脱细胞SIS在抑制青光眼术后瘢痕组织增生中的应用制造技术

本发明专利技术公开了脱细胞SIS在抑制青光眼术后瘢痕组织增生中的应用，制备脱细胞SIS，将脱细胞SIS应用于抑制青光眼滤过术后瘢痕形成，为解决眼科领域的瘢痕防治问题，为开发预防和治疗眼部瘢痕形成开辟崭新的治疗途径。疗眼部瘢痕形成开辟崭新的治疗途径。

【技术实现步骤摘要】
脱细胞SIS在抑制青光眼术后瘢痕组织增生中的应用


[0001]本专利技术涉及脱细胞SIS在抑制青光眼术后瘢痕组织增生中的应用，属于生物


技术介绍

[0002]青光眼是我国的常见病，占致盲眼病的第二位，人群中的发病率约为0.21％～1.64％。目前，药物无法控制的青光眼的主要治疗手段仍是滤过性手术。青光眼滤过手术的目的是建立新的房水引流途径从而降低眼压。术中被切除的巩膜小梁组织形成一瘘道，前房内的房水经此瘘道引流至球结膜下，形成滤过泡，然后被滤过泡周围组织中的毛细血管或淋巴管吸收，以解除病理性的引流障碍，达到降低眼压的目的。手术后由于血
‑
房水屏障的破坏以及手术后的炎症反应，成纤维细胞大量增殖，可导致结膜下组织纤维化和滤过泡瘢痕形成，这是滤过性手术失败的最常见和最主要原因。调查发现，青光眼滤过性手术2年内的失败率可达15
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30％。因此，抑制青光眼术后成纤维细胞过度增殖、减少滤过泡的瘢痕形成是提高手术成功率的关键，也是青光眼研究的一大难题。
[0003]近年来，已有多种方法在临床尝试应用，如采取不同形式的结膜瓣、经角膜切口、β射线照射、术中术后抗瘢痕药物的应用如丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)、5
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氟脲嘧啶(5
‑
fluorouracil,5
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FU)、争光霉素、阿霉素、组织型纤维蛋白溶酶元激活剂(t
‑
PA)、环孢霉素A、干扰素等，生物材料植入如胶原棒、生物胶(SK
‑<br/>Gel)、晶状体前囊膜、羊膜等。其中抗代谢药物MMC和5
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FU在临床上应用较广泛，但这类药物细胞毒性较大，由此引起的手术并发症如滤过泡漏、低眼压、低眼压黄斑病变、眼内炎等逐渐增多，对本已损伤视功能的青光眼患者产生了新的威胁。
[0004]小肠粘膜下层(SIS)是通过机械方法去除猪小肠的粘膜层和肌层而获得的一层厚约100μm的胶原基质，由高度保守的胶原、糖蛋白、蛋白多糖以及糖氨聚糖组成。SIS广泛应用于皮肤、腹壁、膀胱、尿道、眶壁、阴道、骨膜等多种组织的修复重建[27－35]以及神经、血管、心脏瓣膜、骨、肌腱、韧带、食管、皮肤、半月板、硬脑膜、脂肪等组织工程支架材料。SIS来源广泛、取材方便、制备工艺简单、可廉价大量生产、易消毒及保存，良好的生物相容性及无毒性使其在眼科的应用前景广泛。尽管SIS在眼科已有应用，但其用于抑制眼部瘢痕形成尚未见报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术克服了上述现有技术的不足，提供脱细胞SIS在抑制青光眼术后瘢痕组织增生中的应用，制备脱细胞SIS，将脱细胞SIS应用于抑制青光眼滤过术后瘢痕形成，为解决眼科领域的瘢痕防治问题，为开发预防和治疗眼部瘢痕形成开辟崭新的治疗途径。
[0006]脱细胞SIS在制备抑制青光眼术后瘢痕组织增生的药物中的应用。
[0007]进一步的，上述应用中脱细胞SIS可以抑制成纤维细胞生长及增殖。
[0008]进一步的，上述脱细胞SIS的制备方法，包括如下步骤：
[0009]取健康成年猪的新鲜近段空肠，采用机械方法刮除获小肠粘膜下层，脱细胞后冷冻干燥处理，获得脱细胞SIS。
[0010]进一步的，上述脱细胞SIS抑制成纤维细胞生长及增殖的方法，包括如下步骤：
[0011]1)组织培养法培养成纤维细胞；
[0012]2)取步骤1)获得的成纤维细胞，加入脱细胞SIS，即可抑制成纤维细胞生长增殖。
[0013]有益效果：
[0014]本申请首次将脱细胞SIS应用于抑制青光眼滤过术后瘢痕形成，为解决眼科领域的瘢痕防治问题开辟新思路。为开发预防和治疗眼部瘢痕形成开辟崭新的治疗途径。将SIS应用于抑制青光眼术后瘢痕组织增生，减少青光眼术后瘢痕组织形成，开辟预防和治疗瘢痕的新方法。本研究对提高青光眼术后成功率、降低治盲率，具有重要的社会意义。有望将科学研究转化为产品应用于临床，具有可观的社会效益和经济效益。
具体实施方式
[0015]为了使本
人员更好地理解本申请中的技术方案，下面结合实施例对本专利技术作进一步说明，所描述的实施例仅是本申请一部分实施例，而不是全部，本专利技术不受下述实施例的限制。
[0016]实施例1
[0017]一、实验步骤
[0018]1、制备脱细胞SIS
[0019]取健康成年猪的新鲜近段空肠，采用机械方法刮除获小肠粘膜下层，脱细胞后冷冻干燥处理，获得脱细胞SIS。
[0020]2、组织块培养法培养免Tenon
’
s成纤维细胞
[0021]无菌条件下将切除下来的的Tenon囊组织立即放入含500U/mL青霉素和500mg/L链霉素的培养基中。于4h内在超净工作台内取出标本。标本置于含青霉素100U/mL，链霉素100mg/L的D
‑
hanks液中，无菌条件下用D
‑
hanks液将标本反复洗涤，将清洗干净组织剪成3mm
×
3mm
×
2mm大小的组织块。将组织块移入50mL培养瓶中，均匀贴壁。加入含有15％胎牛血清，青霉素100U/mL，链霉素100mg/L，pH7.2
‑
7.4的DMEM培养基1.5mL，密闭瓶口。将培养瓶反转，令组织块在上，置37℃、体积分数5％CO2、饱和湿度的培养箱中培养4h，将培养瓶翻转，使培养基浸泡组织块。2d后补加3
‑
5mL前述的DMEM培养基，此后3
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4d更换1次培养液(前述的DMEM培养基)。待成纤维细胞长满瓶底时以0.25％胰蛋白酶消化传代培养。反复传代去除非成纤维细胞成分后，取第3～5代的成纤维细胞做检测。
[0022]3、脱细胞SIS对成纤维细胞的影响
[0023](1)细胞形态学观察：选生长良好的细胞，以每孔1
×
10个细胞接种于6孔板中的玻璃片上。
[0024]分成两个实验组：
①
SIS组：加入SIS浸提液500μL，SIS浸提液：将获得的脱细胞SIS前述DMEM培养基中浸泡即可获得SIS浸提液；
②
空白对照组：每孔加500μL的培养基(该培养基为前述的DMEM培养基)。24h后将玻璃片取出，自然晾干，固定后行苏木精－伊红(HE)染色，显微镜下观察形态学改变。
[0025](2)MTT法测定SIS浸提液对成纤维细胞的增殖影响作用：
[0026]取对数生长期的3
‑
5代成纤维细胞，0.25％胰蛋白酶消化成单细胞悬液，调为0.5
×
105/mL，分别接种于96孔塑料培养板，密度为0.5
×
104个/孔，每孔加入100μL细胞悬液和100μL的培养基(该培养基为前述的DMEM培养基)，常规培养24h后吸弃原培养液。
[0027]分成两个实验组：
①
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.脱细胞SIS在制备抑制青光眼术后瘢痕组织增生的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，脱细胞SIS抑制成纤维细胞生长及增殖。3.如权利要求2所述的脱细胞SIS抑制成纤维细胞生长及增殖指脱细胞SIS影响成纤维细胞的细胞形态和减少成纤维细胞数量。4.如权利要求1或2所述的脱细胞SIS的制备方法，其特征在于，包...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈红梅，杜立群，史陇，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：