BTN3A结合蛋白及其用途制造技术

公开了特异性结合BTN3A且活化Vγ9/Vδ2T细胞的细胞溶解功能的抗BTN3A活化抗体片段。本公开更具体地涉及包含此类活化抗体片段的特异性抗BTN3A结合蛋白及其在制备用于治疗癌症病症，特别是易于用活化γδT细胞治疗的癌症的新型药物中的用途。症的新型药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】BTN3A结合蛋白及其用途

技术介绍

[0001]迄今为止，已经提出了依赖于T细胞调节的各种治疗和疫苗策略；针对CTLA
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4、PD
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1和PD
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L1的几种免疫调节抗体已经被全世界多个管理机构批准用于临床使用。尽管这些药物代表了癌症治疗中的主要进步，但对于大部分对目前可用的治疗没有响应的癌症患者群体仍然存在未满足的医疗需求。
[0002]BTN3A1、BTN3A2和BTN3A3同种型在淋巴细胞和外周血单核细胞(PBMC)上表达。此外，文献和数据库分析表明，BTN3A成员在血液来源的各种肿瘤(诸如急性髓性白血病(AML))和实体瘤(诸如乳腺癌、结肠癌、卵巢癌，胃癌和胰腺导管腺癌(PDAC))中广泛表达。PDAC组织的免疫组织化学分析证实了BTN3A在所有测试的肿瘤样品中的表达，而在对照胰腺正常组织中不存在或几乎检测不到。此外，免疫组织化学显示上皮BTN3A表达与高度严重上皮卵巢癌患者的较好预后显著相关，且与较高密度的浸润性T细胞相关。
[0003]此外，对来自具有39个恶性肿瘤的总体生存结果的约18,000例人类肿瘤的表达特征的分析，鉴定肿瘤浸润性γδT细胞(典型地，Vγ9Vδ2T细胞)为最显著有利的癌症范围预后特征(Gentles等，2015)。这些数据已通过最近的研究证实，显示大量肿瘤浸润性Vγ9Vδ2 T淋巴细胞与结直肠或前列腺腺癌或血液恶性肿瘤患者队列中的有利结果相关(Tosolini等，2017)。
[0004]研究表明，结合靶细胞的抗BTN3A抗体触发源自实体瘤的Vγ9Vδ2T细胞的活化(对于综述，参见Blazquez等，2018)。考虑到γδT细胞(典型地，Vγ9Vδ2 T细胞)对抗肿瘤应答的强大潜力，BTN3A
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抗体介导的肿瘤细胞的引发和致敏对于Vγ9Vδ2 T细胞的杀伤成为了治疗癌症(用于实体和血液恶性肿瘤)的有吸引力的和新的治疗机会。
[0005]专利公开WO2012080351、EP2651441、EP2946791、US20140322235、WO2012080769涉及能够活化或抑制Vγ9Vδ2 T细胞的细胞溶解功能、细胞因子产生和增殖的抗CD277的各种抗体。
[0006]特别地，WO2012080769描述了称为诸如mAb20.1和7.2的特异性单克隆鼠抗体，其具有活化Vγ9Vδ2 T细胞的细胞溶解功能、细胞因子产生和增殖的能力，以及它们在治疗癌症和感染病症中的用途。另外，WO2012080769描述了称为mAb 103.2的特异性鼠单克隆抗体，其具有抑制Vγ9Vδ2 T细胞的细胞溶解功能、产生和增殖的相反活性。因此，这类鼠抗体mAb 103.2和相应的嵌合的和人源化形式被认为可用于治疗炎性疾病。
[0007]Palakodeti等，2012描述了mAb 103.2的scFv片段(Journal of biological chemistry,287(39),Pages 32780
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32790)。
[0008]专利技术人如今惊讶地发现，mAb 103.2的一些片段，诸如Fab或F(ab
’
)2片段显示出对于BTN3A的活化特性，且能够活化Vγ9Vδ2 T细胞的细胞溶解功能、细胞因子产生和/或增殖。
[0009]因此，本公开涉及包含mAb 103.2的此类活化抗体片段的BTN3A结合蛋白及其在制备用于治疗癌症病症的新型药物中的用途，特别是易于用活化γδT细胞(典型地，Vγ9Vδ2 T细胞)治疗的癌症。
[0010]专利技术简述
[0011]本公开涉及分离的BTN3A结合蛋白，其包含至少一种BTN3A抗体片段，所述BTN3A抗体片段具有：
[0012]i.重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:1的H
‑
CDR1、SEQ ID NO:2的H
‑
CDR
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2和SEQ ID NO:3的H
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CDR3；和，
[0013]ii.轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:4的L
‑
CDR1、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:17的L
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CDR2和SEQ ID NO:6的L
‑
CDR3；
[0014]且其中所述BTN3A结合蛋白具有以下特性：
[0015]i.如通过生物层干涉测量法(BLI)技术所测量，其以10nM或更小的K
D
，优选5nM或更小的K
D
结合人BTN3A1，和/或，
[0016]ii.如在CD107脱粒测定中所测量，其在与癌细胞，诸如Daudi或SKOV
‑
3细胞共培养中诱导γδT细胞(诸如Vγ9Vδ2 T细胞)的活化，其中EC
50
为10nM或更低，优选1nM或更低，和/或，
[0017]iii.其诱导PBMC中γδT细胞(诸如Vγ9Vδ2 T细胞)的活化和增殖。
[0018]在特定的实施方案中，所述BTN3A抗体片段包含
[0019](i)SEQ ID NO:18的重链可变区，和，
[0020](ii)SEQ ID NO:19的轻链可变区。
[0021]在可与前述实施方案组合的特定的实施方案中，所述抗BTN3A抗体片段选自scFv、Fab或(Fab)
’2片段。
[0022]在可与前述实施方案组合的特定的实施方案中，本公开的所述BTN3A结合蛋白与BTN3A的结合是一价或二价的。
[0023]在可与前述实施方案组合的特定的实施方案中，本公开的所述BTN3A结合蛋白基本上由选自scFv、Fab或F(ab)
’2片段的BTN3A抗体片段组成，例如其由包含SEQ ID NO:18的VH结构域和SEQ ID NO:19的VL结构域的scFv组成。
[0024]在可与前述实施方案组合的特定的实施方案中，所述BTN3A结合蛋白是包含与一个或多个其他蛋白质结构域融合的所述BTN3A抗体片段的融合蛋白。
[0025]所述BTN3A结合蛋白可用作药物，例如，用于治疗癌症，典型地是易于用γδT细胞(典型地Vγ9Vδ2 T细胞)治疗的癌症。
[0026]在可与前述实施方案组合的特定的实施方案中，所述BTN3A结合蛋白可用于治疗(i)实体瘤和/或(ii)血液癌症。
[0027]因此，本公开还涉及药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体组合的如上定义的BTN3A结合蛋白，任选地包含其他活性成分。
[0028]本公开还提供了用于在宿主细胞中重组产生如上定义的BTN3A结合蛋白的表达载体，其包含编码所述抗BTN3A结合蛋白的一种或多种核酸。
[0029]在特定的实施方案中，编码所述抗BTN3A结合蛋白的所述核酸包含如上定义的所述BTN3A抗体片段的重链和轻链的编码序列，典型地为SEQ ID 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.分离的BTN3A结合蛋白，其包含至少一种BTN3A抗体片段，所述BTN3A抗体片段具有(i)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:1的H
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CDR1，SEQ ID NO:2的H
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CDR
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2和SEQ ID NO:3的H
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CDR3；和，(ii)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:4的L
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CDR1，SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:17的L
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CDR2及SEQ ID NO:6的L
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CDR3；且其中所述BTN3A结合蛋白具有以下特性：(i)如通过生物层干涉测量法(BLI)技术所测量的，其以10nM或更小的K
D
，优选5nM或更小的K
D
结合人BTN3A1，和/或，(ii)其在与癌细胞，任选地Daudi和/或SKOV
‑
3细胞的共培养中诱导γδT细胞的活化，如在CD107脱粒测定中所测量的，其中EC
50
为10nM或更低，优选1nM或更低，和/或，(iii)其诱导PBMC中Vγ9Vδ2T细胞的活化和增殖。2.根据权利要求1所述的BTN3A结合蛋白，其中所述BTN3A抗体片段包含(i)SEQ ID NO:18的重链可变区，和，(ii)SEQ ID NO:19的轻链可变区。3.根据权利要求1或2所述的BTN3A结合蛋白，其中所述抗BTN3A抗体片段选自scFv、Fab或(Fab)
’2片段。4.根据权利要求1、2或3所述的BTN3A结合蛋白，所述BTN3A结合蛋白与BTN3A的结合是一价或二价的。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的BTN3A结合蛋白，其基本上由权...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：让波利与艾琳卡尔梅特研究所国家科学研究中心国家医疗保健研究所埃克斯马赛大学，
类型：发明
国别省市：