一种通过铁蛋白三维组装体实现对二元组分分级包埋并逐步释放的方法技术

本发明专利技术涉及一种通过铁蛋白三维组装体实现对二元组分分级包埋并逐步释放的方法，包括：a)将日本对虾铁蛋白的苏氨酸、甘氨酸和亮氨酸突变为组氨酸，得到铁蛋白突变体；b)通过pH变复性方法将组分1包埋到铁蛋白内部空腔；c)将组分2加入步骤b制备的蛋白溶液中，添加镍离子，调控铁蛋白形成三维组装体，并将组分2包埋到组装间隙中；d)通过步骤c制备的包埋二元组分的铁蛋白三维组装体，可通过加入EDTA和调节pH值逐步释放组分2和组分1。采用本法制备的铁蛋白三维组装体二元组分包埋体系能将两种分子有序的分隔装载到不同空间中，又可通过组装体解离和铁蛋白亚基解聚实现两种分子的分离与接触，拓宽了铁蛋白三维组装体的应用范围。围。围。

【技术实现步骤摘要】
一种通过铁蛋白三维组装体实现对二元组分分级包埋并逐步释放的方法


[0001]本专利技术涉及一种通过铁蛋白三维组装体实现对二元组分分级包埋并逐步释放的方法，制备所得的铁蛋白三维组装体—二元组分包埋体系能够实现二元组分的分级、分隔包埋并逐步释放。

技术介绍

[0002]广泛存在于动物、植物、微生物中的铁蛋白分子呈现出外径12nm，内径8nm的中空结构。通常在中性pH溶液中，天然的铁蛋白分子以24聚体的形式存在，金属离子和较小的分子可以通过其连通内外部环境的三重轴通道和四重轴通道进入铁蛋白内腔，而较大的分子若想进入铁蛋白内部空腔则需在铁蛋白的笼形结构上打开缺口。得益于铁蛋白本身固有的pH调控的可逆组装特性，即铁蛋白笼在pH≤2.0的极端酸性或pH≥11.0的碱性条件下解离为亚基，当溶液pH再次调整为中性时实现重组，使得对大分子的包埋也能顺利实现。因此，铁蛋白的内部空腔是装载外源分子的优良载体。
[0003]分子的自组装现象通常是指分子基元在一定条件下自发的从一个无序的状态转化成一个有序的状态，普遍存在于自然界中的各种生命活动中。铁蛋白分子的自本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通过铁蛋白三维组装体实现对二元组分分级包埋并逐步释放的方法，其特征在于：所述制备方法包括如下步骤：a)MF2H蛋白的制备：将日本对虾铁蛋白通道附近的苏氨酸158位、甘氨酸159位和亮氨酸160位突变为组氨酸，得到命名为MF2H的铁蛋白突变体，分离纯化后制备浓度为0.5mg/mL～2mg/mL的24聚体铁蛋白溶液；b)将MF2H蛋白溶液的pH调节至3～4，搅拌10～30min后在溶液中加入组分1并搅拌10～30min，组分1与MF2H的比例约为1:10～1:200，随后将溶液pH至调节至中性，于4～25℃放置10～24h；c)将组分2加入到步骤b制备的蛋白溶液中，组分2与MF2H的比例约为1:10～1:200，搅拌5～10min混合均匀后，加入镍离子继续搅拌5～10min后于4℃摇床反应12～48h，从而将组分2包埋到组装间隙中，MF2H与金属镍的比例为1:500～1:1500；d)通过步骤c制备的包埋二元组分的铁蛋白三维组装体，加入1mM～100mMEDTA螯合镍离子进而释放组分2，随后用1MHCl调节蛋白溶液的pH值至2～3.5，释放组分1，实现包埋二元组分的逐步释放。2.一种根据权利要求1所述的制备方法制备的铁蛋白三维组装体—二元组分包埋体系...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵广华，张晓荣，吕晨艳，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：