QGK三肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种QGK三肽，其氨基酸序列为Gln

【技术实现步骤摘要】
QGK三肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及生物活性肽领域，特别涉及QGK三肽及其应用。

技术介绍

[0002]溃疡性结肠炎(UC)是一种慢性、特发性结肠粘膜炎症性疾病，起始于直肠，通常以连续性方式向近端直肠甚至结肠蔓延，临床症状以血性腹泻为典型。相比于克罗恩病，UC更为普遍。据统计，北美地区和北欧地区患病率最高，每10万人中就有9～20例溃疡性结肠炎患者，而南半球和东部地区国家患病率相对较低。近年来，随着饮食习惯西式化、人们生活压力增加，UC患病率显著上升，呈逐年递增趋势，这给公共卫生事业带来了沉重的负担。溃疡性结肠炎的发病率呈双峰型，主要发病高峰在15
‑
30岁之间，第二个较小的发病高峰在50
‑
70岁之间。
[0003]肠上皮细胞是抵御外来病原体的第一层物理屏障。正常状态下，上皮层被黏液层覆盖，黏膜层是宿主免疫细胞和腔内微生物之间的物理屏障，并结合抗菌肽(防御素)一起来帮助宿主抵御病原微生物入侵。而UC患者体内，某些结肠黏蛋白亚型(mucin
‑
2)硫化物的合成减少，上皮屏障受损，通透性增加，黏膜反应异常。炎症期间持续的上皮损伤及防御素降低导致肠道菌群的暴露和炎症的放大(Frank,Amand,Feldman,Boedeker,Harpaz,&Pace,2007；Simms,Doecke,Walsh,Huang,Fowler,&Radford
‑
Smith,2008)。肠道固有层由树突状细胞和巨噬细胞组成，它们将抗原呈递给B细胞和T细胞，进而激活获得新免疫反应。在UC患者中，激活和成熟的树突状细胞数量随着外部刺激的增加而增加，它们的数量与疾病的发展息息相关。
[0004]在本专利技术中，申请人公开了一种抗炎三肽的氨基酸序列，并检测了其在体外炎症模型和体内炎症模型中表现的抗炎效果，结果表明该三肽在体内体外均能抑制促炎因子的表达，具有良好的抗炎效果。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是解决现有技术的不足，提供一种QGK三肽，其氨基酸序列为Gln
‑
Gly
‑
Lys，分子量为331Da。该QGK三肽通过固相合成法获得，能够有效预防并缓解炎症性肠病，可以应用在制备预防和/或缓解炎症性肠病的食品或药物中。
[0006]本专利技术的另一目的是提供一种药物组合物，其活性成分包括QGK三肽，用于预防和/或缓解炎症性肠病。该药物组合物还可以包括溶剂或可药用辅助剂。
[0007]本专利技术采用TNF
‑
α诱导人肠上皮细胞(HT
‑
29)体外炎症模型来研究在2、4、8、16mM的浓度该三肽的抗炎活性。测定典型细胞因子IL
‑
8的含量，同时运用WST
‑
1试剂盒测定细胞活力。本专利技术采用RT
‑
PCR结合Western
‑
blot，验证其抗炎作用机制。本专利技术采用DSS诱导Balb/c小鼠急性结肠炎模型，研究该三肽在体内的抗炎活性。
[0008]本专利技术的有益效果为：本专利技术提供了一种QGK三肽，通过试验验证发现本专利技术的
QGK三肽能够有效降低促炎因子mRNA表达水平，具有一定的医学价值，可用于开发预防和/或辅助治疗炎症性肠病的食品或药物。
附图说明
[0009]图1所示为QGK对TNF
‑
α诱导的HT
‑
29细胞IL
‑
8的分泌影响及其对细胞活力的影响情况图；
[0010]图2所示为QGK对TNF
‑
α诱导的HT
‑
29细胞因子mRNA表达水平的影响情况图；
[0011]图3所示为QGK对TNF
‑
α诱导的HT
‑
29细胞NF
‑
κB通路中关键蛋白表达水平的影响情况图；
[0012]图4所示为QGK对小鼠的综合影响情况图，其中，(A)为QGK对DSS诱导的小鼠体重减轻的影响情况图，(B)为第14天各组小鼠体重变化情况图，(C)为QGK对DSS诱导的小鼠临床症状的影响情况图，(D)为QGK对DSS诱导的结肠长度的影响情况图；
[0013]图5所示为QGK对小鼠病变程度的影响情况图和个组小鼠结肠组织评分图，其中，(A)为QGK对DSS诱导的小鼠结肠组织病变程度的影响情况图，(B)为各组小鼠结肠组织评分图；
[0014]图6所示为QGK对DSS诱导的小鼠结肠组织中MPO表达水平的影响情况图；
[0015]图7所示为QGK对DSS诱导的小鼠结肠组织中促炎细胞因子TNF
‑
α和IL
‑
6含量的影响情况图；
[0016]图8所示为QGK对DSS诱导的小鼠结肠组织中促炎细胞因子mRNA表达水平的影响情况图。
具体实施方式
[0017]以下将结合实施例和附图对本专利技术的构思及产生的技术效果进行清楚、完整的描述，以充分地理解本专利技术的目的、方案和效果。
[0018]一、三肽QGK在体外炎症模型中抗炎活性的验证及其作用机制的探讨
[0019]1.炎症模型建立
[0020]以3
×
105cells/mL的密度将细胞种于细胞培养板上，每隔24h换液，培养5
‑
7天待细胞融合到85％左右，弃去培养液，用HBSS缓冲液洗2次。首先加入用含5％FBS的DMEM
‑
F12新鲜培养液配置的不同浓度的三肽样品预孵育2h，其次再向培养板中加入TNF
‑
α(使其终浓度为5ng/mL)继续孵育4h。孵育结束后，收集细胞上清液用于ELISA测定，下层细胞可根据不同实验要求进行处理。
[0021]2.细胞活力测定
[0022]参考Mengya Zhang(Zhang et al.,2017；M.Zhang et al.,2018)等人所述方法对处理后细胞进行活力测定。实验细胞经HBSS清洗三次后，每孔加入等量WST
‑
1稀释液均匀铺满细胞培养板，放入细胞培养箱中避光孵育15分钟左右，待溶液颜色变化显著时在450nm处测定OD值，按照如下公式计算细胞活力：
[0023]细胞活率(％)＝(As450/Ac450)x100％，其中，As450代表样品处理组，Ac450代表阴性未处理组。
[0024]3.IL
‑
8含量测定
[0025]参考史雅凝等人(史雅凝，2015)的方法对IL
‑
8含量进行测定。将样品稀释五倍后用于检测。
[0026]4.RNA
‑
PCR检测
[0027]实验细胞经冰冷的HBSS清洗三次后，去除表面液体后加入适量TransZol裂解液，充分裂解后根据TransZOL Up Plus RNA Kit试剂盒提本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.QGK三肽，其特征在于，其氨基酸序列为Gln
‑
Gly
‑
Lys。2.根据权利要求1所述的QGK三肽，其特征在于，其分子量为331Da。3.根据权利要求1所述的QGK三肽，其特征在于，其通过固相合成法获得。4.权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：涂勇刚，李媛，赵燕，徐明生，姚瑶，吴娜，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：