一种原飞燕草素B9没食子酸酯的化学合成方法技术

本发明专利技术的目的是提供一种原飞燕草素B9没食子酸酯的化学合成方法，以杨梅叶原花色素为原料，利用EGCG作为亲核试剂，在盐酸催化作用下攻击杨梅叶原花色素的结构单元EGCG和EGC的C4位点，合成原飞燕草素B9没食子酸酯。相较于从茶叶、杨梅叶等材料中提取、分离原飞燕草素B9没食子酸酯，本发明专利技术提供的方法所制得的原飞燕草素B9没食子酸酯纯度和得率均较高，可直接应用于食品领域中作为营养增强剂和天然抗氧化剂。化剂。

【技术实现步骤摘要】
一种原飞燕草素B9没食子酸酯的化学合成方法


[0001]本专利技术涉及植物功能组分领域，具体涉及一种原飞燕草素B9没食子酸酯的制备方法。

技术介绍

[0002]原花色素是一类以黄烷
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醇为结构单元的聚合型多酚，广泛存在植物中，是继木质素后的第二大类膳食多酚。其主要结构单元是(表)儿茶素、(表)阿福豆素、(表)没食子儿茶素(E)GC及其没食子酸酯。大量研究表明原花色素具有抗氧化、降血糖、减肥等多种有益生物活性。而这些功能与其结构密切相关，尤其是结构单元种类和聚合度。首先，原花色素聚合度决定了其生物利用率，随着聚合度增加，生物利用率降低，聚合度大于4的原花色素完全不被吸收。原花色素结构单元酚羟基密度与其生物活性密切相关。已有研究表明，相比没有棓酰基的原花色素，结构单元中含有棓酰基的原花色素因其更高的酚羟基密度而表现更强的生物活性。其中，以(E)GC及其没食子酸酯(E)GCG为结构单元的原飞燕草素是活性较强的原花色素。
[0003]目前研究较多的原花色素以(表)儿茶素、(表)阿福豆素及其没食子酸酯为结构单元，由于其来源丰富，以其二聚体为材料的构效关系研究较为清晰；而关于原飞燕草素的研究均基于原花色素混合物。来源于杨梅叶的原花色素具有典型的原飞燕草素结构，主要结构单元为EGC和EGCG，体外抗氧化活性极强，但是由于其聚合度高，大部分聚合度分布在9.5到26.7之间，生物利用率极低，体内活性差，且作用机制模糊。低聚合度原飞燕草素的含量极低，分离纯化困难大，导致其构效关系研究停滞。
专利技术内容
[0004]本专利技术的目的是提供一种原飞燕草素B9没食子酸酯的化学合成方法，本专利技术以杨梅叶原花色素为原料，以EGCG为亲核底物，在酸催化作用下合成两种二聚原飞燕草素没食子酸酯(原飞燕草素B
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3'
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没食子酸酯和原飞燕草素B
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3,3'
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双没食子酸酯)，提高其组分含量，降低进一步纯化难度。所得二聚原飞燕草素没食子酸酯是以EGCG为结构单元的B型原花色素二聚体，不仅提高原飞燕草素型原花色素生物利用率，还为其构效关系研究提供高纯度材料。
[0005]本专利技术采用的技术方案具体为：
[0006]一种原飞燕草素B9没食子酸酯的化学合成方法，具体为：
[0007]分别配置浓度为10
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400mg/mL杨梅叶原花色素的含盐酸溶液和10
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400mg/mL表没食子儿茶素没食子酸酯的含盐酸溶液；其中，两种含盐酸溶液的盐酸浓度均为0.1
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1.0mol/L；将盐酸浓度相同的杨梅叶原花色素和EGCG的含盐酸溶液按体积比1:2
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2:1混合后，在20
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60℃条件下反应40min，经干燥、分离纯化后获得原飞燕草素B9没食子酸酯，所述原飞燕草素B9没食子酸酯包括原飞燕草素B
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3'
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没食子酸酯和原飞燕草素B
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3,3'
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双没食子酸酯。
[0008]其中，包括原飞燕草素B
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3'
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没食子酸酯和原飞燕草素B
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3,3'
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双没食子酸酯，具
有如下结构式：
[0009][0010]所述杨梅叶原花色素提取、纯化方法参照专利《一种分离制备杨梅叶原花色素的方法》，制得的杨梅叶原花色素纯度为86.4％；EGCG为市售HPLC级试剂，纯度≥98％。
[0011]作为一优选方案，干燥的方法具体为：反应40min后的反应液在40℃下旋转蒸发，去除甲醇和少量水，获得反应粗产物干粉；
[0012]作为一优选方案，利用岛津LC
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20型半制备液相色谱对获得的反应粗产物进行分离纯化，获得原飞燕草素B9没食子酸酯。
[0013]纯化采用S系列X5H制备柱(10mm x 250mm，5μm)，流动相A为含0.5vol％乙酸的乙腈，流动相B为超纯水。将反应粗产物溶解于体积比为88：12的流动相A、B混合液，配制成20mg/mL的溶液。进样2mL后，进行流动相洗脱纯化，流动相流速为5mL/min，洗脱梯度为：0
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10min，12
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27vol％B，10
‑
20min，60vol％B，20
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26min 12vol％B。设置检测波长为280nm，根据液相图谱，收集5.5
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6.0min的流出液，将流出液于40℃条件下旋转蒸发去除乙腈，冷冻干燥后获得原飞燕草素B9没食子酸酯纯化物。
[0014]进一步地，所述分离纯化还包括第二次纯化：
[0015]第二次纯化采用Shim
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pack GIST C18(20mm x 250mm，5μm)，流动相A为超纯水，流动相B为98vol％乙腈(含0.05vol％磷酸)。将原飞燕草素B9没食子酸酯纯化物溶解于体积比为80：20的流动相A、B混合液，配制成50mg/mL的溶液。进样2mL后，进行流动相洗脱纯化，流动相流速为15mL/min，洗脱梯度为：0
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5min，20
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40vol％B；5
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15min，40vol％B。设置检测波长为280nm，根据液相图谱，在不同出峰时间分别收集流出液，将流出液于40℃条件下旋转蒸发去除乙腈，冷冻干燥后分别获得原飞燕草素B
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3'
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没食子酸酯和原飞燕草素B
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3,3'
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双没食子酸酯。
[0016]本专利技术以杨梅叶原花色素为原料，利用EGCG作为亲核试剂，在盐酸催化作用下攻
击杨梅叶原花色素的结构单元EGCG和EGC的C4位点，合成原飞燕草素B9没食子酸酯。相较于从茶叶、杨梅叶等材料中提取、分离原飞燕草素B9没食子酸酯，本专利技术提供的方法所制得的原飞燕草素B9没食子酸酯纯度和得率均较高。可直接应用于食品领域中作为营养增强剂和天然抗氧化剂。
附图说明
[0017]图1为实施例1中原飞燕草素B9没食子酸酯合成HPLC分析图谱；
[0018]图2为实施例2中原飞燕草素B9没食子酸酯合成HPLC分析图谱；
[0019]图3为实施例3中原飞燕草素B9没食子酸酯合成HPLC分析图谱；
[0020]图4为实施例4中原飞燕草素B9没食子酸酯合成HPLC分析图谱；
[0021]图5为实施例5中原飞燕草素B9没食子酸酯合成HPLC分析图谱；
[0022]图6为实施例6中原飞燕草素B9没食子酸酯合成HPLC分析图谱；
[0023]图7为实施例1制备的原飞燕草素B
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3'
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没食子酸酯HPLC分析图谱，纯度为93.2％
[0024]图8为实施例1制备的原飞燕草素B
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种原飞燕草素B9没食子酸酯的化学合成方法，其特征在于，具体为：分别配置浓度为10
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400mg/mL杨梅叶原花色素的含盐酸溶液和10
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400mg/mL表没食子儿茶素没食子酸酯的含盐酸溶液；其中，两种含盐酸溶液的盐酸浓度均为0.1
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1.0mol/L；将盐酸浓度相同的杨梅叶原花色素和EGCG的含盐酸溶液按体积比1:2
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2:1混合后，在20
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60℃条件下反应40min，经干燥、分离纯化后获得原飞燕草素B9没食子酸酯，所述原飞燕草素B9没食子酸酯包括原飞燕草素B
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3'
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没食子酸酯和原飞燕草素B
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3,3'
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双没食子酸酯。2.根据权利要求1所述的化学合成方法，其特征在于，所述配置浓度为10
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400mg/mL杨梅叶原花色素的含盐酸溶液和10
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400mg/mL表没食子儿茶素没食子酸酯的含盐酸溶液采用的溶剂为甲醇、乙醇等。3.根据权利要求1所述的化学合成方法，其特征在于，所述杨梅叶原花色素纯度为86.4％；EGCG纯度≥98％。4.根据权利要求1所述的化学合成方法，其特征在于，干燥的方法具体为：将反应40min后的反应液在40℃下旋转蒸发，去除甲醇和少量水，获得反应粗产物干粉。5.根据权利要求1所述的化学合成方法，其特征在于，所述分离纯化的方法具体为：采用S系列X5H制备柱，流动相A为含0.5vol％乙酸的乙腈，流动相B为超纯水。将反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈士国，徐新雷，潘海波，叶兴乾，王艺，程焕，陈健乐，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：