一种用于指导焦虑症用药的相关基因检测试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开一种用于指导焦虑症用药的相关基因检测试剂盒及应用，其包括检测CYP3A5基因rs776746位点和UGT2B15基因rs1902023位点的特异性引物和探针。本发明专利技术检测特异性好，灵敏度高，耗时短，且成本低：其采用ARMS引物设计，引物错配碱基提高扩增的特异性，灵敏度高，最低10ngDNA起始量，即可对人CYP3A5基因rs776746位点和UGT2B15基因rs1902023位点进行准确分型；PCR反应只需要不足1h就可以完成扩增反应，耗时较短，在临床上可以进行快速检测；所需试剂耗材均为临床上常见的试剂，成本较低，便于临床的推广。便于临床的推广。便于临床的推广。

【技术实现步骤摘要】
一种用于指导焦虑症用药的相关基因检测试剂盒及应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种用于指导焦虑症用药的相关基因检测试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]焦虑症是一种精神疾病，全球大约12％的人口患有焦虑症，女性发病率约是男性的两倍。焦虑症主要通过认知行为疗法和药物进行治疗。目前常用的抗焦虑药物包括苯二氮类药物、β受体阻断剂、丁螺环酮等。焦虑症患者在治疗过程中常面临选药周期长，治疗效果不佳或药物毒副作用的风险。
[0003]药物基因组学检测有助于医生在给患者初次诊疗时，发现存在不良反应和治疗失败风险的个体，从而帮助医生选择合适的药物并制定科学的起始剂量；并在治疗过程中，从基因的角度寻找发生不良反应和无应答或应答率低的原因，有助于及时调整治疗方案，改善治疗效果。根据已有的多个针对抗精神类用药基因检测的社会经济学评估数据，药物基因组学在节省医疗成本、降低就医次数、提高治疗效果具有极大的帮助。
[0004]目前主要的抗焦虑药物包括奥沙西泮、劳拉西泮、咪达唑仑等，奥沙西泮为地西泮的主要活性代谢产物；而奥沙西泮和劳拉西泮片主要适用于焦虑障碍的短期治疗；而咪达唑仑具有典型的苯二氮卓类药理活性，可产生抗焦虑、镇静、催眠、抗惊厥及肌肉松弛作用。
[0005]依据《药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南(试行)》2015年版和药物基因相关数据库pharmgkb的描述，CYP3A5参与咪达唑仑的药物代谢，CYP3A5基因第3内含子内第22893位存在c.6986A>G的突变(rs776746，CYP3A5*3)，该突变可导致CYP3A5 mRNA异常剪接，引起终止密码子过早剪切CYP3A5蛋白，从而使其失去酶的活性，导致咪达唑仑代谢降和清除率低，导致血药浓度升高，引起不良反应的发生。而UGT2B15基因则参与了奥沙西泮和劳拉西泮的药物代谢，与CC型基因相比，AA型基因患者奥沙西泮和劳拉西泮清除率降低，因此对在选用焦虑症用药时对基因及其多态性检测是有必要的。
[0006]目前常采用的基因多态性检测技术主要包括测序技术、基因芯片技术、荧光PCR技术。而无论是一代测序技术还是二代测序技术均存有程序繁杂、耗时较长、操作繁琐、成本高等因素，限制了其在临床实验室的快速准确筛查；而基因芯片技术对设备和人员的要求都比较高，不适应少量位点的快速准备检测；荧光PCR技术进行多态性检测主要有TaqMan探针法和溶解曲线法，而目前针对CYP3A5基因rs776746多态性和UGT2B15基因rs1902023多态性检测的产品和相关文献中均较少见。

技术实现思路

[0007]因此，基于以上背景，本专利技术提供一种用于指导焦虑症用药的相关基因检测试剂盒及应用，其可对CYP3A5基因rs776746多态性和UGT2B15基因rs1902023多态性进行高灵敏度地检测，且耗时短，成本低。
[0008]本专利技术提供的技术方案为：
[0009]一种用于指导焦虑症用药的相关基因检测的试剂盒，其包括检测CYP3A5基因rs776746位点和UGT2B15基因rs1902023位点的特异性引物和探针。
[0010]进一步地，所述试剂盒包括检测CYP3A5基因rs776746位点的两个正向引物及一个反向共用引物、检测UGT2B15基因rs1902023位点的两个正向引物及一个反向共用引物。
[0011]进一步地，所述检测CYP3A5基因rs776746位点的引物为：
[0012]正向野生型引物rs776746
‑
Wt：5
’‑
GGTCCAAACAGGGAAGAGACAC
‑3’
(SEQ ID NO.1)；
[0013]正向突变型引物rs776746
‑
Mt：5
’‑
TGGTCCAAACAGGGAAGAGACAT
‑3’
(SEQ ID NO.2)；
[0014]反向共用引物rs776746
‑
R：5
’‑
GCCTTCAATTTTTCACTGACCT
‑3’
(SEQ ID NO.3)；
[0015]所述检测UGT2B15基因rs1902023位点的引物为：
[0016]正向野生型引物rs1902023
‑
Wt：5
’‑
GAATTTTCAGAAGAGAATCTTCCAAGTA
‑3’
(SEQ ID NO.4)；
[0017]正向突变型引物rs1902023
‑
Mt：5
’‑
GAATTTTCAGAAGAGAATCTTCCAAGTC
‑3’
(SEQ ID NO.5)
[0018]反向共用引物rs1902023
‑
R：5
’‑
AAGCATTGCATAAGACCAGGAT
‑3’
(SEQ ID NO.6)。
[0019]进一步地，所述探针包括CYP3A5共用探针rs776746
‑
P和UGT2B15共用探针rs1902023
‑
P，所述探针rs776746
‑
P和rs1902023
‑
P均为荧光探针；
[0020]所述探针rs776746
‑
P序列为：5
’‑
FAM
‑
TTCGTTAAGCTGGGTGGTACATACGTGG
‑
BHQ1
‑3’
(SEQ ID NO.7)；所述探针rs1902023
‑
P序列为：5
’‑
FAM
‑
AAGCCGAAGATGTCAACACAGTCACCTC
‑
BHQ1
‑3’
(SEQ ID NO.8)。
[0021]进一步地，其还包括内参基因CFTR的特异性引物和内参基因探针。
[0022]进一步地，所述内参基因的特异性引物为：
[0023]正向内参基因CFTR引物CFTR
‑
F：5
’‑
CCCCTTTTGTAGGAAGTCACC
‑3’
(SEQID NO.9)
[0024]反向内参基因CFTR引物CFTR
‑
R：5
’‑
GCTGGGTGTAGGAGCAGTGT
‑3’
(SEQID NO.10)。
[0025]进一步地，所述内参基因探针CFTR
‑
P为荧光探针，其序列为：
[0026]5’‑
VIC
‑
TATGACCCGGATAACAAGGAGGAACGC
‑
BHQ1
‑3’
(SEQID NO.11)。
[0027]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于指导焦虑症用药的相关基因检测试剂盒，其特征在于，其包括检测CYP3A5基因rs776746位点和UGT2B15基因rs1902023位点的特异性引物和探针。2.根据权利要求1所述的一种用于指导焦虑症用药的相关基因检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测CYP3A5基因rs776746位点的两个正向引物及一个反向共用引物、检测UGT2B15基因rs1902023位点的两个正向引物及一个反向共用引物。3.根据权利要求3所述的一种用于指导焦虑症用药的相关基因检测试剂盒，其特征在于，所述检测CYP3A5基因rs776746位点的引物为：正向野生型引物rs776746
‑
Wt：5
’‑
GGTCCAAACAGGGAAGAGACAC
‑3’
(SEQ ID NO.1)；正向突变型引物rs776746
‑
Mt：5
’‑
TGGTCCAAACAGGGAAGAGACAT
‑3’
(SEQ ID NO.2)；反向共用引物rs776746
‑
R：5
’‑
GCCTTCAATTTTTCACTGACCT
‑3’
(SEQ ID NO.3)；所述检测UGT2B15基因rs1902023位点的引物为：正向野生型引物rs1902023
‑
Wt：5
’‑
GAATTTTCAGAAGAGAATCTTCCAAGTA
‑3’
(SEQ ID NO.4)；正向突变型引物rs1902023
‑
Mt：5
’‑
GAATTTTCAGAAGAGAATCTTCCAAGTC
‑3’
(SEQ ID NO.5)；反向共用引物rs1902023
‑
R：5
’‑
AAGCATTGCATAAGACCAGGAT
‑3’
(SEQ ID NO.6)。4.根据权利要求1所述的一种用于指导焦虑症用药的相关基因检测试剂盒，其特征在于，所述探针包括CYP3A5共用探针rs776746
‑
P和UGT2B15共用探针rs1902023
‑
P，所述探针rs776746
‑
P和rs1902023
‑
P均为荧光探针；所述探针rs776746
‑
P序列为：5
’‑
FAM
‑
TTCGTTAAGCTGGGTGGTACATACGTGG
‑
BHQ1
‑3’
(SEQ ID NO.7)；所述探针rs1902023
‑
P序列为：5
’‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭建成，占闽宁，冯帅升，朱丹丹，孙晓晓，张悦，史健翔，许红恩，刘海芳，薛夏，柳丹华，秦亚平，薛滨雨，
申请(专利权)人：河南申友医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：