包括以下步骤：
[0013]S21、待测样品的制备：将蛋白食品制成待测样品溶液；
[0014]S22、将S21制备得到的待测样品溶液分别与尖孢镰孢菌、尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株共培养，分别计为野生株实验组、
△
FoGtr1组、
△
FoGtr2组、
△
FoSch9组、
△
FoTap42组、
△
FoGtr1
‑
C组、
△
FoGtr2
‑
C组、
△
FoSch9
‑
C组、
△
FoTap42
‑
C组；
[0015]S23、结果判读：与野生株实验组相比较，
△
FoGtr1组、
△
FoGtr2组、
△
FoSch9组、
△
FoTap42组、
△
FoGtr1
‑
C组、
△
FoGtr2
‑
C组、
△
FoSch9
‑
C组、
△
FoTap42
‑
C组中菌的生长和代谢指标发生变化，则所述待测样品溶液中含有特殊氨基酸；所述特殊氨基酸包括L
‑
Asp、L
‑
Cys、L
‑
Glu、L
‑
Met、L
‑
Leu、L
‑
Val、L
‑
Try、L
‑
Ala、Gly、L
‑
Phe、L
‑
Tyr、L
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Arg、L
‑
Lys、L
‑
Iso、L
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Thr、L
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Pro、L
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Ser、L
‑
His。
[0016]本专利技术通过对18种氨基酸添加对尖孢镰孢菌野生株、Gtr1、Gtr2、Sch9与Tap42基因敲除突变及回补株的菌落生长、产孢、产T
‑
2的调控作用，深度阐述氨基酸对镰孢菌TORC1通路介导下的生长和代谢的调控作用。
[0017]通过探究氨基酸添加对TORC1通路Gtr1、Gtr2、Sch9和Tap42基因缺失株的生长、菌丝形态、产孢和产T
‑
2能力的影响，发现中/碱性氨基酸与激活镰孢菌生长，而酸性氨基酸和含硫氨基酸抑制镰孢菌生长。Gtr2基因缺失生长受抑制，Sch9基因缺失菌丝体出现缺陷。生长抑制的镰孢菌菌丝顶端生长受阻，产生较多气生菌丝，分枝增多。Gtr2、Sch9和Tap42基因与产孢能力调控显著相关。L
‑
Arg可促进镰孢菌产孢，L
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Asp、L
‑
Cys、L
‑
Glu则抑制产孢。镰孢菌产T
‑
2方面，L
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Pro和L
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Cys与激活产毒能力呈正相关关系，L
‑
Asp和L
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Glu与抑制镰孢菌产毒能力相关。Sch9基因缺失后，氨基酸添加可同时激活镰孢菌的产孢和产毒。
[0018]由上述研究表明，可以通过本专利技术上述方法初步鉴别样品中所含有的氨基酸种类，从而为鉴别食品中氨基酸种类提供新方法，新思路。
[0019本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用尖孢镰孢菌和/或尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株靶向识别蛋白食品中特殊氨基酸产生的方法，其特征在于，所述尖孢镰孢菌的保藏编号为GDMCC 60824；所述尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株包括尖孢镰孢菌基因敲除株
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FoGtr1、
△
FoGtr2、
△
FoSch9、
△
FoTap42和尖孢镰孢菌基因回补株
△
FoGtr1
‑
C、
△
FoGtr2
‑
C、
△
FoSch9
‑
C、
△
FoTap42
‑
C；所述生长和代谢指标包括：菌落生长、产孢能力和产毒能力；当利用尖孢镰孢菌识别时，包括以下步骤：S11、待测样品的制备：将蛋白食品制成待测样品溶液；S12、将S11制备得到的待测样品溶液与尖孢镰孢菌共培养作为实验组；S13、结果判读：与安慰剂组相比较，实验组中尖孢镰孢菌的生长和代谢指标发生变化，则所述待测样品溶液中含有特殊氨基酸；所述特殊氨基酸包括L
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Asp、L
‑
Cys、L
‑
Glu、L
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Met、L
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Leu、L
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Val、L
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Try、L
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Ala、Gly、L
‑
Phe、L
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Tyr、L
‑
Arg、L
‑
Lys。2.根据权利要求1所述的利用尖孢镰孢菌和/或尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株靶向识别蛋白食品中特殊氨基酸产生的方法，其特征在于，当利用尖孢镰孢菌和尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株识别时，包括以下步骤：S21、待测样品的制备：将蛋白食品制成待测样品溶液；S22、将S21制备得到的待测样品溶液分别与尖孢镰孢菌、尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株共培养，分别计为野生株实验组、
△
FoGtr1组、
△
FoGtr2组、
△
FoSch9组、
△
FoTap42组、
△
FoGtr1
‑
C组、
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FoGtr2
‑
C组、
△
FoSch9
‑
C组、
△
FoTap42
‑
C组；S23、结果判读：与野生株实验组相比较，
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FoGtr1组、
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FoGtr2组、
△
FoSch9组、
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FoTap42组、
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FoGtr1
‑
C组、
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FoGtr2
‑
C组、
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FoSch9
‑
C组、
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FoTap42
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C组中菌的生长和代谢指标发生变化，则所述待测样品溶液中含有特殊氨基酸；所述特殊氨基酸包括L
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Asp、L
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Cys、L

【专利技术属性】
技术研发人员：孙力军，邓义佳，房志家，邓旗，王雅玲，王润东，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：