一种复合微生物制剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种复合微生物制剂及其制备方法，将枯草芽胞杆菌和玫瑰黄链霉菌复配成复合微生物制剂，通过分泌抗性物质、重寄生作用、诱导寄主细胞产生防卫结构、竞争作用等多种防病机制，实现防治效果，两种菌种间还具有协同增效作用，可有效稳定防治灰霉病、白粉病、香蕉枯萎病和大豆根腐病等土传病害病原菌，还可用于蔬菜、花卉、瓜果类、林木、中草药等作物田地在连作后的土壤改良。在连作后的土壤改良。

【技术实现步骤摘要】
一种复合微生物制剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物制剂
，特别涉及一种复合微生物制剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]现阶段，对于植物病害的防治主要以化学防治为主，然而长期使用化学防治剂不仅会产生污染，还会导致各种病害抗性越来越大，而且其在消灭有害菌的同时，也误杀了植物体内及土壤里的益生菌，破坏了植物的免疫系统，导致种植病害更难控制。
[0003]近年来，由于化学农药的公害问题日趋严重，生物防治因其具有无污染、无残留、难以产生抗药性、对生态环境和人类健康较安全等优点而日益受到人们重视，生物防治技术在植物病害防治中的应用备受关注。生物防治技术是指利用自然界存在的生防微生物,利用其活体或代谢产物使病原微生物的数量和活性均受到抑制,从而减少病害的发生或减缓其发生速率,以及降低病害的严重程度。
[0004]目前对于生物防治剂的研究多为单一菌株，CN103131657A《一株枯草芽孢杆菌及其生物防治制剂和应用》，公开了枯草芽孢杆菌在生物防治制剂中的应用，但单一菌株的防病机制单一、防治效果偏低且不稳定。而复合菌制剂又因存在多种菌株，使得复合菌制剂的保存和应用受多种条件的限制。

技术实现思路

[0005]针对上述问题，本专利技术提出一种复合微生物制剂及其制备方法。
[0006]本专利技术所述一种复合微生物制剂，包括：枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)和玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)。
[0007]进一步的，所述复合微生物制剂中的含有的活菌量为106‑
109cfu/g。
[0008]进一步的，所述复合微生物制剂中枯草芽胞杆菌和玫瑰黄链霉菌的CFU比为(4
‑
7)：(1
‑
2)。
[0009]进一步的，所述复合微生物制剂，还包括：固形剂。
[0010]进一步的，所述固形剂为硅藻土、高岭土、膨润土、云母粉中的至少一种。
[0011]本专利技术还提供了一种复合微生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0012](1)将枯草芽胞杆菌和玫瑰黄链霉菌分别接种到各自的活化培养基进行活化培养，再分别接种到各自的发酵培养基中进行发酵培养，得到各自得发酵菌液；
[0013](2)取发酵菌液分别过滤，收集菌质，烘干，粉碎，得菌粉，将各个菌种的菌粉混合，得复合菌粉；
[0014](3)将步骤(2)过滤所剩菌液混合，加入菌液体积4
‑
7倍的75
‑
95％v/v乙醇溶液，超声萃取5
‑
10min，超声功率为200
‑
230W，得复合菌液；
[0015](4)将复合菌液与固形剂混合，干燥，再加入复合菌粉，得复合微生物制剂。
[0016]进一步的，所述活化培养基可以为常规的各种能够培养枯草芽胞杆菌和玫瑰黄链霉菌的活化培养基。
[0017]进一步的，每升所述枯草芽胞杆菌发酵培养基，包括以下成分：2
‑
5g/L硫酸铵、1
‑
4g/L碳酸钙、0.2
‑
0.5g/L硫酸镁、0.1
‑
0.5/L氯化钠、3
‑
6g/L蛋白胨、10
‑
15g/L玉米淀粉、10
‑
15g/L麦芽粉、余量水。
[0018]进一步的，每升所述玫瑰黄链霉菌发酵培养基，包括以下成分：0.2
‑
0.5g/L磷酸氢二钾、0.3
‑
0.8g/L硝酸铵、2
‑
4g/L碳酸钙、5
‑
10g/L酒石酸钾钠、0.2
‑
0.8g/L柠檬酸钠、10
‑
20g/L淀粉、8
‑
12g/L花生饼粉、14
‑
22g/L玉米浆、余量水。
[0019]进一步的，本专利技术还提供了所述复合微生物制剂在防治土传病害病原菌和/或制备土壤改良剂中的应用。
[0020]进一步的，所述土传病害病原菌包括但不限于灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、单丝壳菌(Sphaerotheca fuliginea)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、大丽轮枝菌(Verticiullim dahliae Kleb)和立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)。
[0021]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0022]本专利技术将枯草芽胞杆菌和玫瑰黄链霉菌复配成复合微生物制剂，通过分泌抗性物质、重寄生作用、诱导寄主细胞产生防卫结构、竞争作用等多种防病机制，实现防治效果，两种菌种间还具有协同增效作用，可有效稳定防治灰霉病、白粉病、香蕉枯萎病和大豆根腐病等土传病害病原菌，还可用于蔬菜、花卉、瓜果类、林木、中草药等作物田地在连作后的土壤改良。
[0023]本专利技术在活化菌种后进行发酵培养，发酵结束后，分离菌质和发酵菌液，将菌质制备成干粉，混合萃取发酵菌液中的活性物质，再将萃取后的复合菌液与固形剂配比，制成粉状制剂，最后再与菌粉混合，可有效保存菌粉。
具体实施方式
[0024]为了更好理解本专利技术
技术实现思路
，下面提供具体实施例，对本专利技术做进一步的说明。
[0025]本专利技术使用的枯草芽胞杆菌的商品号为ACCC 03221，玫瑰黄链霉菌的商品号为ACCC 40415。
[0026]本专利技术使用的淡紫灰链霉菌的商品号为ACCC40024。
[0027]本专利技术实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0028]本专利技术实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0029]实施例1
[0030]一种复合微生物制剂，包括：枯草芽胞杆菌、玫瑰黄链霉菌和硅藻土，所述枯草芽胞杆菌和玫瑰黄链霉菌的CFU比为5：2。
[0031]复合微生物制剂中的含有的活菌量为108cfu/g。
[0032]一种复合微生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0033](1)将枯草芽胞杆菌和玫瑰黄链霉菌分别接种到PDA培养基中，在28℃活化培养6h，进行活化培养，再将枯草芽胞杆菌接种到枯草芽胞杆菌发酵培养基中，在32
‑
35℃，pH7的条件下培养72h，得枯草芽胞杆菌发酵菌液；将玫瑰黄链霉菌接种到玫瑰黄链霉菌发酵培养基中，在30
‑
32℃培养144h，得到玫瑰黄链霉菌发酵菌液；
[0034]每升所述枯草芽胞杆菌发酵培养基，包括以下成分：3g/L硫酸铵、2g/L碳酸钙、0.3g/L硫酸镁、0.5/L氯化钠、35g/L蛋白胨、12g/L玉米淀粉、12g/L麦芽粉、余量水；
[0035]每升所述玫瑰黄链霉菌发酵培养基，包括以下成分：0.3g/L磷酸氢二钾、0.5g/L硝酸铵、3g/L碳酸钙、6g/L酒石酸钾钠、0.5g/L柠檬酸钠、15g/L淀粉10本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合微生物制剂，其特征在于，包括：枯草芽胞杆菌和玫瑰黄链霉菌。2.如权利要求1所述的复合微生物制剂，其特征在于，所述复合微生物制剂中的含有的活菌量为106‑
109cfu/g。3.如权利要求2所述的复合微生物制剂，其特征在于，所述复合微生物制剂中枯草芽胞杆菌和玫瑰黄链霉菌的CFU比为(4
‑
7)：(1
‑
2)。4.如权利要求2所述的复合微生物制剂，其特征在于，所述复合微生物制剂，还包括固形剂。5.如权利要求4所述的复合微生物制剂，其特征在于，所述固形剂为硅藻土、高岭土、膨润土、云母粉中的至少一种。6.如权利要求4所述的复合微生物制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将枯草芽胞杆菌和玫瑰黄链霉菌分别接种到各自的活化培养基进行活化培养，再分别接种到各自的发酵培养基中进行发酵培养，得到各自得发酵菌液；(2)取发酵菌液分别过滤，收集菌质，烘干，粉碎，得菌粉，将各个菌种的菌粉混合，得复合菌粉；(3)将步骤(2)过滤所剩菌液混合，加入菌液体积4
‑
7倍的乙醇溶液，超声萃取5
‑
10min，超声功率为200
‑
230W，得复合菌液；(4)将复合菌液与固形剂混合，干燥，再加入复合菌粉，得复合微生物制剂。7.如权利要求6所述的复合微生物制剂的制备方法，其特征在于，每升所述枯草芽胞杆菌发酵培养基，包括以下成分：2
‑
5g/L硫酸铵、1
‑
4g...

【专利技术属性】
技术研发人员：解晓燕，
申请(专利权)人：海南金雨丰生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：