基于纳米颗粒的流感病毒疫苗及其用途制造技术

本发明专利技术提供了引发针对来自广泛流感病毒的血凝素(HA)蛋白的免疫反应的纳米颗粒和包含这些纳米颗粒的疫苗。纳米颗粒由蛋白质自组装而成，其中至少一种蛋白质与流感病毒HA蛋白的免疫原性部分相连。所述免疫原性部分在纳米颗粒表面表达，使得纳米颗粒可用于为受试者接种流感病毒疫苗。种流感病毒疫苗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于纳米颗粒的流感病毒疫苗及其用途
[0001]交叉引用
[0002]本申请要求2019年2月8日提交的序列号为62/803218的美国临时专利申请的优先权，并通过引用将其全部内容合并与此。
[0003]序列表引用
[0004]本申请包含文件名为“19
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PCT_Sequence_Listing_ST25.txt”的电子文本文件形式的序列表，大小为864kb，创建于2020年2月6日。根据37CFR 1.52(e)(5)的规定，该电子文件中包含的信息通过引用将其全部内容合并与此。

技术介绍

[0005]通过接种流感病毒疫苗诱导的保护性免疫反应主要针对病毒血凝素(HA)蛋白，它是病毒表面负责病毒与宿主细胞受体的相互作用的糖蛋白。病毒表面的HA蛋白是HA蛋白单体的三聚体，被酶切产生氨基末端HA1和羧基末端HA2多肽。球状头部仅由HA1多肽的主要部分组成，而将HA蛋白锚定到病毒脂质膜中的茎由HA2和HA1的一部分组成。HA蛋白的球状头部包括两个结构域：受体结合结构域(RBD)和残留的酯酶结构域(ve本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】NO:32、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:347、SEQ ID NO:348和SEQ ID NO:349所示的序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同，或100％相同的氨基酸序列组成；并且第二种蛋白质包含或由与SEQ ID NO:89所示序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列组成；其中多个相同的第一蛋白质非共价相互作用形成第一组件；并且，其中多个第二蛋白质非共价相互作用形成第二组件。10.根据权利要求1～8中任一项所述的纳米颗粒，其中所述第一蛋白质包含或由与选自SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:229SEQ ID NO:231、SEQ ID NO:233、SEQ ID NO:235、SEQ ID NO:237、SEQ ID NO:239、SEQ ID NO:241和SEQ ID NO:243所示的序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同，或100％相同的氨基酸序列组成；并且，第二种蛋白质包含或由与选自SEQ ID NO:245、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:255和SEQ ID NO:257所示序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列组成；其中多个相同的第一蛋白质相互作用形成第一组件；并且，其中多个相同的第二蛋白质相互作用形成第二组件。11.根据权利要求1～8中任一项所述的纳米颗粒，其中所述第一蛋白质和所述第二蛋白质包含或分别由与选自表2中第一和第二蛋白质配对的第一和第二蛋白质的序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同，或100％相同的氨基酸序列组成。12.根据权利要求1～11中任一项所述的纳米颗粒，其中所述第二蛋白质通过接头与流感病毒HA蛋白的免疫原性部分连接。13.根据权利要求1～12中任一项所述的纳米颗粒，其中所述HA蛋白的免疫原性部分来自甲型、乙型或丙型流感病毒的HA蛋白。14.根据权利要求1～13中任一项所述的纳米颗粒，其中所述HA蛋白的免疫原性部分来自H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、H16、H17或H18流感病毒的HA蛋白。15.根据权利要求1～14中任一项所述的纳米颗粒，其中所述HA蛋白的免疫原性部分包含或由至少6个、8个、10个、25个、50个、75个、100个、50个、200个、250个、300个、350个、400个、450个或500个或更多个与流感病毒HA蛋白的胞外域的序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％的连续氨基酸残基组成。16.根据权利要求15所述的纳米颗粒，其中所述流感病毒选自A/NewCaledonia/20/1999(1999NC,H1)、A/California/04/2009(2009CA,H1)、A/HongKong/1/1968(1968HK,H3)、A/Michigan/45/2015(H1N1)、A/HongKong/4801/2014(H3N2)、A/HongKong/33982/2009(H9N2)、A/Singapore/1/1957(H2N2)、A/Singapore/INFIMH
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0019/2016、A/Indonesia/5/2005(H5N1)、A/Taiwan/2/2013(H6N1)、A/Anhui/1/2013(H7N9)、A/Jiangxi
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Donghu/346/2013(H10N8)、A/USSR/90/1977(H1N1)、A/BrevigMission/1/1918(H1N1)、A/Brisbane/10/2007(2007Bris,H3)、A/Perth/16/2009(2009Per,H3)、A/Brisbane/59/2007(2007Bris,
H1)、B/Brisbane/60/2008、B/Phuket/3073/2013、B/Colorado/06/2017和B/Florida/4/2006(2006Flo,B)。17.根据权利要求1～16中任一项所述的纳米颗粒，其中所述HA蛋白的免疫原性部分包含或由至少6个、8个、10个、25个、50个、75个、100个、50个、200个、250个、300个、350个、400个、450个或500个或更多个与SEQ ID NO:1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34和37所示氨基酸序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同，或100％相同的连续氨基酸残基组成。18.权利要求1～17中任一项所述的纳米颗粒，其中免疫原性部分来自流感病毒HA蛋白的头部区域。19.根据权利要求1～18中任一项所述的纳米颗粒，其中所述免疫原性部分包含或由至少6、8、10、25、50、75、100或200个或更多个连续氨基酸残基组成，所述氨基酸残基来自SEQ ID NO:1所示的氨基酸残基59
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291对应的氨基酸序列。20.根据权利要求1～19中任一项所述的纳米颗粒，其中所述免疫原性部分包含或由至少6、8、10、25、50、75、100或200个或更多个连续氨基酸残基组成，所述连续氨基酸残基来自与选自SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35和38所示的氨基酸序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列。21.权利要求1～17中任一项所述的纳米颗粒，其中免疫原性部分来自流感病毒HA蛋白的茎区。22.根据权利要求21所述的纳米颗粒，其中所述HA蛋白的免疫原性部分包含或由至少6个、8个、10个、25个或50个或更多个连续的氨基酸残基组成，所述氨基酸残基来自与SEQ ID NO:1的氨基酸残基1
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58、SEQ ID NO:4的氨基酸残基1
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58、SEQ ID NO:7的氨基酸残基1
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67、SEQ ID NO:10的氨基酸残基1
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68、SEQ ID NO:13的氨基酸残基1
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68、SEQ ID NO:16的氨基酸残基1
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5、SEQ ID NO:19的氨基酸残基1
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57、SEQ ID NO:22的氨基酸残基1
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57、SEQ ID NO:25的氨基酸残基1
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59、SEQ ID NO:28的氨基酸残基1
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59、SEQ ID NO:31的氨基酸残基1
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58、SEQ ID NO:34的氨基酸残基1
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67或SEQ ID NO:37的氨基酸残基1
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68至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同，或100％相同的序列。23.根据权利要求21所述的纳米颗粒，其中所述HA蛋白的免疫原性部分包含或由至少6个、8个、10个、25个、50个、75个、100个或200个或更多个连续氨基酸残基组成，所述氨基酸残基来自与SEQ ID NO:1所示的氨基酸残基292
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517、SEQ ID NO:4的氨基酸残基293
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515、SEQ ID NO:7的氨基酸残基294
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517、SEQ ID NO:10的氨基酸残基311
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539、SEQ ID NO:13的氨基酸残基310
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538、SEQ ID NO:16的氨基酸残基289
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518、SEQ ID NO:19的氨基酸残基291
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520、SEQ ID NO:22的氨基酸残基294
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523、SEQ ID NO:25的氨基酸残基287
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516、SEQ ID NO:28的氨基酸残基287
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516、SEQ ID NO:31的氨基酸残基288
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518、SEQ ID NO:34的氨基酸残基294
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525或SEQ ID NO:37的氨基酸残基308
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537至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的序列。24.根据权利要求1～14中任一项所述的纳米颗粒，其中所述免疫原性部分包含流感病毒稳定的HA蛋白茎或由流感病毒稳定的HA蛋白茎组成。25.根据权利要求24所述的纳米颗粒，其中所述稳定的蛋白茎包含替代所述头部区域的接头。
26.根据权利要求24或25所述的纳米颗粒，其中所述稳定的蛋白茎包含与SEQ ID NO:1所示的氨基酸1
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58至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列，所述氨基酸序列直接或通过肽接头共价连接到与SEQ ID NO:1所示的氨基酸292
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517至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列上，使得稳定的蛋白茎缺少对应于如SEQ ID NO:2所示氨基酸59
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291的氨基酸序列。27.根据权利要求24～26中任一项所述的纳米颗粒，其中在稳定的蛋白茎中的氨基酸残基是除赖氨酸之外的氨基酸残基，对应于如SEQ ID NO：3、6、9、18、21、24、27、30、33或36所示的任一序列K1的位置处的氨基酸残基。28.根据权利要求24～27中任一项所述的纳米颗粒，其中在稳定的蛋白茎中的氨基酸残基是除谷氨酰胺之外的氨基酸残基，对应于如SEQ ID NO：3、6、9、18、21、24、27、30、33或36所示的任一序列E53的位置处的氨基酸残基。29.根据权利要求24～28中任一项所述的纳米颗粒，其中对应于SEQ ID NO：3、6、9、18、21、24、27、30、33或36中任一序列的K1和E53的两个氨基酸残基可以分别是选自甲硫氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和谷氨酰胺的氨基酸残基。30.根据权利要求24～29中任一项所述的纳米颗粒，其中在折叠的蛋白质中，对应于SEQ ID NO：3、6、9、18、21、24、27、30、33或36中任一序列的K1和E53的氨基酸残基被增加它们之间相互作用强度的氨基酸残基取代。31.根据权利要求24～30中任一项所述的纳米颗粒，其中SEQ ID NO:1所示的稳定的蛋白茎中对应于M402的氨基酸残基直接或通过肽接头共价连接到SEQ ID NO:1所示的稳定的蛋白茎中对应于T436的氨基酸残基，使得稳定的蛋白茎缺少SEQ ID NO:1所示的对应于403
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435的氨基酸残基序列。32.根据权利要求1～31中任一项所述的纳米颗粒，其中所述免疫原性部分包括或由表1中列出的任何流感病毒HA蛋白组成。33.根据权利要求1
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32中任一项所述的纳米颗粒，其中所述免疫原性部分包含或由与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:325、SEQ ID NO:326、SEQ ID NO:327、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:329、SEQ ID NO:330、SEQ ID NO:331、SEQ ID NO:332、SEQ ID NO:333、SEQ ID NO:334、SEQ ID NO:335和SEQ ID NO:336的序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列组成。34.根据权利要求1～32中任一项所述的纳米颗粒，其中所述融合蛋白包含或由与选自SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:129、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:
167、SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:177、SEQ ID NO:179、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:185、SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:189、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:193、SEQ ID NO:195、SEQ ID NO:197、SEQ ID NO:199、SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:259、SEQ ID NO:261、SEQ ID NO:263和SEQ ID NO:265所示的序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列组成，其中融合蛋白非共价相互作用形成第二组件。35.根据权利要求1～14中任一项所述的纳米颗粒，其中每个第一蛋白质包含或由与选自SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:347、SEQ ID NO:348和SEQ ID NO:349所述序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列组成；其中每个第二蛋白质包含或由与SEQ ID NO:89所示序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列组成；并且，其中免疫原性部分包含流感病毒HA蛋白胞外域或由其组成。36.根据权利要求35所述的纳米颗粒，其中所述融合蛋白包含或由与选自SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:129、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:177、SEQ ID NO:179、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:185和SEQ ID NO:187所示序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列组成。37.根据权利要求1～14中任一项所述的纳米颗粒，其中每个第一蛋白质包含或由与选自SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:231、SEQ ID NO:233、SEQ ID NO:235、SEQ ID NO:237、SEQ ID NO:239、SEQ ID NO:241和SEQ ID NO:243所示的序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列组成；其中每个第二蛋白质包含或由与选自SEQ ID NO:245、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:255和SEQ ID NO:25所示序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列组成；并且，其中免疫原性部分包含流感病毒HA蛋白胞外域或由其组成。38.根据权利要求37所述的纳米颗粒，其中所述融合蛋白可以包含或由与选自SEQ ID NO:259、SEQ ID NO:261、SEQ ID NO:263、SEQ ID NO:265所示序列至少80％、85％、90％、
91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列组成。39.根据权利要求1～14中任一项所述的纳米颗粒，其中每个第一蛋白质包含或由与选自SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:347、SEQ ID NO:348和SEQ ID NO:349所示序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列组成；其中每个第二蛋白质包含或由与SEQ ID NO:89所示序列至少80％、85％、90％、91％、95％、96％、97％、98％或99％相同或100％相同的氨基酸序列组成；并且，其中免疫原性部分包含或由流感病毒HA稳定的蛋白茎组成。40.根据权利要求39所述的纳米颗粒，其中所述融合蛋白包含或由与选自SEQ ID NO:189、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:193、SEQ ID NO:195、SEQ ID NO:197、SEQ ID NO:199、SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:221、SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：兼清优，巴尼，
申请(专利权)人：华盛顿大学，
类型：发明
国别省市：