【技术实现步骤摘要】
一种新型探针标记方法
[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种新型探针标记方法。
技术介绍
[0002]目前主要的荧光标记方法依然是切口平移法，随机引物法，聚合酶链式反应法等，每种方法都各有其优缺点，随机引物法产量低，操作复杂；聚合酶链式反应法得率较高，但方法不稳定，批间差比较大；切口平移法发展最早，最为成熟，但标记时间长，得率低。常规的切口平移法标记探针是将DNase I，DNA polymerase I，BAC质粒加入一个体系中进行反应，DNase I首先对质粒产生切口，DNA polymerase I在切口处进行延伸，在延伸的过程中通过错配的方式将dUTP
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荧光素插入到新合成的DNA分子中，从而获得标记的探针。但此方法反应时间比较长，2.5h左右，且反应结束后需要酒精沉淀纯化，有时需过夜沉淀，大大限制了探针生产的效率。
技术实现思路
[0003]本专利技术的目的在于提供一种新型探针标记方法，该方法对常规切口平移法进行改进，既缩短了标记时间又提高了标记效率。
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种新型探针标记方法，包括如下步骤：1)用DNA酶I消化BAC克隆质粒，形成DNA片段；2)用TdT末端转移酶对DNA片段进行末端标记；3)配制探针溶液。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤1)中DNA片段的长度为200
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500bp。3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤1)中用DNA酶I消化BAC克隆质粒的酶切体系如下：BAC克隆2μg，DNase I 1μL，10
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DNase buffer 2μL，ddH2O补足20μL。4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，酶切程序为：37℃5
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10min，75℃10min。5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤2)中先对DNA片段进行纯化再进行末端标记。6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤2)中标记体系如下：DNA片段700ng，Terminal Deoxynucleotidyl Transferase 0.5μL，5...
【专利技术属性】
技术研发人员：王少辉，李三华，齐华，李贵喜，胡娟，霍清园，张绍敏，刘文弟，
申请(专利权)人：河南赛诺特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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