含有固定化免疫球蛋白和脂质基抗原的硝化纤维素片材及其用途制造技术

本发明专利技术涉及硝化纤维素片材，其包含固定化抗体和脂质基抗原。本发明专利技术还涉及一种试剂盒，其包含所述硝化纤维素片材。本发明专利技术还涉及所述片材的用途，特别是在检测指示感染的抗体的方法中的用途。法中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有固定化免疫球蛋白和脂质基抗原的硝化纤维素片材及其用途
[0001]本专利技术涉及硝化纤维素片材，其包含固定化抗体和脂质基抗原。本专利技术还涉及一种试剂盒，其包含所述硝化纤维素片材。本专利技术还涉及所述片材的用途，特别是在检测指示感染的抗体的方法中的用途。
[0002]绪论
[0003]许多感染原(例如细菌、病毒和真菌)会产生抗原，这些抗原会引起受感染对象的免疫反应。该免疫反应伴随着针对这些抗原的特异性抗体的产生。因此，这些抗体是感染原(infectious agent)感染的指示。
[0004]许多抗原暴露在感染原的外表面上或从感染原的外表面排出。一类特别重要的抗原是脂质基抗原(lipid based antigen)，因为许多脂质基抗原能够引发强免疫反应。

技术实现思路

[0005]本专利技术利用由脂质抗原引发的强免疫反应(potent immune response)，用于诊断。具体来说，在本专利技术中，固定化脂质抗原用于检测源自疑似受感染原感染的对象的样品中的抗体。这样就可以诊断出具有特定感染的对象。
[0006]感染性疾病的诊断通常涉及复杂、昂贵且耗时的测试，并且通常需要专门的实验室。
[0007]此外，常规实验室测试(例如，ELISA)需要大量抗原，这些抗原的量通常难以纯化或合成。因此，需要提供一种需要较少抗原的测试。
[0008]此外，常规测试仅诊断对象是否感染了特定感染原，而不能给出感染阶段的指示。
[0009]本专利技术旨在解决这些问题。
[0010]在第一方面中，本专利技术涉及一种硝化纤维素片材，其包含固定至硝化纤维素片材不同位置的如下物质：免疫球蛋白G；免疫球蛋白M；以及至少一种脂质基抗原，所述抗原能够结合响应于对象体内感染原的感染而产生的抗体。
[0011]在第二方面中，本专利技术涉及一种试剂盒，其包括：根据本专利技术第一方面的硝化纤维素片材，并且还包括：含有具有偶联检测标记物的抗IgG二抗的容器；以及含有具有偶联检测标记物的抗IgM二抗的容器。
[0012]在第三方面中，本专利技术涉及检测指示感染的抗体的方法，其包括：将至少一张如本专利技术第一方面所述的片材暴露于源自疑似受感染的对象的样品；通过用选自抗IgM二抗或抗IgG二抗的具有偶联检测标记物的二抗孵育来确定样品中是否存在与固定在片材上的抗原结合的一抗；以及检测二抗与所述一抗的结合，其中所述一抗与固定在片材上的抗原结合，其中，所述一抗与二抗的结合导致阳性信号，其中，用抗IgM二抗孵育时的阳性信号表示感染早期，而用抗IgG二抗孵育时的阳性信号表示感染后期。
[0013]在第四方面中，本专利技术还涉及如第一方面所述的片材的用途，用于区分感染早期和感染后期和/或用于区分活动性和非活动性感染。
[0014]本专利技术人发现可以将脂质衍生的抗原和免疫球蛋白固定在同一硝化纤维素片材
上。对脂质抗原的强免疫反应可以获得强检测信号并获得可靠结果。重要的是，将脂质抗原固定在硝化纤维素上仅需要有限量的抗原，这很重要，因为抗原的纯化和合成通常既耗时又昂贵。例如，仅0.2ng的固定化抗原就足以获得良好的信号，而常规技术(例如ELISA)需要250μg每96孔板。因此，本专利技术提供了所需抗原量的重要减少。
[0015]这些片材易于在检测指示感染的抗体的方法中使用，不需要复杂、昂贵且耗时的测试和专门实验室。在这方面，本专利技术的试剂盒包括用于实施本专利技术方法的部件，而无需昂贵且专门的设备和从业者，例如，研究人员将仅需要标准实验室设备。这使得本专利技术适用于诊断，但也适用于不旨在诊断感染的研究目的。
[0016]重要的是，本专利技术还可以确定感染的状态。IgM是响应感染对象暴露于来自感染原的抗原而出现的第一种抗体。因此，针对感染原抗原的IgM抗体的存在表明这些感染原的感染早期。另一方面，IgG抗体是在抗体反应成熟(maturation)后产生的，其主要参与后期二次免疫反应。因此，针对感染原抗原的IgG抗体的存在表明这些感染原的感染后期。因此，本专利技术使得可以在仅使用一种测试基材(即硝化纤维素片材)的简洁测定中确定是存在感染早期还是感染后期。这可以确定针对由感染原引起的感染所产生的免疫球蛋白G(IgG)和/或免疫球蛋白M(IgM)，并可以在一次单一测定中，通过使用标准实验室设备来确定感染状态。
具体实施方式
[0017]本专利技术基于使用硝化纤维素片材提供一种易于使用的检测指示感染的抗体的存在，所述硝化纤维素片材包括固定在其不同(分开)位置处的如下物质：免疫球蛋白G；免疫球蛋白M；和至少一种脂质基抗原，所述抗原能够结合响应于对象体内感染原的感染而产生的抗体。
[0018]如果这些抗原源自或基于该特定感染原的抗原，则将片材暴露于源自怀疑患有特定感染原感染的对象的样品会导致与固定化抗原结合。这些抗体的结合可以通过使用其上偶联有检测标记物的二抗来进行检测，例如报告酶抗Ig偶联物。该偶联物包含检测标记物部分和能够识别与基材上固定化抗原结合的免疫球蛋白(抗体)的部分。换言之，这些偶联物能够识别免疫球蛋白并能够产生可检测信号。如果样品中确实存在针对固定化抗原的一抗，则检测标记物将提供信号，例如如果标记物是报告酶，则由报告酶提供。用抗IgM二抗偶联物孵育时的阳性信号表示感染早期，另一方面，用抗IgG孵育时的阳性信号表示感染后期。固定在片材上的IgG和IgM用作阳性/阴性对照。
[0019]在本专利技术的上下文中，响应于对象体内感染原的感染而产生的抗体(IgG、IgM、IgA)可被视为一抗，而另一方面，具有偶联检测标记物的抗Ig(抗免疫球蛋白)用作二抗部分，其可以与一抗结合。在免疫学领域，一抗和二抗是两类抗体的常见表达，这些抗体根据它们是直接与抗原或蛋白质结合(这些是一抗)还是靶向另一种抗体(一抗)进而又与抗原或蛋白质结合(后面这些抗体是二抗)而分类。
[0020]允许响应于对象感染产生的抗体与本专利技术的硝化纤维素片材的固定化抗原结合，因此可以被视为一抗，而抗Ig偶联物通过其二抗部分与一抗结合，并通过其检测标记物(例如报告酶部分)提供信号检测和放大。在本专利技术的上下文中，二抗可以与一抗结合，一抗与固定在硝化纤维素基材上的抗原直接结合。在这方面，抗IgM二抗是特异性识别并结合IgM
的抗体，抗IgG二抗是特异性识别并结合IgG的抗体，抗IgA二抗是特异性识别并结合IgA的抗体。
[0021]作为解释，在免疫标记过程中，一抗的Fab域与固定化抗原结合，并将其Fc域暴露于具有检测标记物的二抗。因此，二抗的Fab域可以与一抗的Fc域结合。由于Fc域在同一动物类别中是恒定的(例如在人类类别中)，因此只需要一种类型的二抗就可以与动物类别中的多种类型一抗结合。这允许仅使用一种类型的二抗来检测多种类型的一抗。因此，二抗通常是市售可购得的。此外，多个二抗可以与单个一抗结合，从而提高灵敏度和信号放大。
[0022]与二抗偶联的检测标记物进而允许对结合进行检测。二抗可与报告酶(如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP))；或荧光染料(如荧光素异硫氰酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.硝化纤维素片材，其包含固定至硝化纤维素片材不同位置的如下物质：
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免疫球蛋白G；
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免疫球蛋白M；和
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至少一种脂质基抗原，所述抗原能够与响应于对象体内感染原的感染而产生的抗体结合。2.如权利要求1所述的硝化纤维素片材，其包含固定于其上的多种不同脂质基抗原，所述抗原能够与响应于对象体内感染原的感染而产生的抗体结合。3.如权利要求1或2所述的硝化纤维素片材，多种不同脂质基抗原的脂质基抗原各自能够与响应于相同感染原的感染而产生的抗体结合。4.如前述权利要求中任一项所述的硝化纤维素片材，其中，所述多种不同脂质基抗原中的至少一种所述脂质基抗原能够与指示感染早期的抗体结合，并且至少一种其它所述脂质基抗原抗能够与指示感染后期的抗体结合。5.如前述权利要求中任一项所述的硝化纤维素片材，其中，所述脂质基抗原源自或基于细菌脂质基抗原，或者所述多种不同脂质基抗原源自细菌脂质基抗原或基于细菌脂质基抗原。6.如前述权利要求中任一项所述的硝化纤维素片材，其中，一种或多种所述抗原源自分枝杆菌脂质基抗原或基于分枝杆菌脂质基抗原。7.如前述权利要求中任一项所述的硝化纤维素片材，其中所述多种不同脂质基抗原包括分枝菌酸衍生抗原，或者，其中所述抗原是分枝菌酸衍生抗原。8.如权利要求7所述的硝化纤维素片材，其中，所述多种不同脂质基抗原包括如下物质中的两种或更多种：a)至少一种分枝菌酸衍生抗原；b)至少一种结核菌素腺苷抗原；c)至少一种二酰基糖脂抗原；d)至少一种甘露糖基磷酸酮抗原。9.如权利要求8所述的硝化纤维素片材，其中，所述多种不同脂质基抗原包括：a)至少一种分枝菌酸衍生抗原；b)至少一种结核菌素腺苷抗原；c)至少一种二酰基糖脂抗原；以及d)至少一种甘露糖基磷酸酮抗原。10.如前述权利要求中任一项所述的硝化纤维素片材，其还包含固定至硝化纤维素片的一种或多种蛋白质基抗原，所述蛋白质基抗原能够与响应对象体内感染原的感染而产生的抗体结合，优选固定在硝化纤维素片材上的脂质基抗原和蛋白质基抗原各自能够与响应相同感染原的感染而产生的抗体结合。11.如前述权利要求中任一项所述的硝化纤维素片材，其还含有固定至硝化纤维素片材的免疫球蛋白A。12.一种试剂盒，其包含如前述权利要求中任一项所述的硝化纤维素片材，并且还含有：含有具有偶联检测标记物的抗IgG二抗的容器；以及
含有具有偶联检测标记物的抗IgM二抗的容器。13.如权利要求12所述的试剂盒，其还包含：含有具有偶联检测标记物的抗IgA二抗的容器。14.如权利要求12或13所述的试剂盒，其中，所述抗IgG二抗是报告酶抗IgG偶联物；所述抗IgM二抗是报告酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：欣日知识产权有限公司，
类型：发明
国别省市：