【技术实现步骤摘要】
一种高通量筛选A
β
纤维形成抑制剂的方法
[0001]本专利技术涉及了高通量筛选
，具体涉及了一种高通量筛选Aβ纤维形成抑制剂的方法。
技术介绍
[0002]阿尔茨海默氏病的病理与不断累积的错误折叠的蛋白质聚集体(例如β
‑
淀粉样蛋白(Aβ)和Tau)引起的神经炎症和神经元死亡的发生密切相关。Aβ是由淀粉样前体蛋白(APP)通过顺序切割β
‑
和γ
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分泌酶产生的。所产生的包括Aβ(1
‑
40)和Aβ(1
‑
42)的片段被认为是毒性最高的形式，形成Aβ原纤维并在细胞外积聚，最终在阿尔茨海默氏病患者的大脑中产生老年斑。在阿尔茨海默氏病的早期阶段，Aβ仍可通过神经元中的自噬溶酶体途径(ALP)和泛素
‑
蛋白酶体途径(UPP)清除，或被小胶质细胞吞噬。但是，ALP和UPP均会随着年龄的增长而失调，使得Aβ的清除无法有效执行。因此，靶向抑制Aβ原纤维的形成已成为阿尔茨海默氏病的有希望的治疗策略。
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种高通量筛选Aβ纤维形成抑制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、生物膜干涉分析制备待测中草药提取物，然后用磷酸盐缓冲液将待测中草药提取物进行稀释得到工作液；制备生物素化的Aβ(1
‑
42)肽；将工作液和生物素化的Aβ(1
‑
42)肽注入生物传感器中，进行结合
‑
解离，得到结合和解离图、动力学常数，得到待测中草药提取物与生物素化的Aβ(1
‑
42)肽的结合情况；步骤2、液质联用分析采用步骤1相同的方法，将待测中草药提取物与生物素化的Aβ(1
‑
42)肽在生物传感器中连续进行N次结合
‑
解离操作，收集解离液，其中N为大于或等于5的自然数；然后将收集的解离液在氮气流下进行干燥处理；之后，将干燥后的解离液用有机溶剂进行复溶，复溶液放入超高效液相色谱串联质谱检测仪器中，得到代表性总离子色谱图，分析谱图，筛选出具有与Aβ纤维直接结合作用的化合物，即为Aβ纤维形成抑制剂。2.根据权利要求1所述的高通量筛选Aβ纤维形成抑制剂的方法，其特征在于，所述步骤1中，待测中草药提取物具体由以下方法制备而成的：将待测中草药进行称量、粉碎，然后用8
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12倍体积的水、乙醇或甲醇进行蒸馏提取1
‑
2h，重复提取3
‑
5次，合并提取液，过滤，浓缩，然后将浓缩后的提取物用DMSO溶解为200～500mg/mL的溶液，得到待测中草药提取物。3.根据权利要求1所述的高通量筛选Aβ纤维形成抑制剂的方法，其特征在于，所述步骤1中，所述生物素化的Aβ(1
‑
42)肽主要由以下方法制备而成的：将摩尔比为2
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6:1的生物素与Aβ(1
‑
42)肽溶液进行混合，然后在室温下孵育30min～60min，得到生物素化的Aβ(1
‑
42)肽。4.根据权利要求3所述的高通量筛选Aβ纤维形成抑制剂的方法，其特征在于，所述Aβ(1
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【专利技术属性】
技术研发人员：吴安国，秦大莲，吴建明，周晓刚，邱文乔，唐勇，郭垊松，朱凤丹，
申请(专利权)人：西南医科大学，
类型：发明
国别省市：
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