本发明专利技术公开一类萘并γ-吡喃酮类化合物在制备抗幽门螺杆菌药物或预防保健品中的应用。本发明专利技术提供一种海洋真菌，名称为Aspergillus sp.DM94，保藏编号：CCTCC NO：M 20191003。本发明专利技术利用萘并γ-吡喃酮的极性差异从海洋真菌的发酵培养物中提取、分离获得一类萘并γ-吡喃酮化合物，该方法操作简便、提取得率高、产物纯度高，适合规模化生产。通过体外抗菌实验，表明萘并γ-吡喃酮类化合物具有较好的体外抗菌活性，针对幽门螺杆菌标准株G27以及左氧氟沙星和克拉霉素及甲硝唑多重耐药菌株HP159，其MIC值为4～64μg/mL，可用于制备抗菌药物及预防保健食品，具有良好的开发前景。具有良好的开发前景。具有良好的开发前景。
【技术实现步骤摘要】
萘并
γ-吡喃酮类化合物在制备抗幽门螺杆菌药物或预防保健品中的应用
[0001]本专利技术涉及海洋真菌代谢产物作为新的抗菌剂领域，具体涉及一类萘并γ-吡喃酮类化合物在制备抗幽门螺杆菌药物或预防保健品中的应用。
技术介绍
[0002]幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)是一种微厌氧的革兰氏阴性菌，常位于人胃底黏膜，感染全球约一半的人口。幽门螺杆菌感染常常导致消化系统疾病，如慢性胃炎和消化性溃疡等。研究表明，幽门螺杆菌感染与胃癌的发生、发展密切相关，根除幽门螺杆菌可以降低胃癌发生的风险。对于幽门螺杆菌的临床治疗，相关指南推荐的三联或四联疗法，包括质子泵抑制剂奥美拉唑和抗生素阿莫西林和克拉霉素等取得了很好的效果。但是，近年来临床上多药耐药菌株的出现使得抗生素功效大为降低，因此开发新的抗幽门螺杆菌药物，尤其是对其中多药耐药菌株有效的药物具有重要意义。
[0003]黑曲霉往往能够代谢出结构多样的次级代谢产物，还能代谢出丰富的酶类，因此经常被用于活性天然产物的生物转化/催化研究。有关黑曲霉应用的报道主要集中在利用其产生的酶进行植物药用成分的转化研究。如Hwang等报道利用黑曲霉Aspergillus niger A-T1将植物中的黄酮转化为具有抗菌活性的酚酸类成分[专利技术专利申请，2019，CN110093279 A 20190806]，Zhang等报道利用黑曲霉发酵能够提高金银花中木犀草苷的产量[专利技术专利申请，2017，CN 107022590 A 20170808]，Ou等报道采用黑曲霉Aspergillus niger ZJUT712固体发酵将牛蒡子苷转化为苷元[专利技术专利申请，2009，CN 101358173 A 20090204]。
[0004]萘并-γ-吡喃酮类化合物是曲霉属真菌尤其是其中的黑曲霉产生的一大类重要的芳香聚酮类化合物，包括萘并-γ-吡喃酮类、双萘并-γ-吡喃酮类、α-吡喃酮类、吡咯并吡喃酮类等。文献报道该类物质显示出良好的黄嘌呤氧化酶抑制活性，部分化合物对白色念珠菌、红色毛癣菌等常见致病菌具有良好的抗菌活性，其活性与酮康唑相关。同时文献还报道，该类物质具有自由基清除活性以及细胞毒活性等。但是，迄今还未检索到有文献报道来源于黑曲霉的萘并-γ-吡喃酮类化合物具有抗幽门螺杆菌活性的报道。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的在于提供一类萘并γ-吡喃酮类化合物在制备抗幽门螺杆菌药物或预防保健品中的应用。
[0006]本专利技术中的萘并γ-吡喃酮类化合物是从海洋曲霉属真菌DM94(Aspergillus sp.DM94)中提取获得具有药用价值的天然活性物质。
[0007]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0008]本专利技术提供一类萘并γ-吡喃酮类化合物或其药学上可接受的盐在制备抗幽门螺杆菌药物或预防保健品中的应用，所述萘并γ-吡喃酮类化合物的结构式如式(1)～(8)所
示：
[0009][0010]本专利技术提供了一种海洋真菌，命名为曲霉属真菌DM94(Aspergillus sp.DM94)，是海洋植物的附生真菌，保藏信息：保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏时间为2019年12月3日，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 20191003。
[0011]所述曲霉属真菌DM94(Aspergillus sp.DM94)菌株具有如下微生物学特征：
[0012]菌落在PDA培养基28℃培养5天的直径35～40mm，培养10天的直径65～70mm；菌落最初为白色，培养二至三天时菌落中心菌丝转为黑色，培养至第六天时整个菌落变为黑色，有白色边缘，质地棉絮状，无渗出液；菌落反面为浅黄色。分生孢子梗发生于气生菌丝，分生孢子头为球形。孢梗茎直径10～12.5μm，壁厚且平滑；顶囊球形，直径30～40μm，表面全部可育；产孢结构双层，梗基10～12
×
2～3μm；瓶梗6～8
×
2～3μm；分生孢子球型，直径3～4μm，壁粗糙。
[0013]所述的曲霉属真菌DM94(Aspergillus sp.DM94)具有如下分子生物学特征：ITS和18S序列如如SEQ ID NO.1和2所示。
[0014]所述的海洋真菌在制备抗幽门螺杆菌制剂中的应用。
[0015]本专利技术还提供了所述的萘并γ-吡喃酮类化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0016](1)将所述的曲霉属真菌DM94(Aspergillus sp.DM94)经活化后接种于发酵培养基中，进行发酵培养；
[0017](2)发酵培养结束后，加入有机溶剂进行浸提，分离得到浸提液，浸提液浓缩得到提取物，提取物经分离、纯化后，制得萘并γ-吡喃酮类化合物；
[0018]为了更好地模拟海洋环境，给微生物生长代谢提供足够的营养成分，优选的，步骤
(1)中所述的发酵培养基的配方为：
[0019]以玉米粒50g计，配方为：50g玉米粒，酵母浸粉0.86g，酒石酸铵2.37g，MgSO
4 0.17g，KH2PO
4 0.25g，海盐(2％)0.4g，ddH2O 20mL，PH自然；玉米粒需粉碎成颗粒物。
[0020]或者，以体积1L计，配方为：淀粉1～5g、麸皮10～20g、酵母膏3～15g、KH2PO
4 1～8g，MgSO4·
7H2O 0.1～0.8g，余量为海水；
[0021]或者，以体积1L计，配方为：马铃薯200～600g、蛋白胨2～10g、酵母膏1～5g、葡萄糖5～20g、余量为海水；初始pH值为6.0～7.0；
[0022]或者，以体积1L计，配方为：蔗糖10～40g、玉米粉5～20g、NaNO
3 1～4g、酵母膏1～4g、KH2PO
4 0.2～0.8g、MgSO4·
7H2O 0.2～1g、KCl 0.2～1g、FeSO
4 0.001～0.005g，余量为人工海水。
[0023]优选的，步骤(1)中所述的发酵培养的条件为20～30℃静态培养10～40天。所述静态培养方式即不进行摇瓶培养。
[0024]进一步的，所述的发酵培养的条件为22～26℃静态培养10～40天。更优选为25℃静态培养20天，该条件下所述萘并γ-吡喃酮类化合物的产量最高。
[0025]优选的，步骤(2)中所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮中的一种或两种。
[0026]优选的，步骤(2)中，对发酵物浸提的提取物经正相硅胶柱层析分离后，再进行反相硅胶柱层析/高效液相色谱分离。具体采用硅胶开放柱层析、ODS柱层析以及制备型HPLC等方法进行分离、纯化。
[0027]采用正相硅胶柱层析分离时，洗脱剂可采用石油醚、正己烷、乙酸乙酯、醇和水中的一种或多种混合物，对提取物进行梯度洗脱。
[0028]作为优选，所述分离、纯化包括：对提取物进行正相硅胶柱层析分离，依次以体积比1本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种海洋真菌，其特征在于：名称为曲霉属真菌DM94(Aspergillus sp.DM94)，于2019年12月3日保藏于中国.武汉.武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 20191003。2.权利要求1所述的海洋真菌在制备抗幽门螺杆菌制剂中的应用。3.萘并γ-吡喃酮类化合物或其药学上可接受的盐在制备抗幽门螺杆菌药物或预防保健品中的应用，其特征在于：所述萘并γ-吡喃酮类化合物的结构式如式(1)～(8)所示：4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的萘并γ-吡喃酮类化合物的制备方法，包括以下步骤：(1)将权利要求1中所述的曲霉属真菌DM94经活化后接种于发酵培养基中，进行发酵培养；(2)发酵培养结束后，加入有机溶剂进行浸提，分离得到浸提液，浸提液浓缩得到提取物，提取物经分离、纯化后，制得萘并γ-吡喃酮类化合物。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：步骤(1)中所述的发酵培养基的配方为：以玉米粒50g计，配方为：50g玉米粒，酵母浸粉0.86g，酒石酸铵2.37g，MgSO
4 0.17g，KH2PO
4 0.25g，2％的海盐0.4g，ddH2O 20mL，PH自然；玉米粒需粉碎成颗粒物；或者，以体积1L计，配方为：淀粉1～5g、麸皮10～20g、酵母膏3～15g、KH2PO
4 1～8g，MgSO4·
7H2O 0.1～0.8g，余量为海水；或者，以体积1L计，配方为：马铃薯200～60...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐金山，洪葵，毕洪凯，姚新生，董治统，贾佳，苟小霜，薛雅馨，丁文娟，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：
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