本发明专利技术提供了一株高效降解多种芳香类污染物的假单胞菌及其应用。本发明专利技术公开的假单胞菌Pseudomonas gessardii AD1保藏号为CCTCC NO：M 2021841。所述的假单胞菌Pseudomonas gessardii AD1环境适应性强，在25~35℃、pH值为6.0~8.0范围内能够高效降解甲苯，对羟基苯甲酸等多种芳香族污染物；在温度30℃、pH值为7.0时，不同芳香族污染物的降解率均可达到80~90%，能够降低污水毒性，可用于木质纤维素碱处理黑液、焦化废水等多种工业废水处理中芳香族污染物的降解，具有较高的应用价值。具有较高的应用价值。具有较高的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
一株高效降解多种芳香类污染物的假单胞菌及其应用
[0001]本专利技术属于环境微生物
，具体涉及一株高效降解多种芳香类污染物的假单胞菌及其应用。
技术介绍
[0002]芳香族化合物是一类含苯环结构的化合物的统称，不仅广泛存在于自然环境中，也广泛应用于人类社会工业、农业生产和日常生活中。根据结构的不同，芳香族化合物大致可以分为以下三类：简单芳香族化合物，多环芳香族化合物以及杂环化合物。由于苯环结构的稳定性，部分芳香族化合物能够在环境中长期残留，对生态环境和人体健康形成了巨大的威胁。例如，芳香族化合物对人体健康可能存在神经毒性、血液毒性、生殖毒性和致癌性等多方面的威胁，亟需高效的处理技术和工艺。
[0003]芳香族污染物的处理方法主要包括物理法、化学法和生物法。其中，物理化学法包括吸附、混凝、催化氧化等，生物法则主要通过好氧与厌氧细菌的同化代谢来进行。芳香族污染物种类繁多，微生物对于不同芳香族污染物的代谢方式同样存在着较大的差异，从而呈现出不同的处理效果。相比物理降解法与化学降解法，生物降解法具有高效、低成本、无二次污染且能够很好地适应各种环境等特点，逐渐成为最具有前途的环境修复技术之一。
[0004]通过生物降解法处理芳香族污染物重点依赖于分离、筛选高效降解菌株。目前被广为报道的芳香族污染物降解菌株主要包括假单胞菌属，芽孢杆菌属，红球菌属，鞘脂菌属等，其中假单胞菌属因其功能菌株种类多，降解效果显著，环境适应性广泛，成为相关领域的重点研究对象，也出现在较多相关的专利申请中。然而考虑到芳香族污染物的多样性和难降解性，目前的生物处理过程仍需开发更为广谱高效的降解菌株和工艺流程。微生物的生长和功能往往受到多种环境因素的影响，比如温度、pH、底物类别等，而且在实际应用中通常为多种污染物同时存在，可能呈现协同或拮抗的情况。因此，充分利用自然界中的微生物资源，发掘新的芳香族污染物高效降解菌株，并明确其降解功能特点和环境适应性，是需要解决的重要课题。
技术实现思路
[0005]针对以上问题，本专利技术的目的在于提供一株高效降解多种芳香族污染物的假单胞菌及其应用，用于有效降解工业废水中的多种简单芳香族化合物。。
[0006]本专利技术的又一目的在于提供所述菌株在含芳香族污染物工业废水处理中的应用。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：本专利技术第一方面提供一株高效降解芳香族污染物的菌株AD1，通过16S rDNA序列比对，并结合菌株的形态特征、生理生化特性，被分类为Pseudomonas gessardii。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），菌株名称为Pseudomonas gessardii AD1，保藏日期：2021年7月8日，保藏号：CCTCC NO：M 2021841。
[0008]所述的假单胞菌Pseudomonas gessardii AD1，其特征在于，其为革兰氏阴性细
30.0mg/L，CoCl2·
6H2O200.0mg/L，H3BO360.0mg/L，NiCl2·
6H2O25.0mg/L，浓度37%的HCl0.9mL/L。
[0023]分离纯化固体培养基：15.0g/L琼脂粉，2.5g/L(NH4)2SO4，0.25g/LKH2PO4，1.0g/LK2HPO4，5.5g/L葡萄糖，11.5g/L丁二酸钠，0.2g/LMgCl2，1.0mL/L铁溶液，1.0mL/L微量元素溶液，pH值为7.0，铁溶液和微量元素溶液的组成与上述一致。
[0024]甘蔗糖蜜液体培养基：20.0~50.0g/L甘蔗糖蜜，0.75g/LKH2PO4，3.0g/LK2HPO4，0.2g/LMgCl2，1.0mL/L铁溶液，1.0mL/L微量元素溶液，pH值为7.0，铁溶液和微量元素溶液的组成与上述一致。
[0025]验证液体培养基：不同浓度（0.5g/L,1g/L,2.5g/L和5g/L）的羟基苯甲酸，0.25g/LKH2PO4，1.0g/LK2HPO4，5.5g/L葡萄糖，丁二11.5g/L酸钠，0.2g/LMgCl2，1.0mL/L铁溶液，1.0mL/L微量元素溶液，pH值为7.0，铁溶液和微量元素溶液的组成与上述一致。
[0026]以上培养基配制好后，均在115℃下高压蒸汽灭菌20min，备用。
[0027]富集培养：筛选样品采集于石油化工废水中，取5mL采集的样品接种于装有95mL富集液体培养基的三角烧瓶中培养。培养条件为30℃、转速200r/min，培养48h后结束。之后取5ml培养物接种于新鲜的富集培养基中传代，传代条件与上述培养条件一致，传代2~3次结束培养。最终的培养物用于后续有效微生物的分离。
[0028]分离纯化：将经过富集培养的培养物进行梯度稀释，均匀涂布在固体培养基平板上。涂布完成后，平板倒置在30℃的恒温培养箱中，培养48h后根据平板上的菌落形态，挑取形态大小不同的菌落，划线纯化后编号保藏。共分离得到4株菌，分别命名为AD1、AD2、AD3、AD4。
[0029]性能测定：将筛选到的4株菌分别用甘蔗糖蜜液体培养基培养12h，然后按照5%的接种量分别接种于装有200mL验证液体培养基的反应瓶中，反应温度控制在30℃。验证菌株降解芳香族污染物的性能时以对羟基苯甲酸为例。验证培养基中加入不同浓度的对羟基苯甲酸（0.5g/L,1g/L,2.5g/L和5g/L），培养24h后取样，通过液相色谱测定剩余对羟基苯甲酸的浓度，并计算降解率。筛选所得的4株菌对于对羟基苯甲酸的降解率如表1。其中AD1的降解能力最为突出，在羟基苯甲酸浓度范围0.5
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2.5g/L时均高于85%。对羟基苯甲酸对4株菌均有一定的抑制作用，其降解率随着初始浓度的升高逐渐下降。当初始浓度高于5g/L时，呈现的降解效果不显著。
[0030]表14株菌降解对羟基苯甲酸的性能菌株AD1的鉴定：提取菌株基因组，通过16S测序手段鉴定菌株AD1的分类学特征。
基因组的提取借助AXYGEN公司的细菌基因组提取试剂盒，利用引物27F （AGAGTTTGATCCTGGCTCA）和1492R（GGTTACCTTGTTACGACTT）扩增菌株AD1的16S rDNA片段。PCR反应体系的总体积为30 μL，包含模板DNA 1 μL，Primer star mix 15 μL，上、下游引物各1 μL，ddH2O至12 μL。PCR程序：98 ℃ 5 min，98 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，68 ℃ 90 s，循环30次，68 ℃ 10 min，16℃ 10 min。PCR产物的纯化和测序由上海生工生物科技有限公司完成。测序得到菌株AD1的16S rDNA长度1248 bp，核酸序列如SEQID NO.1所示。该序列经过Nucleotide BLAST分析，与NCBI数据库中假单胞菌CIP 105469（NCBI序列号：NR
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024928.1）碱基一致性为1240 bp，相似性达到99%。同时本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一株降解芳香类污染物的假单胞菌Pseudomonas gessardii AD1，保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏日期：2021年7月8日，保藏号：CCTCC NO：M 2021841。2.一种微生物菌剂，其特征在于，包含如权利要求1所述的假单胞菌Pseudomonas gessardii AD1。3.如权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，所述的微生物菌剂中假单胞菌Pseudomonas gessardii AD1的含量不少于5
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10
8 CFU/mL。4.如权利要求1
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2任一所述的假单胞菌Pseudomonas gessardii AD1的应用，其特征在于，所述的假单胞菌Pseudomonas gessardii AD1用于降解芳香族污染物。5.如权利要求1
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2任一所述的假单胞菌Pseudomonas gessardii AD1的应用，其特征在于，所述的假单胞菌Pseudomonas gessardii A...
【专利技术属性】
技术研发人员：邱建贺，翁雯，梁锡伟，周国彪，黄志中，陈淼银，
申请(专利权)人：佛山市玉凰生态环境科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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