一种嗜水气单胞菌噬菌体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，公开了一种嗜水气单胞菌噬菌体及其应用。本发明专利技术以鲫鱼源嗜水气单胞菌为宿主菌，从医院污水中分离获得了一种对嗜水气单胞菌具有杀伤活性的新型噬菌体，本发明专利技术所述噬菌体体外具有很强的裂解活性，且对宿主菌形成的生物被膜具有较强的清除作用；同时，本发明专利技术首次将该噬菌体与芹菜素联合治疗并完全有效的保护嗜水气单胞菌对鲫鱼的感染，且与芹菜素联合治疗能够显著降低炎性细胞因子的表达，起到协同增效作用，为嗜水气单胞菌引起的感染提供一个全新有效的备用抗菌药物，为噬菌体制剂的研究提供了新的思路。为噬菌体制剂的研究提供了新的思路。

【技术实现步骤摘要】
一种嗜水气单胞菌噬菌体及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，更具体的说是涉及一种嗜水气单胞菌噬菌体及其应用。

技术介绍

[0002]嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,A.hydrophila)属于弧菌科，气单胞菌属，是一种革兰氏阴性短杆菌。它能导致鱼类、蛙类、鳖类等产生细菌败血症或出血病，作为鱼
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人
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家畜共患菌，除了感染鱼类外，还会引起人类发生败血病和急性胃肠炎。嗜水气单胞菌在自然环境中分布十分广泛，引起患病动物数量巨大；嗜水气单胞菌作为条件致病菌，往往在机体生存环境比较复杂，机体本身机能发生下降时，迅速侵入机体并且进行繁殖。嗜水气单胞菌能够分泌多种毒力因子，如外毒素、胞外蛋白酶和粘附因子等；近几年来给我国的水产养殖行业造成了巨大的经济损失。在水产养殖中，本病目前依靠抗生素及部分化学药物进行抗菌治疗，但是治疗效果一直不理想；反而，使嗜水气单胞菌的耐药性问题越来越严重，临床抗生素治疗往往难以达到预期的效果。地区区域性的耐药问题逐渐开始暴露，不同地区的菌株对于不同抗生素的敏感性不同，这些问题引起了许多专家和学者的关注。因此，开发能够有效治疗由这种病原菌引起感染的新型药物是现下的当务之急。
[0003]噬菌体(Bacteriophage)作为细菌的病毒，最早在1915年和1917年间被英国科学家Twort和法国科学家Felix d'Herelle发现。噬菌体能够以活细菌“为食”，在自然环境中分布极为广泛。不但存在于海洋、土壤和粪便等，甚至在动物及人体内也会存在相对应的噬菌体。噬菌体在地球上存在的数量十分的庞大，能够达到10
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种。噬菌体具有病毒的结构，主要由核酸和蛋白质衣壳组成。其核酸只有DNA或者RNA，由于噬菌体蛋白质衣壳的不同，形成了噬菌体的多样性。通常根据噬菌体形态及其特点，将噬菌体分为有尾噬菌体、无尾噬菌体和丝状噬菌体三种类型。国际病毒分类委员会发布的噬菌体分类原则为：根据噬菌体的形态和结构、宿主菌种类以及核酸类型，将其分为单链DNA病毒、双链DNA病毒、单链(+)RNA病毒、双链RNA病毒，共有4个分类单元，分别是目、科、属、种。第9次病毒分类报告清楚地将种确定为分类中的最小分类单元，增加3个目、14个科、8个亚科和60个属。
[0004]目前，已有多种针对嗜水气单胞菌的噬菌体，但是面对日益严重的耐药性的嗜水气单胞菌，是否能够清除耐药菌形成的生物被膜是衡量噬菌体抑制耐药性病菌的关键性因素。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种嗜水气单胞菌噬菌体，使其不仅能够对嗜水气单胞菌具有很强的裂解效率，而且能够对耐药菌形成的生物被膜具有较强的清除作用；
[0006]本专利技术的另外一个目的在于提供上述噬菌体在制备嗜水气单胞菌抑制剂、在制备治疗/预防由嗜水气单胞菌引起的疾病药物以及杀灭空间环境中嗜水气单胞菌中的应用；
[0007]本专利技术的另外一个目的在于提供以上述噬菌体为有效成分的防治嗜水气单胞菌的产品，
[0008]本专利技术的另外一个目的在于提供一种上述噬菌体和芹菜素组成的组合物，使该组合物具有协同增效的抑制嗜水气单胞菌的能力；
[0009]本专利技术的另外一个目的在于提供上述产品或组合物在制备嗜水气单胞菌抑制剂、在制备治疗/预防由嗜水气单胞菌引起的疾病药物以及在杀灭空间环境中嗜水气单胞菌中的应用。
[0010]为实现上述专利技术目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0011]一种嗜水气单胞菌噬菌体，其特征在于，保藏编号为CCTCC NO:M2021691。
[0012]本专利技术噬菌体以鲫鱼源高致病性嗜水气单胞菌为宿主菌，从吉林省长春市吉林大学中日联谊医院污水中分离获得，命名为PZY
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Ah。该噬菌体具有呈正二十面体的头部和较短尾部；噬菌体在双层LB琼脂培养基上可以形成透亮空斑，周围无晕环，边缘清晰规则，直径为0.5
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1mm。噬菌体PZY
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Ah的潜伏期为30min，一个裂解周期为70min，在30℃～60℃、pH5～pH10均能够保持良好的活性；PZY
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Ah的基因组为41403bp，主要结构蛋白分子质量为42 kDa。
[0013]结合培养特征及生理生化鉴定结果，根据国际病毒分类委员会(ICTV)2005年发表的《病毒分类—国际病毒分类委员会第八次报告》，PZY
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Ah属于有尾病毒目(Caudovirales)，短尾噬菌体科(Podoviridae)，并于2021年6月7日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2021691。
[0014]本专利技术所述噬菌体体外具有很强的裂解活性，且对宿主菌形成的生物被膜具有较强的清除作用；同时，本专利技术首次将该噬菌体与芹菜素联合治疗能够完全有效的保护嗜水气单胞菌对鲫鱼的感染，且与芹菜素联合治疗能够显著降低炎性细胞因子的表达，起到协同增效作用。
[0015]基于所述的有益效果，本专利技术提供所述噬菌体PZY
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Ah在如下任意一个和多个方面中的应用：
[0016]制备嗜水气单胞菌抑制剂、制备治疗或预防由嗜水气单胞菌引起的疾病的药物，以及杀灭空间环境中嗜水气单胞菌。
[0017]作为优选，所述由嗜水气单胞菌引起的疾病包括败血症、出血病和胃肠炎；所述空间环境包括水体、地面、淤泥、粪便、垫料和饲料等。
[0018]根据上述应用，本专利技术提供了一种防治嗜水气单胞菌的产品，包括保藏编号为CCTCC NO:M2021691的嗜水气单胞菌噬菌体PZY
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Ah。
[0019]作为优选，所述产品中的噬菌体PZY
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Ah可以配合中药或其活性成分组成组合物，比如芹菜素；所述产品可以是抑菌剂，也可以是药物，可以采用任何适宜的剂型，例如液体制剂、冻干制剂或口服固体制剂等。
[0020]本专利技术所述防治嗜水气单胞菌的产品同样可以应用于制备嗜水气单胞菌抑制剂、制备治疗或预防由嗜水气单胞菌引起的疾病的药物，以及杀灭空间环境中嗜水气单胞菌中。
[0021]在本专利技术具体实施方式中，所述产品是由所述噬菌体PZY
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Ah和芹菜素组成的组合物；在防治效果的试验中，所述芹菜素(Apigenin/Api)的浓度优选为0.3
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1.25mg/mL，噬菌
体PZY
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Ah浓度优选为(1
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10)
×
107PFU/mL。
[0022]在PZY
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Ah+Api组合物对鲫鱼感染模型的联合治疗保护率试验中，单独使用芹菜素的试验组与对照组相当，均无法有效保护鲫鱼，分别于第5天和第6天全部死亡；单独使用噬菌体PZY
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Ah的试验组保护率达到90％，而联合治疗组的保护率达到了100％，这充分表明了芹菜素和所述噬菌体PZY
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种嗜水气单胞菌噬菌体，其特征在于，保藏编号为CCTCC NO:M 2021691。2.保藏编号为CCTCC NO:M 2021691的嗜水气单胞菌噬菌体在制备嗜水气单胞菌抑制剂中的应用。3.保藏编号为CCTCC NO:M 2021691的嗜水气单胞菌噬菌体在制备治疗或预防由嗜水气单胞菌引起的疾病的药物中的应用。4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述由嗜水气单胞菌引起的疾病包括败血症、出血病和胃肠炎。5.保藏编号为CCTCC NO:2021691的嗜水气单胞菌噬菌体在杀灭空间环境中嗜水气单胞菌的应用。6.根据权利要求5所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张蕾，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：