一种小规模化生产富硒荷叶离褶伞菌丝体的方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种小规模化生产富硒荷叶离褶伞菌丝体的方法及应用，涉及微生物发酵技术领域。本发明专利技术是利用蛋白水解液、玉米淀粉水解液、葡萄糖作为发酵培养基，并在发酵培养基中接种荷叶离褶伞种子培养液，在培养过程中加入灭菌Na2SeO3溶液，并调整培养参数，从而获得富硒量更高的荷叶离褶伞菌丝体。本发明专利技术大大提高菌丝体产量，且富硒荷叶离褶伞菌丝体可以在20L生物发酵罐内进行连续化生产，产品批次稳定高。本发明专利技术所生产的富硒荷叶离褶伞菌丝体可以制备降血脂、降血糖及抗氧化的功能性食品、药物或化妆品。药物或化妆品。药物或化妆品。

【技术实现步骤摘要】
一种小规模化生产富硒荷叶离褶伞菌丝体的方法及应用


[0001]本专利技术属于生物发酵
，具体涉及一种小规模化生产富硒荷叶离褶伞菌丝体的方法及应用。

技术介绍

[0002]硒作为人体必需的微量元素，能激发人体免疫球蛋白及抗体的产生，具有抗衰老作用。荷叶离褶伞为离褶伞属真菌，具有很高的营养价值。荷叶离褶伞因具有较强的富硒能力，使无机硒安全有效地转化为有机硒多糖和硒蛋白，大大提高食用菌的营养价值和应用范围。
[0003]目前对荷叶离褶伞进行人工富硒培养的规模化技术还不很成熟，如何实现规模化生产富硒荷叶离褶伞菌丝体的方法是目前行业一直不断探索的重要课题。

技术实现思路

[0004]为了克服上述问题，本专利技术提供了一种小规模化生产富硒荷叶离褶伞菌丝体的方法，该方法可以在20L发酵罐中生产富硒荷叶离褶伞菌丝体，且制备过程操作简便且所获得的菌丝体批次稳定性高，具有较高的生物活性。
[0005]本专利技术小规模化生产富硒荷叶离褶伞菌丝体的方法，包括以下步骤：
[0006]S1、制备荷叶离褶伞种子培养液：在250mL三角瓶中，加入100mL的加富PDA培养基，接入活化的荷叶离褶伞菌种，摇床培养4
‑
8d，得到荷叶离褶伞种子培养液，置于4℃冰箱备用；
[0007]S2、制备发酵培养基，所述发酵培养基是由蛋白水解液、玉米淀粉水解液、和葡萄糖经灭菌后制备而成；
[0008]S3、接种荷叶离褶伞种子：在所述发酵培养基中接种步骤S1所述荷叶离褶伞种子培养液，接种量为5.5～10％；通入无菌空气，并在罐内压强为0.02MPa的条件下进行无菌培养；
[0009]S4、无菌培养第3d，在发酵培养基中加入灭菌Na2SeO3溶液，使每1mL发酵培养基中含有4μg Na2SeO3，继续发酵5
‑
10d；
[0010]S5、发酵结束后，将发酵液经300目滤网过滤，蒸馏水反复洗涤菌球后进行冷冻干燥，称重即得富硒荷叶离褶伞菌丝体菌丝体。
[0011]优选地，本专利技术步骤S1所述的摇床培养时间为5d。
[0012]优选地，所述蛋白水解液的制备方法如下：称取黄豆100g，浸泡过夜后打浆，将其煮沸并降温处理，再加入5wt％的蛋白酶，并在40℃恒温水浴锅中水浴5h，制得蛋白水解液。
[0013]更优选地，所述将煮沸后的黄豆浆降温至40℃后再加入蛋白酶。
[0014]优选地，所述玉米淀粉水解液的制备方法如下：称取玉米面600g，并加入65℃热水6000g，再加入5wt％的淀粉酶，置于65℃恒温水浴锅中混合至遇碘液无色为止，得到玉米淀粉水解液。
[0015]优选地，步骤S2所述的灭菌温度为121℃，灭菌时间为40min。
[0016]优选地，本专利技术步骤S5所述的干燥温度为
‑
25℃～15℃。
[0017]本专利技术的另一目的是提供了一种抗氧化能力强且具有降血脂、降血糖的富硒荷叶离褶伞菌丝体，并利用其制成降血脂、降血糖及抗氧化的功能性食品，药物或者化妆品。
[0018]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0019]1、本专利技术通过调整发酵培养基组成以及荷叶离褶伞种子培养液，提高了菌丝的生物活性，提高了生长速率；
[0020]2、本专利技术在发酵第3d加入无机硒，延迟菌丝体进入衰亡期的时间，产量显著提高；
[0021]3、本专利技术利用荷叶离褶伞菌丝体能将无机硒转化为有机硒，提高人们对硒的摄入的安全性，同时可以提高荷叶离褶伞的利用附加值，同时该生产方式可以实现小规模化量产，采用的发酵装置为20L发酵罐，具有广阔的应用前景。
附图说明
[0022]图1为荷叶离褶伞菌丝体悬液对α
‑
葡萄糖苷酶活性的影响；
[0023]图2为荷叶离褶伞菌丝体多糖对α
‑
葡萄糖苷酶活性的影响；
[0024]图3为荷叶离褶伞菌丝体蛋白对α
‑
葡萄糖苷酶活性的影响；
[0025]图4为荷叶离褶伞菌丝体中可溶性多糖对羟自由基的清除能力；
[0026]图5为荷叶离褶伞菌丝体中可溶性多糖对DPPH自由基的清除能力；
[0027]图6为荷叶离褶伞菌丝体中可溶性多糖对ABTS自由基的清除能力；
[0028]图7为荷叶离褶伞菌丝体中可溶性多糖的还原能力。
具体实施方式
[0029]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。
[0030]实施例1
[0031]一种小规模化生产富硒荷叶离褶伞菌丝体的方法，包括以下步骤：
[0032]S1、制备荷叶离褶伞种子培养液：在250mL三角瓶中，加入100mL的加富PDA培养基，接入活化的荷叶离褶伞菌种，摇床培养5d，得到荷叶离褶伞种子培养液，置于4℃冰箱备用；
[0033]S2、制备蛋白水解液：称取黄豆100g，浸泡过夜后打浆，将其煮沸并降温至40℃，再加入5％的蛋白酶，并在40℃恒温水浴锅中水浴5h，制得蛋白水解液；
[0034]S3、制备玉米淀粉水解液：称取玉米面600g，并加入65℃热水6000g，再加入5％的淀粉酶，置于65℃恒温水浴锅中混合至遇碘液无色为止，得到玉米淀粉水解液；
[0035]S4、混合制成发酵培养基，将步骤S2所述蛋白水解液和步骤S3所述玉米淀粉水解液用300目的筛过滤后混合，再加入葡萄糖200g，并在121℃下灭菌40min，冷却后得到发酵培养基；
[0036]S5、接种荷叶离褶伞种子：在所述发酵培养基中接种步骤S1所述荷叶离褶伞种子培养液，接种量为8.5％；通入无菌空气，并在罐内压强为0.02MPa的条件下进行无菌培养；
[0037]S6、无菌培养第3d，在发酵培养基中加入无菌的Na2SeO3溶液，使1mL发酵培养基中含有4μg Na2SeO3，再继续发酵5d；
[0038]S7、发酵结束后，将发酵液经300目滤网过滤，蒸馏水反复洗涤菌球后，置于冷冻干
燥机中在
‑
25℃进行干燥，称重即得富硒荷叶离褶伞菌丝体菌丝体。
[0039]经检测，发酵结束后本专利技术菌丝体干重量和富硒量达到最大值分别为8.154g/L和234.785μg/100mL，空白对照组(未加入Na2SeO3)菌丝体干重仅为4.758g/L。本专利技术菌丝体中多糖的含量为11.6mg/g，蛋白的提取量为13.5mg。
[0040]性能实验(以下实验仅是调整实施例1中加硒时间，其他参数均未作出调整)
[0041]1、本专利技术在发酵过程中不同加硒时间所获得的菌丝体进行体外吸附胆酸盐试验，具体实验结果如表1所示。
[0042]表1
[0043][0044][0045]注：与空白组对照，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01
[0046]从表1中可以看出，在第三天加入富硒所获得的菌丝体体外吸附胆酸盐的能力最优，其降胆酸盐能力较好。
[0047]2、本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小规模化生产富硒荷叶离褶伞菌丝体的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、制备荷叶离褶伞种子培养液：在250mL三角瓶中，加入100mL的加富PDA培养基，接入活化的荷叶离褶伞菌种，摇床培养4
‑
8d，得到荷叶离褶伞种子培养液，置于4℃冰箱备用；S2、制备发酵培养基，所述发酵培养基是由蛋白水解液、玉米淀粉水解液、和葡萄糖经灭菌后制备而成；S3、接种荷叶离褶伞种子：在所述发酵培养基中接种步骤S1所述荷叶离褶伞种子培养液，接种量为5.5～10％；通入无菌空气，并在罐内压强为0.02MPa的条件下进行无菌培养；S4、无菌培养第3d，在发酵培养基中加入灭菌Na2SeO3溶液，使每1mL发酵培养基中含有4μg Na2SeO3，继续发酵5
‑
10d；S5、发酵结束后，将发酵液经300目滤网过滤，蒸馏水反复洗涤菌球后进行干燥，称重即得富硒荷叶离褶伞菌丝体菌丝体。2.根据权利要求1所述小规模化生产富硒荷叶离褶伞菌丝体的方法，其特征在于，步骤S1所述的摇床培养时间为5d。3.根据权利要求1所述小规模化生产富硒荷叶...

【专利技术属性】
技术研发人员：高慧娟，王雪梅，魏生龙，梁倩倩，王晓琴，
申请(专利权)人：河西学院，
类型：发明
国别省市：