琴叶榕石油醚部位在制备预防或治疗肝癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了琴叶榕石油醚部位在制备预防或治疗肝癌药物中的应用，经体内外研究结果显示：琴叶榕石油醚部位在体外实验中表现出良好的抗肝癌细胞增殖作用，同时能够诱导肝癌细胞凋亡的发生；琴叶榕石油醚部位在体内实验中表现出较好的抑瘤作用，与20mg/kg索拉菲尼的抑瘤率无显著性差异，其作用机制可能与对Wnt/β

【技术实现步骤摘要】
琴叶榕石油醚部位在制备预防或治疗肝癌药物中的应用


[0001]本专利技术涉及中药
，具体涉及琴叶榕石油醚部位在制备预防或治疗肝癌药物中的应用。

技术介绍

[0002]肝癌具有肿瘤进展快、预后情况差等特点，肝癌目前在全世界范围内的癌症致死率中排在第二位，且逐年攀升。肝癌在国内的治疗现状更是不容乐观：中国的肝癌病例约占全世界总数的50％，而且中国的肝癌病例表现出预后差、病死率高的特点，五年生存率不足15％。在中医药角度来说，肝癌常分为肝郁脾虚、肝胆湿热、肝热血瘀、脾虚湿困、肝肾阴虚等证型。目前研究表明许多中药都表现出抑制肿瘤的作用。同时中药长于扶正固本，鉴于中药的依从性而言，中药的应用在康复、疗养和联合用药等方面均有一定优势。
[0003]琴叶榕为桑科榕属的植物，拉丁名为Ficus pandurata Hance。中医典籍记载琴叶榕性平，味甘、微辛，归属肝、脾、胃经，具有行气活络、通经、祛湿、消肿等作用。目前针对琴叶榕的研究主要围绕琴叶榕的大极性部位，如水提物、多糖的药理活性，而对于小极性部位的活性几乎没有涉及，且未见将琴叶榕石油醚部位用于预防或治疗肝癌的文献报道。

技术实现思路

[0004]鉴于此，本专利技术的目的在于提供琴叶榕石油醚部位在制备预防或治疗肝癌药物中的应用。
[0005]本专利技术采用80％乙醇对琴叶榕全株干燥粗粉进行提取，使用了不同极性的溶剂对醇提得到的粗提物进行萃取而得到琴叶榕的石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位。在此基础上，使用MTT法对不同部位进行了抗肝癌活性追踪，确定了抗肝癌部位的有效成分主要集中在琴叶榕石油醚部位，即琴叶榕石油醚部位为琴叶榕抗肝癌的有效部位。
[0006]本专利技术进一步对琴叶榕石油醚部位的成分进行了GC
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MS分析，琴叶榕石油醚部位主要包含补骨脂素、佛手柑内酯等香豆素类化合物，以及羽扇豆醇、Urs
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12
‑
en
‑
24
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oic acid,3
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oxo
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,methyl ester,(+)
‑
等三萜类物质，这都为琴叶榕石油醚部位抗肝癌活性奠定了相关的物质基础，同时也为琴叶榕石油醚部位后续的化学成分研究指明了方向。
[0007]在确定了琴叶榕石油醚部位为抗肝癌活性的有效部位之后，本专利技术采用四种肝癌细胞对其抗肝癌活性进行了进一步的验证。发现琴叶榕石油醚部位对HepG2、SMMC7721肝癌细胞具有较好的选择性，在高浓度下表现出高的增殖抑制率，同时琴叶榕石油醚部位对这两株细胞也表现出较低的IC50值。为探讨琴叶榕石油醚部位对于肝癌细胞的增殖抑制方式，通过Annexin
Ⅴ
和PI染料对细胞进行染色，流式细胞术检验在琴叶榕石油醚部位处理后HepG2、SMMC7721肝癌细胞的细胞凋亡率。结果显示，相较于对照组而言，多种浓度下的琴叶榕石油醚部位均能够诱导肝癌细胞HepG2、SMMC7721凋亡的发生，且表现出浓度依赖性，优选的，所述琴叶榕石油醚部位的浓度范围内30μg/ml～250μg/ml，更优选为125μg/ml～250μ
g/ml。而琴叶榕石油醚部位对于HepG2的凋亡诱导效果优于SMMC7721细胞。
[0008]在选择体内移植瘤的借种细胞时，根据文献调研及细胞来源信息选择了SMMC7721肝癌细胞，因此在体外进行了体外的抗肝癌机制筛选研究。在结合琴叶榕抗肝炎的报道后，选择了NF
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kB、JAK/STAT、Wnt/β
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catenin三条围绕炎癌紧密相关的抗癌通路。Western
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Blot结果显示琴叶榕石油醚部位能够下调JAK/STAT通路的STAT3的表达，下调NF
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kB通路中的NF
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kB、IKB
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α的表达，下调Wnt/β
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catenin通路中β
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catenin、Axin1的表达，从而抑制肝癌细胞SMMC7721的增殖。
[0009]本专利技术在体外验证了琴叶榕石油醚部位的抗肝癌活性之后，紧接着开展了体内实验。索拉菲尼是国内唯一上市的针对晚期肝癌的抗癌药物，在结合了相关报道之后，本专利技术选择使用索拉菲尼作为体内实验的阳性药。体内实验结果表明，统计分析结果表明阳性药20mg/kg索拉菲尼对与琴叶榕石油醚部位高剂量组的抑瘤率无显著性差异，而瘤重均显著低于模型组。同时在对药物毒性的观察中，琴叶榕石油醚部位对于心、脾、肺、肾的相对质量无显著影响，而对于肝的相对重量具有轻微上调的作用，与索拉菲尼组的下调作用呈相反调节。
[0010]本专利技术还提供了一种预防或治疗治疗肝癌的药物，包含有效含量的琴叶榕石油醚部位和药学上可接受的载体。本专利技术预防或治疗治疗肝癌的药物可经本领域常规方法制备成适宜的剂型。优选的，所述药物的剂型为片剂、胶囊、粉剂或颗粒剂。
[0011]本专利技术与现有技术相比，具有如下优异效果：
[0012]本专利技术提供了一种琴叶榕石油醚部位在制备预防或治疗肝癌药物中的应用。经体内外研究结果显示：琴叶榕石油醚部位在体外实验中表现出良好的抗肝癌细胞增殖作用，同时能够诱导肝癌细胞凋亡的发生；琴叶榕石油醚部位在体内实验中表现出较好的抑瘤作用，与20mg/kg索拉菲尼的抑瘤率无显著性差异，其作用机制可能与对Wnt/β
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catenin、JAK/STAT、NF
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kB通路的调节有关。表明琴叶榕石油醚部位具有较好的抗肝癌活性，在抗肝癌活性方面具有较高的研究价值和开发潜力。
附图说明
[0013]图1为琴叶榕各部位高剂量下的抗肝癌增殖活性(n＝3)；
[0014]图2琴叶榕石油醚部位对肝癌细胞(从左到右依次为Hep3B、PLC
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PRF
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5、HepG2、SMMC7721)的增殖抑制活性(n＝3)；
[0015]图3为琴叶榕石油醚部位诱导HepG2肝癌细胞凋亡(n＝3)；
[0016]图4为琴叶榕石油醚部位诱导SMMC7721细胞凋亡(n＝3)；
[0017]图5为不同浓度的琴叶榕石油醚部位诱导肝癌细胞(从左到右依次为HepG2、SMMC7721)的凋亡率(n＝3)，*：在HepG2组，P＜0.05VS 0ug/ml；#：在SMMC7721组，P＜0.05VS 0ug/ml；
[0018]图6为琴叶榕石油醚部位对SMMC7721肝癌细胞相关蛋白的影响(n＝3)；
[0019]图7为琴叶榕石油醚部位作用下SMMC7721肝癌细胞相关蛋白的表达量(n＝3)*：P＜0.05VS0ug/ml；
[0020]图8为体内移植瘤实验中各处理组瘤体对比(n＝6)；
[0021]图9为体内移植瘤实验裸鼠体重变化曲线(n＝6)；
[0022]图10为体内移植瘤实验各处理组瘤体积变化曲线(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.琴叶榕石油醚部位在制备预防或治疗肝癌药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述琴叶榕石油醚部位的有效质量浓度为30μg/ml~250μg/ml，优选为125μg/ml~250μg/ml。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述石油醚部位主要包含香豆素类化合物和三萜类物质。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述琴叶榕石油醚部位能够显著诱导肝癌细胞发生凋亡。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述肝癌细胞为HepG2或SMMC7721肝癌细胞，优选为He...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭伟文，戴卫波，胡显镜，王珠强，陈畅，庞晓妍，
申请(专利权)人：中山市中医院，
类型：发明
国别省市：