一种用于分析植物启动子表达特异性的载体，其制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及基因工程领域，具体讲，涉及一种用于分析植物启动子表达特异性的载体，其制备方法及应用。该载体的T

【技术实现步骤摘要】
一种用于分析植物启动子表达特异性的载体，其制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及基因工程领域，具体讲，涉及一种用于分析植物启动子表达特异性的载体，其制备方法及应用。

技术介绍

[0002]利用转基因技术在植物中研究基因功能和培育生物安全的转基因作物需要准确的表达目的基因，但实际上独立的转基因株系间常常会表现出不同的基因表达水平及遗传性状(Hansen&Wright,1999)。这种无意间引入的与目的基因无关的影响主要来自两个方面：一是转基因过程中T
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DNA插入位置的不同引起的转基因序列与外部旁侧基因序列之间的互作，称为位置效应；二是转基因载体本身携带的选择标记基因及驱动选择标记基因表达的调控元件对转基因表达的影响，称为多向效性(Miki et al.,2009)。
[0003]解决位置效应的有效方法是开发定点插入的转基因技术，随着CRISPR/Cas9基因编辑技术的迅速发展，定向敲除基因变成了容易掌握的常规实验手段，定向敲入基因也有不少成功的报道(Li et al.,2016)。但相比定向敲除，定本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于分析植物启动子表达特异性的载体，其特征在于，所述载体的T
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DNA区由5
’
端向3
’
端依次包含一个愈伤组织特异启动子驱动的筛选标记基因表达盒和一个带有多克隆位点的报告基因表达盒；所述愈伤组织特异启动子驱动的筛选标记基因表达盒包括一个愈伤组织特异启动子、筛选标记基因编码序列和终止子；所述愈伤组织特异启动子优选为LOC_Os10g14020基因启动子。2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述愈伤组织特异启动子驱动的筛选标记基因表达盒由5
’
端向3
’
端依次包含愈伤组织特异启动子、筛选标记基因编码序列和终止子；优选的，所述愈伤组织特异启动子的两端均设置有AscI酶切位点。3.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述愈伤组织特异启动子驱动的潮霉素基因表达盒由5
’
端向3
’
端依次包含终止子、筛选标记基因编码序列和愈伤组织特异启动子，所述愈伤组织特异启动子反向靠近所述报告基因编码序列；优选的，愈伤组织特异启动子的两端均设置有AscI酶切位点。4.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述报告基因选自糖苷水解酶基因、荧光素酶基因或荧光蛋白基因；所述糖苷水解酶基因优选β
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葡萄糖苷酸酶基因，所述荧光素酶基因优选荧火虫荧光素酶基因，所述荧光蛋白基因优选绿色荧光蛋白基因；所述筛选标记基...

【专利技术属性】
技术研发人员：周洁，王栩鸣，杨勇，余初浪，程晔，羊健，严成其，陈剑平，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：